无血清全悬浮培养型F81细胞系及其构建方法与应用技术

本发明专利技术属于生物技术领域，公开了无血清全悬浮培养型F81细胞系及其构建方法与应用。该猫肾悬浮细胞系，名称为猫肾细胞F81悬浮细胞，于2021年11月4日保藏于位于中国.武汉.武汉大学的中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：C2021289，目前已传至65代，形态以大小均一、透亮圆形为主；病毒敏感性试验显示，该无血清全悬浮培养型F81细胞系对猫细小病毒敏感；该细胞系可用于培养、分离、检测病毒，制备病毒疫苗，筛选用于预防或治疗病毒感染所致的疾病的药物。疾病的药物。

【技术实现步骤摘要】
无血清全悬浮培养型F81细胞系及其构建方法与应用


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及无血清全悬浮培养型F81细胞系及其构建方法与应用。

技术介绍

[0002]猫泛白细胞减少症(Feline panleukopenia，FPL)又叫猫瘟，是由食肉动物细小病毒1型(Carnivore protoparvovirus1)引起的一种具有高度传染性的疾病，典型症状为泛白细胞减少、严重的肠炎和免疫抑制，具有较高的发病率和死亡率。目前为止猫瘟仍未找到理想的治疗药物，疫苗接种仍是当今防止疫病发生和流行的最有效手段。
[0003]随着宠物行业的不断发展，宠物饲养数量逐年增多，以宠物猫和宠物狗为主，在宠物带给人们快乐的同时，宠物健康问题也威胁着公共安全。目前危害宠物猫的病毒主要有猫细小病毒，犬细小病毒，猫冠状病毒，猫疱疹病毒等，而对宠物猫产生严重危害的病毒就是猫细小病毒。增殖猫细小病毒，常用细胞为猫肾细胞(F81)，该细胞具有培养容易、增殖快、猫细小病毒感染效率高猫的特点，是国内外公认的最适合猫细小病毒培养的细胞系。其通常是以贴壁培养生长，细胞之间互相衔接或呈镶嵌状排列，并会在表面集合形成紧密的连接蛋白，从而形成单层贴壁细胞。但是，该培养方式存在一些缺陷，比如贴壁培养受基质表面积限制导致病毒产量下降；贴壁培养过程中换液等程序较为复杂繁琐，血清的使用易受微生物、病毒和支原体等的污染，无血清培养技术是阐明细胞生成、增殖、分化以及基因表达调控的基础问题的有效工具，但即使无血清贴壁培养也只适用于试验研究，不适用于大规模培养，不能满足病毒疫苗等实际生产需要。
[0004]细胞无血清全悬浮培养技术已日趋成熟，也是未来生物制品生产大趋势，目前国内已有多株生产用工程悬浮细胞系。但是目前尚不存在无血清全悬浮培养型F81细胞系。

技术实现思路

[0005]本专利技术第一方面的目的，在于提供一种无血清全悬浮培养型F81细胞系。
[0006]本专利技术第二方面的目的，在于提供第一方面的无血清全悬浮培养型F81细胞系的构建方法。
[0007]本专利技术第三方面的目的，在于提供第一方面的无血清全悬浮培养型F81细胞系的应用。
[0008]本专利技术第四方面的目的，在于提供一种培养病毒的方法。
[0009]本专利技术第五方面的目的，在于提供一种病毒疫苗的制备方法。
[0010]本专利技术第六方面的目的，在于提供一种病毒疫苗。
[0011]为了实现上述目的，本专利技术所采取的技术方案是：
[0012]本专利技术的第一个方面，提供一种无血清全悬浮培养型F81细胞系，名称为猫肾细胞F81悬浮细胞，于2021年11月4日保藏于位于中国.武汉.武汉大学的中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：C2021289。
[0013]本专利技术的第二个方面，提供本专利技术第一方面的无血清全悬浮培养型F81细胞系的构建方法，包括如下步骤：1)对贴壁培养型F81细胞进行低血清驯化，得到低血清贴壁型F81细胞系；2)对低血清贴壁型F81细胞系进行全悬浮无血清驯化，得到无血清全悬浮培养型F81细胞系。
[0014]优选地，步骤1)中所述低血清驯化包括如下步骤：依次将贴壁培养型F81细胞接种至含9.5～10.5％、5.5～6.5％、3.5～4.5％、1.5～2.5％胎牛血清的MEM培养基中进行传代培养。
[0015]进一步优选地，不同浓度的胎牛血清的MEM培养基中培养3～10代。
[0016]进一步优选地，不同浓度的胎牛血清的MEM培养基中的传代比例为1:(2～5)。
[0017]进一步优选地，所述传代培养的条件为35～38℃，4～6％CO2，pH6.5～7.5。
[0018]优选地，步骤2)中所述全悬浮无血清驯化包括如下步骤：依次将低血清贴壁培养型F81细胞系接种至0.5～1.5％、0.25～0.75％、0％胎牛血清的全悬浮培养基进行传代培养。
[0019]进一步优选地，不同浓度的胎牛血清的MEM培养基中培养1～10代。
[0020]进一步优选地，不同浓度的胎牛血清的MEM培养基中的传代比例为1:(2～5)。
[0021]进一步优选地，所述传代培养的条件为35～38℃，4～6％CO2，pH6.5～7.5，50～70r/mi n。
[0022]优选地，所述全悬浮培养基为MS01培养基。
[0023]本专利技术的第三个方面，提供本专利技术第一方面的无血清全悬浮培养型F81细胞系的应用：
[0024]本专利技术第一方面的无血清全悬浮培养型F81细胞系在培养病毒中的应用；
[0025]本专利技术第一方面的无血清全悬浮培养型F81细胞系在制备培养病毒的产品中的应用；
[0026]本专利技术第一方面的无血清全悬浮培养型F81细胞系在分离病毒中的应用；
[0027]本专利技术第一方面的无血清全悬浮培养型F81细胞系在制备分离病毒的产品中的应用；
[0028]本专利技术第一方面的无血清全悬浮培养型F81细胞系在非诊断治疗目的地检测病毒中的应用；
[0029]本专利技术第一方面的无血清全悬浮培养型F81细胞系在制备检测病毒的产品中的应用；
[0030]本专利技术第一方面的无血清全悬浮培养型F81细胞系在制备疫苗中的应用；
[0031]本专利技术第一方面的无血清全悬浮培养型F81细胞系在药物筛选中的应用，所述药物为用于预防或治疗病毒感染所致的疾病的药物。
[0032]优选地，所述病毒为猫细小病毒、犬细小病毒、猫泛白细胞减少症病毒、猫杯状病毒、猫传染性鼻气管炎病毒和水貂病毒性肠炎病毒中的至少一种；进一步为猫细小病毒。
[0033]本专利技术的第四个方面，提供一种培养病毒的方法，将病毒接种至本专利技术第一方面的无血清全悬浮培养型F81细胞系，培养。
[0034]优选地，所述病毒为猫细小病毒、犬细小病毒、猫泛白细胞减少症病毒、猫杯状病毒、猫传染性鼻气管炎病毒和水貂病毒性肠炎病毒中的至少一种；进一步为猫细小病毒。
[0035]优选地，所述培养的条件为31～39℃、100～140r/min、4～6％CO2；进一步为33～37℃、120r/min、5％CO2。
[0036]本专利技术的第五个方面，提供一种病毒疫苗的制备方法，将病毒接种至本专利技术第一方面的无血清全悬浮培养型F81细胞系，培养，灭活，得到病毒疫苗。
[0037]优选地，所述病毒为猫细小病毒、犬细小病毒、猫泛白细胞减少症病毒、猫杯状病毒、猫传染性鼻气管炎病毒和水貂病毒性肠炎病毒中的至少一种；进一步为猫细小病毒。
[0038]优选地，所述培养的条件为31～39℃、100～140r/min、4～6％CO2；进一步为33～37℃、120r/min、5％CO2。
[0039]本专利技术的第六个方面，提供一种病毒疫苗，通过本专利技术第五方面的制备方法得到。
[0040]本专利技术的有益效果是：
[0041]本专利技术通过专利技术人的大量创造性劳动，首次构建得到无血清全悬浮培养型F8本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种无血清全悬浮培养型F81细胞系，名称为猫肾细胞F81悬浮细胞，于2021年11月4日保藏于位于中国.武汉.武汉大学的中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：C2021289。2.权利要求1所述的无血清全悬浮培养型F81细胞系的构建方法，包括如下步骤：1)对贴壁培养型F81细胞进行低血清驯化，得到低血清贴壁型F81细胞系；2)对低血清贴壁型F81细胞系进行全悬浮无血清驯化，得到无血清全悬浮培养型F81细胞系。3.权利要求1所述的无血清全悬浮培养型F81细胞系在(1)～(4)中任一项中的应用；(1)培养病毒；(2)制备培养病毒的产品；(3)分离病毒；(4)制备分离病毒的产品。4.权利要求1所述的无血清全悬浮培养型F81细胞系在(5)～(6)中任一项中的应用；(5)非诊断治疗目的地检测病毒；(6)制备检测病毒的产品。5.权利要求1所述的无血...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱辉，张久鑫，张梓鸿，邵宝顺，盛圆贤，
申请(专利权)人：广东省华晟生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：