基于共轭聚合物的个性化高血压用药相关的基因检测试剂与应用制造技术

本发明专利技术公开了基于共轭聚合物的个性化高血压用药相关的基因检测方法与应用。本发明专利技术提供序列1至序列24所述的PCR引物对和特异性单碱基延伸引物，可用于鉴定或辅助鉴定ABCB1(S893A)基因、EDN1(G5665T)基因、CYP2C9*3基因、CYP2C9*13基因、ADRB3(W64R)基因、SCNN1G(T>A)基因、CYP3A5*3基因和CACNA1C的基因多态性。本发明专利技术提供的引物组合物及测定方法可快速、精准的获得检测的结果。上述基因位点多态性检测的结果对病人具有一定的辅助诊断和指导用药的意义。导用药的意义。

【技术实现步骤摘要】
基于共轭聚合物的个性化高血压用药相关的基因检测试剂与应用


[0001]本研究涉及基因检测领域，具体涉及基于共轭聚合物的个性化高血压用药相关的基因检测方法与应用。

技术介绍

[0002]在临床治疗中，药物反应的个体差异极为普遍，产生这种差异的原因包括性别、年龄、遗传、疾病状况等多种因素，都可导致不同个体对同一药物的反应出现量和质的差别。遗传药理学和临床药理学的研究均表明，在所有因素中，绝大多数情况下最主要的因素是遗传因素，及药物代谢酶、转运体和受体(药物作用靶点)的基因多态性导致了其编码蛋白的功能改变，导致其对药物的转化、运输及反应能力发生改变，进一步使靶点的药物浓度和药物敏感性发生改变，从而导致了对药物反应的个体差异。
[0003]单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)指基因组单个核苷酸的变异，它是最微小的变异单元，是由单个核苷酸置换、颠换、插入或缺失所形成的变异形式。
[0004]以高血压疾病为例，目前临床常用的抗高血压药物有钙拮抗剂、血管紧张素转化酶抑制剂、β
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受体阻滞剂、血管紧张素II受体拮抗剂和利尿降压药及其它。随着人类基因组计划的实施和完成，许多遗传性疾病的相关基因被相继定位。经过国内外的长期研究，目前已发现许多个基因的突变位点尤其是单碱基错配与抗高血压药物的反应性密切相关，其中主要有下列位点：
[0005]表1：与抗高血压药物反应性相关的等位基因
[0006]药物类别相关等位基因钙拮抗剂CYP3A5*3、CYP3A4*17、CACNA1C血管紧张素转换酶抑制剂ACE(I\D)、AGT(M235T)、ACE2β
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受体阻滞剂EDN1(G5665T)、ADRB1(C1165G)、CYP2D6*10血管紧张素II受体拮抗剂AGTR1(A1166C)APOB(100C711T)、CYP2C9*3、CYP2C9*13利尿降压药及其他ADD1(Gly460Trp)、SCNN1G、ENOSA
[0007]药物反应性包括了疗效和安全性两个方面，即：同种同剂量的药物作用于不同基因型的患者，对于药物的代谢酶功能变化、作用靶点敏感性以及受体敏感性，有的人用药后恰好有效，有的人根本无效。在很多疾病治疗过程中，常发生用药不当而导致的副作用或因剂量不足无法达到治疗目的。因此针对这些病患的基因型进行个体化用药具有特别重要的意义。
[0008]目前，很多基因分型检测技术包括限制酶切分析、异源双链杂交分析、分子信标、焦磷酸测序技术以及质谱法均有应用。但这些方法也存在操作繁琐，成本高，难以实现高通量分析等问题。为了解决这些问题，开发高灵敏度的生物传感系统来检测疾病相关等位基因的位点信息尤为重要。因此，设计制备基于光学性能的高血压相关基因位点检测方法是
ID No.6所示的单链DNA，所述CYP2C9*3
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S是SEQ ID No.9所示的单链DNA，所述CYP2C9*13
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S是SEQ ID No.12所示的单链DNA，所述ADRB3(W64R)
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S是SEQ ID No.15所示的单链DNA，所述SCNN1G(T>A)
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S是SEQ ID No.18所示的单链DNA，所述CYP3A5*3
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S是SEQ ID No.21所示的单链DNA，所述CACNA1C
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S是SEQ ID No.24所示的单链DNA。
[0022]进一步地，上述的试剂或试剂盒中，所述引物组合物还包括单碱基延伸引物对应的荧光标记的dNTP，所述ABCB1(S893A)
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S对应的荧光标记的dNTP为dATP；EDN1(G5665T)
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S对应的荧光标记的dNTP为dCTP；CYP2C9*3
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S对应的荧光标记的dNTP为dUTP；CYP2C9*13
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S对应的荧光标记的dNTP为dUTP；ADRB3(W64R)
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S对应的荧光标记的dNTP为dGTP；SCNN1G(T>A)
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S对应的荧光标记的dNTP为dGTP；CYP3A5*3
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S对应的荧光标记的dNTP为dUTP；CACNA1C
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S对应的荧光标记的dNTP为dCTP。
[0023]进一步地，上述的试剂或试剂盒中，所述单碱基延伸引物对应的荧光标记为荧光素或Cy3。
[0024]上述的试剂或试剂盒中，所述引物组合物可组合使用，也可单独使用。
[0025]上述的试剂或试剂盒中，所述PCR引物对的两个引物可以分别单独包装，也可以包装在一起。
[0026]上述的试剂或试剂盒中，所述PCR引物对ABCB1(S893A)
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FR、EDN1(G5665T)
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FR、CYP2C9*3
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FR、CYP2C9*13
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FR、ADRB3(W64R)
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FR、SCNN1G(T>A)
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FR、CYP3A5*3
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FR和CACNA1C
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FR可以分别单独包装，也可以两个一组包装在一起。
[0027]上述的试剂或试剂盒中，所述引物组合物中引物ABCB1(S893A)
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Fw、ABCB1(S893A)
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Rw、EDN1(G5665T)
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Fw、EDN1(G5665T)
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Rw、CYP2C9*3
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Fw、CYP2C9*3
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Rw、CYP2C9*13
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Fw、CYP2C9*13
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Rw、ADRB3(W64R)
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Fw、ADRB3(W64R)
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Rw、SCNN1G(T>A)
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Fw、SCNN1G(T>A)
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Rw、CYP3A5*3
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Fw、CYP3A5*3
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Rw、CACNA1C
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Fw和CACNA1C
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Rw的物质的量可以相同也可以不同。
[0028]上述的试剂或试剂盒中，所述单碱基延伸引物ABCB1(S893A)
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S、EDN1(G5665T)
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S、CYP2C9*3
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S、CYP2C9*13
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S、ADRB3(W64R)
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S、SCNN1G(T>A)
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S、CYP3A5*3
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S和CACNA1C
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S10的物质的量可以相同、也可以不同。
[0029]上述的试剂或试剂盒中，所述阳本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.鉴定或辅助鉴定待测样品SNP的多态性或基因型的试剂或试剂盒，其特征在于：所述SNP选自rs2032582、rs5370、rs1057910、rs72558187、rs4994、rs5729、rs776746和rs2283274这8种SNP中的全部或部分；所述试剂或试剂盒包括引物组合物和阳离子共轭聚合物，所述引物组合物包括PCR引物对，所述PCR引物对为PCR引物对ABCB1(S893A)
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FR、PCR引物对EDN1(G5665T)
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FR、PCR引物对CYP2C9*3
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FR、PCR引物对CYP2C9*13
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FR、PCR引物对ADRB3(W64R)
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FR、PCR引物对SCNN1G(T>A)
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FR、PCR引物对CYP3A5*3
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FR和PCR引物对CACNA1C
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FR；所述PCR引物对ABCB1(S893A)
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FR为所述rs2032582的特异PCR引物对，由引物ABCB1(S893A)
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Fw和引物ABCB1(S893A)
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Rw组成，引物ABCB1(S893A)
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Fw是SEQ ID No.1所示的单链DNA，引物ABCB1(S893A)
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Rw是SEQ ID No.2所示的单链DNA；所述PCR引物对EDN1(G5665T)
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FR为所述rs5370的特异PCR引物对，由引物EDN1(G5665T)
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Fw和引物EDN1(G5665T)
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Rw组成，引物EDN1(G5665T)
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Fw是SEQ ID No.4所示的单链DNA，引物EDN1(G5665T)
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Rw是SEQ ID No.5所示的单链DNA；所述PCR引物对CYP2C9*3
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FR为所述rs1057910的特异PCR引物对，由引物CYP2C9*3
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Fw和引物CYP2C9*3
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Rw组成，引物CYP2C9*3
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Fw是SEQ ID No.7所示的单链DNA，引物CYP2C9*3
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Rw是SEQ ID No.8所示的单链DNA；所述PCR引物对CYP2C9*13
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FR为所述rs72558187的特异PCR引物对，由引物CYP2C9*13
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Fw和引物CYP2C9*13
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Rw组成，引物CYP2C9*13
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Fw是SEQ ID No.10所示的单链DNA，引物CYP2C9*13
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Rw是SEQ ID No.11所示的单链DNA；所述PCR引物对ADRB3(W64R)
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FR为所述rs4994的特异PCR引物对，由引物ADRB3(W64R)
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Fw和引物ADRB3(W64R)
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Rw组成，引物ADRB3(W64R)
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Fw是SEQ ID No.13所示的单链DNA，引物ADRB3(W64R)
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Rw是SEQ ID No.14所示的单链DNA；所述PCR引物对SCNN1G(T>A)
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FR为rs5729基因的特异PCR引物对，由引物SCNN1G(T>A)
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Fw和引物SCNN1G(T>A)
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Rw组成，引物SCNN1G(T>A)
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Fw是SEQ ID No.16所示的单链DNA，引物SCNN1G(T>A)
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Rw是SEQ ID No.17所示的单链DNA；所述PCR引物对CYP3A5*3
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FR为所述rs776746的特异PCR引物对，由引物CYP3A5*3
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Fw和引物CYP3A5*3
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Rw组成，引物CYP3A5*3
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Fw是SEQ ID No.19所示的单链DNA，引物CYP3A5*3
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Rw是SEQ ID No.20所示的单链DNA；所述PCR引物对CACNA1C
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FR为所述rs2283274基因的特异PCR引物对，由引物C...

【专利技术属性】
技术研发人员：王树，申奇，刘昱圻，刘礼兵，陈韵岱，
申请(专利权)人：中国人民解放军总医院第六医学中心，
类型：发明
国别省市：