脆弱拟杆菌和/或其两性离子荚膜多糖的新应用制造技术

本发明专利技术涉及脆弱拟杆菌和/或脆弱拟杆菌的两性离子荚膜多糖的新应用，特别涉及脆弱拟杆菌和脆弱拟杆菌的两性离子荚膜多糖中的一种或多种在制备防治淋巴瘤的药物中的应用，所述脆弱拟杆菌的保藏号为CGMCC No.10685。本发明专利技术通过大量实验证明，保藏编号为CGMCC No.10685的脆弱拟杆菌及其两性离子荚膜多糖，可通过降低淋巴瘤细胞存活水平、抑制淋巴瘤增殖，从而有效地防治淋巴瘤。有效地防治淋巴瘤。有效地防治淋巴瘤。

【技术实现步骤摘要】
No.10685。
[0009]在其中一些实施例中，所述脆弱拟杆菌选自脆弱拟杆菌活菌体，经过灭活、基因重组、改造或修饰、减毒、化学处理、物理处理或灭活的脆弱拟杆菌，脆弱拟杆菌裂解物，以及脆弱拟杆菌液体培养上清液中的一种或多种。
[0010]在其中一些实施例中，所述两性离子荚膜多糖包含荚膜多糖A。
[0011]在其中一些实施例中，所述夹膜多糖A的重均分子量为80kDa
‑
90kDa。优选地，所述夹膜多糖A中，重均分子量分布于70kDa
‑
100kDa的部分占总量的70wt％
‑
80wt％，重均分子量/数均分子量(Mw/Mn)的比值为1.0
‑
1.3。
[0012]在其中一些实施例中，所述两性离子荚膜多糖中荚膜多糖A的含量超过95wt％。
[0013]在其中一些实施例中，所述淋巴瘤为T细胞淋巴瘤。
[0014]在其中一些实施例中，所述淋巴瘤为弥漫大B细胞淋巴瘤。
[0015]在其中一些实施例中，所述淋巴瘤为伯基特淋巴瘤。
[0016]在其中一些实施例中，所述两性离子荚膜多糖的制备方法包括以下步骤：
[0017](1)将发酵培养后的脆弱拟杆菌菌液离心收集沉淀物，即得脆弱拟杆菌菌泥；取菌泥，加入菌泥质量3倍
‑
10倍的纯化水使菌体重悬，用酸溶液调节其pH至2.0
‑
4.5，50
‑
120℃提取0.5h
‑
3.0h，冷却至室温，常温离心，取上清，得到粗糖溶液；
[0018](2)粗糖溶液经超滤膜超滤浓缩、除小分子杂质，至电导率稳定，收集回流液；
[0019](3)回流液中加入等体积40mmol/L Tris
‑
HCl转盐；离子交换柱层析，梯度洗脱，分段收集，SEC
‑
HPLC跟踪监测，合并206nm吸收峰为单一、对称峰的组分，超滤膜超滤，加入纯化水反复超滤，至电导率稳定，收集回流液，冻干，得到脆弱拟杆菌提取物。
[0020]在其中一些实施例中，步骤(1)中，所述离心为11000g
‑
13000g离心8min
‑
12min。
[0021]在其中一些实施例中，步骤(1)中，所述酸溶液可以是有机酸、无机酸和酸性缓冲液中的一种或多种。其中，无机酸可以是盐酸、硫酸、磷酸等；有机酸可以是乙酸、柠檬酸等。
[0022]在其中一些实施例中，步骤(2)中，所述超滤膜的切割分子量为3kDa
‑
100kDa。
[0023]在其中一些实施例中，步骤(3)中，所述离子交换柱优选为DEAE Sepharose Fast Flow的16mm
×
200mm，层析时的流速15mL/min
‑
25mL/min，pH5.0
‑
9.0含0.2mol/L NaCl 20mmol/L Tris
‑
HCl梯度洗脱25个柱体积，分段收集，100mL/瓶(组分)；所述超滤膜的切割分子量为10kDa。
[0024]在其中一些实施例中，所述药物的剂型包括丸剂、片剂、颗粒剂、胶囊、口服液、散剂、管饲制剂或者灌肠剂。
[0025]在其中一些实施例中，所述药物包括人药或兽药。
[0026]在其中一些实施例中，所述药物包含所述脆弱拟杆菌和所述脆弱拟杆菌的两性离子荚膜多糖中的一种或多种，以及药学上可以接受的辅料。
[0027]在其中一些实施例中，所述辅料包含稀释剂、润湿剂、黏合剂、崩解剂、润滑剂、色香味调节剂、溶剂、增溶剂、助溶剂、乳化剂、抗氧剂、金属络合剂、惰性气体、防腐剂、局部止痛剂、pH调节剂以及等渗或等张调节剂中的一种或者多种。
[0028]在其中一些实施例中，所述药物的给药方式包括口服给药、灌肠给药或者肠胃外给药。
[0029]在其中一些实施例中，所述药物的给药周期包括间歇性给药、周期性给药、持续性
给药或者长期给药。
[0030]本专利技术的另一目的是提供一种用于预治淋巴瘤的药物，其中，所述药物包含脆弱拟杆菌和脆弱拟杆菌的两性离子荚膜多糖中的一种或多种，所述脆弱拟杆菌的保藏号为CGMCC No.10685。
[0031]在其中一些实施例中，所述脆弱拟杆菌是脆弱拟杆菌活菌体，经过灭活、基因重组、改造或修饰、减毒、化学处理、物理处理或灭活的脆弱拟杆菌，脆弱拟杆菌裂解物，脆弱拟杆菌液体培养上清液中的一种或多种。
[0032]在其中一些实施例中，所述两性离子荚膜多糖含有荚膜多糖A。
[0033]在其中一些实施例中，所述荚膜多糖A的重均分子量为80kDa
‑
90kDa。优选地，所述荚膜多糖A中，重均分子量分布于70kDa100kDa的部分占总量的70wt％
‑
80wt％，重均分子量/数均分子量(Mw/Mn)的比值为1.0
‑
1.3。
[0034]在其中一些实施例中，所述荚膜多糖A的含量超过95wt％。
[0035]与传统技术相比，本专利技术具备如下有益效果：
[0036]本专利技术通过大量实验证明，保藏编号为CGMCC No.10685的脆弱拟杆菌及其两性离子荚膜多糖，特别是荚膜多糖A，可通过降低淋巴瘤细胞存活水平、抑制淋巴瘤增殖，有效地防治淋巴癌。
附图说明
[0037]图1为本专利技术实施例1的脆弱拟杆菌ZY
‑
312的菌落特征图；
[0038]图2为本专利技术实施例1的脆弱拟杆菌ZY
‑
312进行革兰氏染色后的显微镜观察图；
[0039]图3为本专利技术实施例2的荚膜多糖A核磁共振波谱仪分析的1H谱；
[0040]图4为本专利技术实施例2的荚膜多糖A核磁共振波谱仪分析的
13
C谱；
[0041]图5为本专利技术实施例2的荚膜多糖A核磁共振波谱仪分析的COSY谱；
[0042]图6为本专利技术实施例2的荚膜多糖A核磁共振波谱仪分析的HSQC谱；
[0043]图7为本专利技术实施例2的荚膜多糖A核磁共振波谱仪分析的HMBC谱；
[0044]图8为本专利技术实施例2制备得到的脆弱拟杆菌荚膜多糖A的结构单元的化学结构式；
[0045]图9为本专利技术实施例5中脆弱拟杆菌及其PSA对YAC
‑
1细胞增殖的影响；
[0046]图10为本专利技术实施例6中裸鼠体重增长曲线；
[0047]图11为本专利技术实施例6中裸鼠弥漫大B细胞淋巴瘤生长曲线。
具体实施方式
[0048]为了便于理解本专利技术，下面将对本专利技术进行更全面的描述。但是，本专利技术可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使对本专利技术的公开内容的理解更加透彻全面。
[0049]除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本专利技术的
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.脆弱拟杆菌和脆弱拟杆菌的两性离子荚膜多糖中的一种或多种在制备防治淋巴瘤的药物中的应用，所述脆弱拟杆菌的保藏号为CGMCC No.10685。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述脆弱拟杆菌选自脆弱拟杆菌活菌体，经过灭活、基因重组、改造或修饰、减毒、化学处理、物理处理或灭活的脆弱拟杆菌，脆弱拟杆菌裂解物，以及脆弱拟杆菌液体培养上清液中的一种或多种。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述两性离子荚膜多糖包含荚膜多糖A。4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述夹膜多糖A的重均分子量为80kDa
‑
90kDa。5.根据权利要求1至4任一项所述的应用，其特征在于，所述淋巴瘤包括T细胞淋巴瘤、弥漫大B细胞淋巴瘤和伯基特淋巴瘤中的一种或多种。6.根据权利要求1至4任一项所述的应用，其特征在于，所述药物包含所述脆弱拟杆菌和所述脆弱拟杆菌的两性离子荚...

【专利技术属性】
技术研发人员：王薇，梅云飞，郑丽君，常秀娟，
申请(专利权)人：广州知易生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：