检测14-3-3eta蛋白的均相免疫检测试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术涉及一种用于检测14

【技术实现步骤摘要】
检测14
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3eta蛋白的均相免疫检测试剂盒及其应用
[0001]本申请是申请日为2018年1月5日，申请号为201810011520.0，专利技术名称为“检测14
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3eta蛋白的均相免疫检测试剂盒及其应用”的中国专利申请的分案申请。


[0002]本专利技术属于免疫分析
，具体涉及一种检测14
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3eta蛋白的均相免疫检测试剂盒及其制备方法、使用方法。

技术介绍

[0003]14
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3eta(η)蛋白是一种新型的血清/血浆蛋白标志物，诱导炎症因子，如白细胞介素(IL)
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1和
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6，并联系到关节损伤。7种亚型中只有14
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3η蛋白在 RA活动性炎症滑膜和血清中高表达，并与RA前炎性因子表达和滑膜炎症呈正相关，且滑膜液14
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3η蛋白水平至少高于血清水平5倍以上，提示滑膜是14
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3η蛋白的主要来源。与健康的人相比，14
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3η亚型在关节炎患者中高水平表达，这被认为与14
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3η蛋白诱导相关的炎症因子和关节损伤的能力直接相关。
[0004]现有的检测14
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3蛋白的方法均为非均相免疫检测法，这些方法灵敏较低，准确度不高，操作也较为复杂。并且，国内、外市场上尚没有发现商品化14
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3eta 蛋白检测试剂盒。曾报道有酶联免疫吸附法(ELISA法)检测患者血清中14
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3eta 蛋白，但是其灵敏较低，特异性也较差，操作也较为繁琐。
[0005]因此，目前亟需研究开发一种灵敏度高、特异性好、操作方法简便的14
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3eta 蛋白检测试剂盒。

技术实现思路

[0006]为解决上述技术问题，本专利技术提供了一种用于检测14
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3eta蛋白的光激化学发光免疫检测试剂盒。该试剂盒采用能够与14
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3eta蛋白特异性结合的第一抗体和第二抗体制成，结合光激化学发光技术制成；利用光激化学发光免疫分析平台的灵敏度高、线性范围宽、精密度好等优势，为临床诊断类风湿提高确诊率，为预防类风湿和提早发现类风湿提供辅助检测，成为类风湿新型标志物。
[0007]本专利技术第一方面检测14
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3eta蛋白或其片段或所述14
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3eta蛋白或其片段与至少一种抗体形成的免疫复合物的存在的在制备用于采用均相免疫检测方法通过下列步骤检测受治疗者的类风湿性关节炎的试剂中的用途：a)提供来自怀疑患有类风湿性关节炎的受治疗者的待测样品；b)检测所述待测样品中14
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3eta 蛋白或其片段或所述14
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3eta蛋白或其片段与至少一种抗体形成的免疫复合物；其中所述14
‑3‑
3eta蛋白或其片段或免疫复合物的存在指示受治疗者的类风湿性关节炎；其中，所述14
‑3‑
3eta蛋白或其片段包含至少一个14
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3eta表位，所述待测样品选自血液、血浆、血清、滑膜液和组织。
[0008]在本专利技术的一些实施方式中，所述步骤还包括测量14
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3eta蛋白或其片段或所述14
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3eta蛋白或其片段与至少一种抗体形成的免疫复合物的含量。
[0009]在本专利技术的一些优选的实施例中，基于14
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3eta蛋白标准工作曲线来确定待测样品中14
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3eta蛋白的含量。
[0010]在本专利技术的一些实施方式中，所述步骤还包括将所测得的14
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3eta蛋白或其片段或所述14
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3eta蛋白或其片段与至少一种抗体形成的免疫复合物的含量，与正常对照样品、类风湿性关节炎对照样品或来自同一受治疗者的治疗前样品中所述14
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3eta蛋白或其片段或所述14
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3eta蛋白或其片段与至少一种抗体形成的免疫复合物的含量进行比较。
[0011]根据本专利技术，所述步骤包括将所述样品与包含能够与14
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3eta蛋白或其片段的至少一种特异表位特异性结合形成免疫复合物的抗体。
[0012]在本专利技术的一些实施方式中，所述抗体包括能够与14
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3eta蛋白的第一表位特异性结合的第一抗体以及能够与14
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3eta蛋白的第二表位特异性结合的第二抗体，其中所述第二表位和所述第一表位不相重叠。
[0013]在本专利技术的一些实施方式中，所述第一抗体与受体结合，所述受体能够与单线态氧反应生成可检测的化学发光信号。
[0014]本专利技术中，所述受体包含烯烃化合物和金属螯合物，其为非粒子形式，且在含水介质中可溶。
[0015]本专利技术中，所述受体为填充有发光化合物和镧系元素的高分子微粒。
[0016]在本专利技术的一些实施方式中，所述第一抗体和第二抗体分别独立地选自单克隆抗体和/或多克隆抗体，优选单克隆抗体。
[0017]在本专利技术的一些实施例中，所述14
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3eta蛋白或其片段的氨基酸序列如 SEQUENCE NO.1所示。
[0018]在本专利技术的一些实施例中，所述表位选自氨基酸片段为14
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3eta蛋白的序列的相对特异性片段：1
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6aa、27
‑
38aa、71
‑
83aa、112
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119aa和141
‑
154aa。
[0019]为此，本专利技术第二方面提供了一种用于检测14
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3eta蛋白的均相免疫检测试剂套装，其包括：
[0020]组分a，其包含能够与单线态氧反应生成可检测信号的受体以及与之结合的第一抗体或其结合片段，所述第一抗体或其结合片段能够与14
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3eta蛋白的第一表位特异性结合；
[0021]组分b，其包含能够与14
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3eta蛋白的第二表位特异性结合的第二抗体或其结合片段，所述第二表位和所述第一表位不相重叠；
[0022]组分c，其包括能够在激发状态产生单线态氧的供体。
[0023]根据本专利技术，所述14
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3eta蛋白的氨基酸序列如SEQUENCE NO.1所示。
[0024]在本专利技术的一些实施方式中，所述第二表位和所述第一表位分别独立地选自氨基酸片段为14
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3eta蛋白的序列的相对特异性片段：1
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6aa、27
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38aa、71
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83aa、 112
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.检测14
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3eta蛋白片段的存在的在制备用于采用均相免疫检测方法通过下列步骤评价受治疗者的类风湿性关节炎的试剂中的用途：a)提供来自怀疑患有类风湿性关节炎的受治疗者的待测样品；b)采用均相免疫检测方法检测所述待测样品中14
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3eta蛋白片段；其中所述14
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3eta蛋白片段的存在指示受治疗者的类风湿性关节炎；其中，所述14
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3eta蛋白片段包含至少一个14
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3eta表位，所述待测样品选自血液、血浆、血清、滑膜液和组织。2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述步骤包括将所述样品与包含能够与14
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3eta蛋白片段的至少一种特异表位特异性结合形成免疫复合物的抗体混合；优选地，所述抗体包括能够与14
‑3‑
3eta蛋白片段的第一表位特异性结合的第一抗体以及能够与14
‑3‑
3eta蛋白片段的第二表位特异性结合的第二抗体，其中所述第二表位和所述第一表位不相重叠；进一步优选地，所述第一抗体与受体结合，所述受体能够与单线态氧反应生成可检测的化学发光信号。3.根据权利要求2所述的用途，其特征在于，所述14
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3eta蛋白片段的氨基酸序列如SEQUENCE NO.1所示；和/或所述表位选自氨基酸片段为14
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3eta蛋白片段的序列的相对特异性片段：1
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6aa、27
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38aa、71
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83aa、112
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119aa和141
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154aa。4.一种用于检测14
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3eta蛋白片段的均相免疫检测试剂套装，其包括：组分a，其包含能够与单线态氧反应生成可检测信号的受体以及与之结合的第一抗体或其结合片段，所述第一抗体或其结合片段能够与14
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3eta蛋白片段的第一表位特异性结合；组分b，其包含能够与14
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3eta蛋白片段的第二表位特异性结合的第二抗体或其结合片段，所述第二表位和所述第一表位不相重叠；组分c，其包括能够在激发状态产生单线态氧的供体；优选地，所述第二抗体或其结合片段与特异性结合配对成员中的一员结合，而所述供体与特异性结合配对成员中的另一员结合。5.根据权利要求4所述的试剂套装，其特征在于，所述14
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3eta蛋白片段的氨基酸序列如SEQUENCE NO.1所示；和/或所述第二表位和所述第一表位分别独立地选自氨基酸片段为14
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3eta蛋白片段的序列的相对特异性片段：1
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6aa、27
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38aa、71
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83aa、112
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119aa和141
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154aa。6.一种检测待测样品中14
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3...

【专利技术属性】
技术研发人员：饶星，陈英豪，刘宇卉，李临，
申请(专利权)人：科美诊断技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：