8-羟基-2-脱氧鸟苷的检测方法技术

本发明专利技术提供了一种8

【技术实现步骤摘要】
8
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羟基
‑2‑
脱氧鸟苷的检测方法


[0001]本专利技术涉及生物检测领域，具体而言，涉及一种8
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羟基
‑2‑
脱氧鸟苷的检测方法。

技术介绍

[0002]DNA的氧化损伤能被各种因素诱导，包括内源性细胞代谢产物、化学物、电离和非电离辐射等，其机制主要与活性氧自由基产生有关，不同生物体(例如植物、动物、微生物或人等)内均存在多种DNA修复途径清除损伤。通过分析DNA加合物或DNA氧化损伤修复产物等生物学标志物，可以对生物体内氧化负荷进行检测，其中8
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羟基
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脱氧鸟苷与DNA氧化损伤明显相关，成为研究最多的DNA碱基氧化损伤修复产物。
[0003]目前分离检测8
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脱氧鸟苷的方法主要有高效液相色谱电化学法、标记薄层色谱法、免疫化学分析、荧光后标记、高效毛细管电泳法及气相色谱质谱法等。然而，上述方法都存在一定的缺陷，例如：气相色谱质谱法需先衍生化反应，衍生过程易产生副产物，导致假阳性结果。标记法的特异性有待提高，且易造成放射性污染。免疫化学法的专属性差，且发生交叉反应，导致检测值较真实值偏高。且现有技术中，对于8
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脱氧鸟苷的提取方法的关注少，仅使用单一溶剂对样品进行提取。

技术实现思路

[0004]本专利技术的主要目的在于提供一种8
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羟基
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脱氧鸟苷的检测方法，以解决现有技术中的8
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羟基
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脱氧鸟苷的检测中提取率低的问题。
[0005]为了实现上述目的，根据本专利技术的第一个方面，提供了一种8
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脱氧鸟苷的检测方法，该检测方法包括：S1，利用UPLC
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MS/MS联用建立8
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羟基
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脱氧鸟苷的浓度和峰面积的标准曲线；S2，用提取液对待测样品进行前处理，获得待检测液；S3，采用UPLC
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MS/MS联用对待检测液进行检测，得到8
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脱氧鸟苷的离子谱峰；根据标准曲线和离子谱峰换算得到待测样品中的8
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羟基
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脱氧鸟苷的含量；提取液包括75～85v/v％甲醇水溶液。
[0006]进一步地，S2包括：向待测样品中加入提取液，混合，离心，取上清液；将上清液过固相萃取柱，流出液即为待检测液；优选地，待测样品为如下任意一种：肌肉或尿液；优选地，待测样品为固体时，在加入提取液前，将待测样品进行剪碎、研磨或粉碎匀浆；优选地，研磨包括在液氮条件下研磨。
[0007]进一步地，固相萃取柱包括HLB固相萃取柱。
[0008]进一步地，提取液包括同位素内标；优选地，同位素内标包括胆酸
‑
D4；优选地，提取液中的同位素内标的浓度为200ng/mL；优选地，提取液的添加量为每克待测样品中加入2～5mL提取液，更优选为3mL。
[0009]进一步地，UPLC
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MS/MS联用所用的色谱柱为C18色谱柱；优选地，流动相包括A相和B相，A相为0.1％甲酸水溶液，B相为0.1％甲酸甲醇溶液，同时含有A相和B相时，A相和B相的体积比为0:100～95:5；优选地，UPLC
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MS/MS联用采用的离子源为电喷雾电离源；优选地，离子源的电压为4500V或
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4500V；优选地，离子源的温度为550℃。
[0010]进一步地，S3中采用梯度洗脱，梯度洗脱过程中，流动相自初始流动相开始以A相逐渐减小B相逐渐增加的方式进行梯度变化，至B相占比为100％，并以与初始流动相相同组成的流动相洗脱结束梯度洗脱，初始流动相中所A相与B相的体积比为95:5；优选地，梯度洗脱的流速为0.2～0.5mL/min，更优选为0.3mL/min。
[0011]进一步地，初始流动相洗脱的时间为0.5min，且初始流动相洗脱结束后在1.5min内，流动相中A相和B相的体积比自95:5逐渐变化至0:100，以B相洗脱2min后再以初始流动相进行洗脱1min。
[0012]进一步地，UPLC
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MS/MS联用所用的色谱柱的柱温为50℃；优选地，色谱柱的柱参数为100
×
2.1mm，1.8μm。
[0013]进一步地，S1包括：S11.精密称取8
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脱氧鸟苷，用甲醇水溶液溶解得8
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脱氧鸟苷母液；S12.将8
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脱氧鸟苷母液用甲醇水溶液稀释，获得8
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羟基
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脱氧鸟苷标准液；S13.利用UPLC
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MS/MS联用检测8
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羟基
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脱氧鸟苷标准液，获得8
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脱氧鸟苷标准液的峰面积；S14.以8
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脱氧鸟苷标准液与同位素内标的浓度比为X轴，8
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羟基
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脱氧鸟苷标准液与同位素内标的峰面积比为Y轴，建立标准曲线。
[0014]进一步地，8
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脱氧鸟苷标准液的浓度为0.125～500ng/mL；优选地，甲醇水溶液包括50v/v％甲醇水溶液。
[0015]应用本专利技术的技术方案，利用UPLC
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MS/MS联用技术，对待测样品中的8
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羟基
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脱氧鸟苷进行定量分析，提取率高。
附图说明
[0016]构成本申请的一部分的说明书附图用来提供对本专利技术的进一步理解，本专利技术的示意性实施例及其说明用于解释本专利技术，并不构成对本专利技术的不当限定。在附图中：
[0017]图1示出了根据本专利技术实施例1的8
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羟基
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脱氧鸟苷子离子的离子谱峰示意图；
[0018]图2示出了根据本专利技术实施例1的8
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羟基
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脱氧鸟苷标准曲线示意图。
具体实施方式
[0019]需要说明的是，在不冲突的情况下，本申请中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。下面将结合实施例来详细说明本专利技术。
[0020]如
技术介绍
所提到的，现有的对8
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羟基
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脱氧鸟苷的方法都存在一定的缺陷。因而，在本申请中专利技术人尝试利用UPLC
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MS/MS联用技术，对待测样品中的8
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羟基
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脱氧鸟苷进行定量分本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种8
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羟基
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脱氧鸟苷的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括：S1，利用UPLC
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MS/MS联用建立所述8
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羟基
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脱氧鸟苷的浓度和峰面积的标准曲线；S2，用提取液对待测样品进行前处理，获得待检测液；S3，采用所述UPLC
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MS/MS联用对所述待检测液进行检测，得到所述8
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羟基
‑2‑
脱氧鸟苷的离子谱峰；根据所述标准曲线和所述离子谱峰换算得到所述待测样品中的所述8
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羟基
‑2‑
脱氧鸟苷的含量；所述提取液包括75～85v/v％甲醇水溶液。2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述S2包括：向所述待测样品中加入提取液，混合，离心，取上清液；将所述上清液过固相萃取柱，流出液即为所述待检测液；优选地，所述待测样品为如下任意一种：肌肉或尿液；优选地，所述待测样品为固体时，在加入所述提取液前，将所述待测样品进行剪碎、研磨或粉碎匀浆；优选地，所述研磨包括在液氮条件下研磨。3.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述固相萃取柱包括HLB固相萃取柱。4.根据权利要求2或3所述的检测方法，其特征在于，所述提取液包括同位素内标；优选地，所述同位素内标包括胆酸
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D4；优选地，所述提取液中的所述同位素内标的浓度为200ng/mL；优选地，所述提取液的添加量为每克所述待测样品中加入2～5mL所述提取液，更优选为3mL。5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述UPLC
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MS/MS联用所用的色谱柱为C18色谱柱；优选地，流动相包括A相和B相，所述A相为0.1％甲酸水溶液，所述B相为0.1％甲酸甲醇溶液，同时含有所述A相和所述B相时，所述A相和所述B相的体积比为0:100～95:5；优选地，所述UPLC
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MS/MS联用采用的离子源为电喷雾电离源；优选地，所述离子源的电压为4500V或
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4500V；优选地，所述离子源的温度为550℃。6.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述S3中采用梯度洗脱，所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：王劲松，赵晓雯，刘莹，赵亚丽，
申请(专利权)人：天津诺禾医学检验所有限公司，
类型：发明
国别省市：