S蛋白基因及其在猪δ冠状病毒疫苗中的应用制造技术

本发明专利技术公开一种S蛋白基因及其在猪δ冠状病毒疫苗中的应用，所述S蛋白基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。本发明专利技术提供的猪δ冠状病毒疫苗包含由S蛋白基因编码出的S蛋白，或装有S蛋白基因的重组质粒转化得到的重组菌菌液，该疫苗不仅能够在病毒主要靶器官小肠肠道黏膜上定居，能够有效防治PDCoV，且在使用时没有活毒传播风险，安全性良好，对动物健康和生态环境无潜在的影响和威胁；此外，由重组菌菌液直接制备得到的疫苗不需要经过纯化工序，生产工艺简单易实现，生产效率高、成本低。成本低。成本低。

【技术实现步骤摘要】
S蛋白基因及其在猪
δ
冠状病毒疫苗中的应用


[0001]本专利技术涉及兽用生物制品
，特别涉及一种S蛋白基因及其在猪δ冠状病毒疫苗中的应用。

技术介绍

[0002]猪丁型冠状病毒又称猪δ冠状病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCoV)，是一种新出现的可导致猪发生严重腹泻甚至死亡的冠状病毒。PDCoV可以感染各个阶段的猪群，但主要感染哺乳仔猪，引起严重的萎缩性肠炎，临床症状表现为仔猪腹泻、呕吐、脱水，引起小猪的死亡率30％～40％，给养猪业带来了较重的经济损失。因此，研制有效的疫苗进行该病的防控是急需解决的问题。

技术实现思路

[0003]本专利技术的主要目的是提出一种S蛋白基因及其在猪δ冠状病毒疫苗中的应用，该猪δ冠状病毒疫苗能够有效防治PDCoV，且在使用时安全性良好。
[0004]为实现上述目的，本专利技术提出一种S蛋白基因，所述S蛋白基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。
[0005]本专利技术还提出一种S蛋白，由如上文所述的S蛋白基因编码得到，其特征在于，所述S蛋白具有如SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列。
[0006]本专利技术还提出一种重组质粒，所述重组质粒包括如上文所述的S蛋白基因。
[0007]可选地，包含乳酸菌表达载体pVE5523。
[0008]本专利技术还提出一种重组菌株，所述重组菌株包含如上文所述的S蛋白基因。
[0009]可选地，所述重组菌株由携带所述S蛋白基因的重组质粒转化干酪乳杆菌标准菌株ATCC393获得。
[0010]本专利技术还提出一种猪δ冠状病毒疫苗，所述猪δ冠状病毒疫苗包括如上文所述的S蛋白，或如上文所述的重组菌株的菌液。
[0011]可选地，包括所述重组菌株菌液和冻干保护剂；和/或，
[0012]所述重组菌株菌液的OD600为1.0～1.2。
[0013]可选地，所述猪δ冠状病毒疫苗为口服疫苗。
[0014]本专利技术还提出一种猪δ冠状病毒疫苗的制备方法，包括以下步骤：
[0015]培养如上文所述的重组菌株得到菌液，将菌液冻干处理，得到猪δ冠状病毒疫苗。
[0016]本专利技术提供的猪δ冠状病毒疫苗包含由S蛋白基因编码出的S蛋白，或装有S蛋白基因的重组质粒转化得到的重组菌菌液，该疫苗不仅能够在病毒主要靶器官小肠肠道黏膜上定居，能够有效防治PDCoV，且在使用时没有活毒传播风险，安全性良好，对动物健康和生态环境无潜在的影响和威胁；此外，由重组菌菌液直接制备得到的疫苗不需要经过纯化工序，生产工艺简单易实现，生产效率高、成本低。
附图说明
[0017]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅为本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
[0018]图1为实施例1中合成的pUC57
‑
PDCoVS质粒双酶切后的琼脂糖凝胶电泳图；
[0019]图2为实施例1中重组质粒pVE5523
‑
PDCoVS质粒双酶切后的琼脂糖凝胶电泳图。
[0020]本专利技术目的的实现、功能特点及优点将结合实施例，参照附图做进一步说明。
具体实施方式
[0021]为使本专利技术实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术的一部分实施例，而不是全部的实施例。
[0022]需要说明的是，实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。涉及到基因合成、重组质粒和重组菌株制备、以及重组菌株发酵培养获得重组蛋白等实施方式中，未说明具体实验方式、实验原材料者，均按照基因工程及基于基因工程进行微生物发酵培养制备蛋白质的常规方法进行。此外，各个实施例之间的技术方案可以相互结合，但是必须是以本领域普通技术人员能够实现为基础，当技术方案的结合出现相互矛盾或无法实现时应当认为这种技术方案的结合不存在，也不在本专利技术要求的保护范围之内。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0023]猪丁型冠状病毒又称猪δ冠状病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCoV)，是一种新出现的可导致猪发生严重腹泻甚至死亡的冠状病毒。PDCoV可以感染各个阶段的猪群，但主要感染哺乳仔猪，引起严重的萎缩性肠炎，临床症状表现为仔猪腹泻、呕吐、脱水，引起小猪的死亡率30％～40％，给养猪业带来了较重的经济损失。因此，研制有效的疫苗进行该病的防控是急需解决的问题。
[0024]鉴于此，本专利技术提出一种S蛋白基因，所述S蛋白基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，具有该核苷酸序列的S蛋白基因中含有主要中和抗原表位的S1区域基因序列。由其编码出的S蛋白感染宿主时能够诱导产生中和性抗体，且其能在肠道黏膜定居，对PDCoV的感染能够起到较好的预防作用。
[0025]具体来说，本专利技术提出的S蛋白基因是在对冠状病毒结构蛋白中的纤突蛋白进行全基因组分析，并在以其DNA为模板，通过特定的引物扩增获得的，具有如SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列，全长1659bp，该基因片段覆盖含有主要中和抗原表位的S1区域。
[0026]本专利技术进一步提出一种S蛋白，所述S蛋白由上述所述S蛋白基因编码得到，具有如SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列，共552个氨基酸。S蛋白感染宿主时能够诱导产生中和性抗体，且其能在肠道黏膜定居，对PDCoV的感染能够起到较好的预防作用。
[0027]得到S蛋白的方法具体如下：利用限制性内切酶，将得到的S蛋白基因插入到表达载体中，即可得到重组质粒；然后将重组质粒转化到宿主细胞中，即可获得重组菌株；培养
重组菌株，然后纯化处理，即可从发酵物中获得S蛋白。
[0028]本专利技术进一步提出一种重组质粒，所述重组质粒包括上述S蛋白基因。本专利技术提出的重组质粒插入有如SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列。
[0029]其中，本专利技术提出的重组质粒还包含表达载体，且所述表达载体为乳酸菌表达载体pVE5523。本专利技术使用常见可食用菌作为载体，价廉易得且安全性更好，且对动物健康和生态环境影响小。
[0030]本专利技术进一步提出一种重组菌株，所述重组菌株包括上述S蛋白基因。本专利技术提出的重组菌株能够表达S蛋白，且在构建重组菌株时，采用的宿主细胞为干酪乳杆菌标准菌株ATCC393。干酪乳杆菌是一种常见易得的益生菌，本专利技术通过使用可食用菌作为宿主细胞，使得由重组菌株发酵得到的菌液可以直接制成口服疫苗使用，一方面使得生产工艺减少了纯化步骤，变得简单易实现，提高了生产效率，降低了生产成本，另一本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种S蛋白基因，其特征在于，所述S蛋白基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。2.一种S蛋白，由如权利要求1所述的S蛋白基因编码得到，其特征在于，所述S蛋白具有如SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列。3.一种重组质粒，其特征在于，包括如权利要求1所述的S蛋白基因。4.如权利要求3所述的重组质粒，其特征在于，包含乳酸菌表达载体pVE5523。5.一种重组菌株，其特征在于，包含如权利要求1所述的S蛋白基因。6.如权利要求5所述的重组菌株，其特征在于，所述重组菌株由携带所述S蛋白基因的重组质粒转化干酪乳杆...

【专利技术属性】
技术研发人员：于义娟，薛霜，王碧群，郑良益，朱薇，谢红玲，石宝兰，漆世华，王威，闵娟娟，秦涛，胡玉立，徐松，舒银辉，秦红刚，饶清宜，付宁宁，王明哲，黄涛，刘希健，李婷婷，周平，
申请(专利权)人：国药集团动物保健股份有限公司，
类型：发明
国别省市：