美罗培南中三种潜在基因毒性杂质的检测方法技术

本发明专利技术涉及一种美罗培南中三种潜在基因毒性杂质的检测方法，属于药物分析技术领域，所述潜在基因毒性杂质包括4

【技术实现步骤摘要】
美罗培南中三种潜在基因毒性杂质的检测方法


[0001]本专利技术涉及一种美罗培南中三种潜在基因毒性杂质的检测方法，属于药物分析


技术介绍

[0002]美罗培南为人工合成的广谱碳青霉烯类抗生素，主要通过抑制细菌细胞壁的合成而产生抗菌作用，容易穿透大多数革兰阳性和阴性细菌的细胞壁，而达到其作用靶点青霉素结合蛋白(PBPs)。
[0003]对美罗培南生产过程中所使用的原辅料、生产工艺进行分析，存在4
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硝基甲苯、对甲基苯胺、4
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硝基苯甲醇三种潜在基因毒性杂质，上述三种基因毒性杂质带有基因毒性杂质警示结构，会对DNA有潜在的破坏性，长期服用可能会致癌，因此需对产品中的基因杂质进行严格控制。但目前国内外药典均未收载上述三种基因毒性杂质，这三种基因毒性杂质的结构和化学式信息见表1：
[0004]表1美罗培南的基因毒性杂质结构和化学式
[0005][0006]杂质1、杂质2和杂质3均为保护美罗培南氢化生成的副产物，它们的存在会影响药物制剂的产品质量，应进行全面控制；ICH M7规定用TTC来控制基因毒性杂质的限度，TTC为1.5μg/d，注射用美罗培南的最大日用量为6.0g，由TTC计算得基因毒杂质的限度为0.25ppm。美罗培南的最大日用量大，基因毒性杂质的限度低，一般HPLC分析方法中美罗培南的背景干扰较大，影响基因毒性杂质的检测。

技术实现思路

[0007]本专利技术的目的是提供一种美罗培南中三种潜在基因毒性杂质的检测方法，采用高
>效液相色谱法对美罗培南中三种基因毒性杂质进行全面控制，该方法科学简便、可操作性及专属性强，具有较高的灵敏度、准确度和精密度。
[0008]为了实现上述目的，本专利技术采用的技术方案是：
[0009]一种美罗培南中三种潜在基因毒性杂质的检测方法，所述潜在基因毒性杂质包括4
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硝基甲苯、对甲基苯胺和4
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硝基苯甲醇；所述检测方法为高效液相色谱法，色谱条件为：采用十八烷基硅烷键合硅胶为固定相的色谱柱；以磷酸二氢钾缓冲溶液与甲醇为流动相，采用等度洗脱分离；检测器为紫外检测器，采用双波长模式；流速为0.5～2.0ml/min，进样体积为10～100μl，柱温为20～50℃；
[0010]测定时将系统适用性溶液、杂质定位溶液和供试品溶液分别注入高效液相色谱仪，记录色谱图。
[0011]本专利技术技术方案的进一步改进在于：所述流动相中磷酸二氢钾缓冲溶液质量分数0.1～1％，pH为2.0～5.0，磷酸二氢钾缓冲溶液与甲醇体积比为70:30～30:70。
[0012]本专利技术技术方案的进一步改进在于：所述检测双波长为230nm和285nm。
[0013]本专利技术技术方案的进一步改进在于：所述柱温为40℃，流速为1.0ml/min，进样体积为50μl。
[0014]本专利技术技术方案的进一步改进在于：所述流动相中磷酸二氢钾缓冲溶液质量分数是0.2％，pH为3.0，磷酸二氢钾缓冲溶液与甲醇体积比为50:50。
[0015]本专利技术技术方案的进一步改进在于：所述系统适用性溶液中三种潜在基因毒性杂质的浓度均为0.01～0.5μg/ml；所述杂质定位溶液中三种潜在基因毒性杂质的浓度均为50～500μg/ml；所述供试品溶液中包括美罗培南和碳酸钠，美罗培南的浓度为1～500mg/ml。
[0016]本专利技术技术方案的进一步改进在于：所述系统适用性溶液中三种潜在基因毒性杂质的浓度均为0.1μg/ml；所述杂质定位溶液中三种潜在基因毒性杂质的浓度均为100μg/ml；所述供试品溶液中包括美罗培南和碳酸钠，美罗培南和碳酸钠的质量比为1:0.208，美罗培南的浓度为400mg/ml。
[0017]由于采用了上述技术方案，本专利技术取得的技术效果有：
[0018]本专利技术通过高效液相色谱法可同时控制美罗培南中的三种基因毒性杂质，实现了各杂质的完全分离以及美罗培南对分析的无干扰，科学简便、可操作性及专属性强，具有较高的灵敏度、准确度和精密度，保证了美罗培南的安全性和质量可控性。
[0019]本专利技术各杂质峰的浓度与峰面积成良好线性关系，且各杂质在对应的检测器中的灵敏度较高，杂质1、杂质2、杂质3的检测限分别为1.6ppb、1.6ppb、3.2ppb。本专利技术的方法可准确对美罗培南中基因毒性杂质进行定量分析，从而保证了美罗培南的质量可控性。
附图说明
[0020]图1是本专利技术实施例1杂质1的液相图谱；
[0021]图2是本专利技术实施例1杂质2的液相图谱；
[0022]图3是本专利技术实施例1杂质3的液相图谱；
[0023]图4是本专利技术实施例1系统适用性溶液的液相图谱；
[0024]图5是本专利技术实施例1供试品溶液的液相图谱；
[0025]图6是本专利技术实施例2系统适用性溶液的液相图谱；
[0026]图7是本专利技术实施例2供试品溶液的液相图谱；
[0027]图8是本专利技术实施例4杂质3的线性关系图；
[0028]图9是本专利技术实施例4杂质2的线性关系图；
[0029]图10是本专利技术实施例4杂质1的线性关系图。
具体实施方式
[0030]下面结合附图及具体实施例对本专利技术做进一步详细说明：
[0031]美罗培南中三种潜在基因毒性杂质的检测方法，所述潜在基因毒性杂质包括4
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硝基甲苯、对甲基苯胺和4
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硝基苯甲醇；所述检测方法为高效液相色谱法，色谱条件为：采用十八烷基硅烷键合硅胶为固定相的色谱柱；以质量分数0.1～1％、pH 2.0～5.0的磷酸二氢钾缓冲溶液与甲醇为流动相，磷酸二氢钾缓冲溶液与甲醇体积比为70:30～30:70，采用等度洗脱分离；检测器为紫外检测器，采用双波长模式，检测双波长为230nm和285nm；流速为0.5～2.0ml/min，进样体积为10～100μl，柱温为20～50℃。
[0032]测定时将系统适用性溶液、杂质定位溶液和供试品溶液分别注入高效液相色谱仪，记录色谱图；所述系统适用性溶液中三种潜在基因毒性杂质的浓度均为0.01～0.5μg/ml；所述杂质定位溶液中三种潜在基因毒性杂质的浓度均为50～500μg/ml；所述供试品溶液中包括美罗培南和碳酸钠，美罗培南和碳酸钠的质量比为1:0.208，美罗培南的浓度为1～500mg/ml。
[0033]下述实施例中所用的杂质对照品均来自北京百灵威科技有限公司，美罗培南原料来自重庆天地药业有限责任公司(批号YY116119120801)，磷酸二氢钾为分析纯，乙腈及甲醇为色谱纯。
[0034]实施例1
[0035]仪器：岛津LC
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20AT型高效液相色谱仪(SIL
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20A自动进样器，CTO
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10AS恒温柱温箱，SPD
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20A紫外检测器)；
[0036]色谱柱：YMC
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种美罗培南中三种潜在基因毒性杂质的检测方法，其特征在于：所述潜在基因毒性杂质包括4
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硝基甲苯、对甲基苯胺和4
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硝基苯甲醇；所述检测方法为高效液相色谱法，色谱条件为：采用十八烷基硅烷键合硅胶为固定相的色谱柱；以磷酸二氢钾缓冲溶液与甲醇为流动相，采用等度洗脱分离；检测器为紫外检测器，采用双波长模式；流速为0.5～2.0 ml/min，进样体积为10～100μl，柱温为20～50℃；测定时将系统适用性溶液、杂质定位溶液和供试品溶液分别注入高效液相色谱仪，记录色谱图。2.根据权利要求1所述的美罗培南中三种潜在基因毒性杂质的检测方法，其特征在于：所述流动相中磷酸二氢钾缓冲溶液质量分数0.1～1%，pH为2.0～5.0，磷酸二氢钾缓冲溶液与甲醇体积比为70:30～30:70。3.根据权利要求1所述的美罗培南中三种潜在基因毒性杂质的检测方法，其特征在于：所述检测双波长为230nm和285nm。4.根据权利要求1所述的美罗培南中三种潜在基因毒性杂质的检测...

【专利技术属性】
技术研发人员：王立忱，黄世青，于会贤，王召朋，贾欣秒，王伶，贾立，李庆磊，
申请(专利权)人：深圳华药南方制药有限公司，
类型：发明
国别省市：