一种当归根腐病生物防治剂、制备方法及应用技术

本发明专利技术属于生物防治技术领域，公开了一种当归根腐病生物防治剂、制备方法及应用，当归根腐病生物防治剂由运动芽孢杆菌D1TB

【技术实现步骤摘要】
一种当归根腐病生物防治剂、制备方法及应用


[0001]本专利技术属于生物防治
，尤其涉及一种当归根腐病生物防治剂、制备方法及应用。

技术介绍

[0002]目前：随着我国中医药现代化的实施，国内国际市场对当归需求量加大，当归种植面积不断扩大致使轮作周期缩短，从而导致当归病害发生明显增加，其中根腐病尤为突出。目前，根腐病的预防主要通过改变耕作模式的传统生产措施，该措施可以一定程度上抑制根腐病的传播，但由于根腐病原菌具有积年流行、发病快等特点，根腐病害仍然是导致当归减产和品质下降的主要原因。药剂防治可以较为有效的抑制病原菌的生长，但是过量使用对环境和人类健康造成了严重危害。
[0003]因此，利用绿色环保的植物益生菌抑制根腐病原菌生长是防治当归根腐病害的重要生产方式，也是防治当归根腐病害的发展趋势，从而促进中药材的可持续发展。
[0004]通过上述分析，现有技术存在的问题及缺陷为：现有的通过药剂防治当归根腐病的方法，容易使病原菌产生耐药性，不得不加大药剂使用量，造成当归农药残留严重超标和药材品质下降的问题，对环境和人类健康产生危害；而改变耕作方式的防治方法无法有效根治。
[0005]解决以上问题及缺陷的难度为：在当归根腐病防治实践当中，化学防治仍然是控制该病的主要措施，但是生产中用药比较混乱，防治效果不尽相同。目前，生物防治还没有找到成形的生物杀菌剂，其原因主要为：生防菌株单一，环境依赖性强和生防效果不稳定。
[0006]解决以上问题及缺陷的意义为：本专利技术从健康当归根际土中筛选出2株生放菌株，其对当归生长的环境具有较强的适应性；2株生防菌株无拮抗作用，共同抑制病原菌的生长，生防效果稳定；2株生防菌复配制备的复合微生物制剂，对环境无污染，提高了当归药效和药材品质，促进药农经济增收；复合生防微生物制剂操作简单，便于推广。因此，本专利技术一种当归根腐病生防制剂具有重要的生态、经济和社会意义。

技术实现思路

[0007]针对现有技术存在的问题，本专利技术提供了一种当归根腐病生物防治剂、制备方法及应用。
[0008]本专利技术是这样实现的，一种当归根腐病生物防治剂，所述当归根腐病生物防治剂由运动芽孢杆菌D1TB
‑
5和里氏木霉D1TF
‑
16按体积比1:1组成。
[0009]本专利技术的另一目的在于提供一种所述当归根腐病生物防治剂的当归根腐病生物防治剂制备方法，所述当归根腐病生物防治剂制备方法包括：
[0010]步骤一，进行运动芽孢杆菌和里氏木霉的筛选分离，并制备微生物斜面种子；同时进行微生物液体种子的培养；
[0011]步骤二，将运动芽孢杆菌D1TB
‑
5接种于50L发酵罐中，在细菌液体培养基中进行培
养，直至菌液中有效活菌数为4
×
108CFU/mL；
[0012]步骤三，将里氏木霉D1TF
‑
16接种于50L发酵罐中，在真菌液体培养基中进行培养，直至菌液中有效活孢子数为4
×
108CFU/mL；
[0013]步骤四，将所得两种扩大培养的菌剂按体积比1:1混合均匀，即得到所述防治当归根腐病害的功能性微生物菌剂。
[0014]进一步，步骤一中，所述进行运动芽孢杆菌和里氏木霉的筛选分离包括：
[0015]通过梯度稀释法，选取浓度范围为10
‑5～10
‑8的液体土样，涂布于细菌固体培养基上和真菌固体培养基上，在30℃恒温培养，待菌物长出后分离纯化；
[0016]具体包括以下步骤：
[0017](1)取10g健康当归根际土样，加入到装有100mL无菌水的三角瓶中，在 200rpm在摇床上震荡30min后，取1mL混匀后的液体土样，加入到新的装有 9mL无菌水的试管中；
[0018](2)在震荡器中震荡5min后，再取1mL液体土样加到新的装有9mL无菌水的试管中，直至将土样稀释到10
‑8；
[0019](3)依次选取10
‑5、10
‑6、10
‑7和10
‑8浓度的土样，分别吸取100μL涂布于细菌固体培养基和真菌固体培养基上，在30℃恒温培养，待菌物长出后通过平板划线法，分离纯化出菌株，4℃保存备用。
[0020]进一步，步骤一中，所述制备微生物斜面种子包括：
[0021]将运动芽孢杆菌D1TB
‑
5接种于细菌固体培养基，30℃恒温培养48h后，即得运动芽孢杆菌D1TB
‑
5种子斜面；
[0022]将里氏木霉D1TF
‑
16接种于真菌固体培养基，30℃恒温培养48h后，即得里氏木霉D1TF
‑
16种子斜面。
[0023]进一步，所述细菌固体培养基制备方法包括：将胰蛋白胨10g，酵母提取物 5g，氯化钠10g，琼脂20g，蒸馏水1000mL混合均匀后，调节pH至7.0，在 121℃高压蒸汽灭菌20min，即得。
[0024]进一步，所述真菌固体培养基制备方法：将蛋白胨5g，葡萄糖10g，磷酸二氢钾1g，硫酸镁0.5g，琼脂20g，氯霉素0.1g加入1000mL蒸馏水中溶解后，再加1/3000孟加拉红溶液100mL，121℃灭菌20min；倾注平板前，另用少量乙醇溶解氯霉素加入培养基中。
[0025]进一步，步骤一中，所述进行微生物液体种子的培养包括：
[0026]将运动芽孢杆菌D1TB
‑
5接种于细菌液体培养基，在温度为30℃，转速为 200r/min震荡培养48h后，即得运动芽孢杆菌D1TB
‑
5液体种子；
[0027]将里氏木霉D1TF
‑
16接种于真菌液体培养基，在温度为30℃，转速为 200r/min震荡培养48h后，即得里氏木霉D1TF
‑
16液体种子。
[0028]进一步，所述细菌液体培养基制备方法包括：将胰蛋白胨10g，酵母提取物 5g，氯化钠10g，蒸馏水1000mL混合均匀，调节pH至7.0；在121℃高压蒸汽灭菌20min，即得；
[0029]所述真菌液体培养基制备方法包括：将蛋白胨5g，葡萄糖10g，磷酸二氢钾1g，硫酸镁0.5g，氯霉素0.1g加入1000mL蒸馏水溶解后，再加1/3000孟加拉红溶液100mL，121℃灭菌20min；用少量乙醇溶解氯霉素加入培养基中。
[0030]进一步，所述运动芽孢杆菌D1TB
‑
5接种培养包括：接种量为10％；在30℃下，转速为200r/min培养48h。
[0031]进一步，所述里氏木霉D1TF
‑
16接种培养包括：接种量为10％；在30℃下，转速为200r/min培养48h。
[0032]本专利技术的另一目的在于提供一种所述当归根腐病生物防治剂在当归根腐病防治中的应用。
[0033]结合上述的所有技术方案，本专利技术所具本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种当归根腐病生物防治剂，其特征在于，所述当归根腐病生物防治剂由运动芽孢杆菌D1TB
‑
5和里氏木霉D1TF
‑
16组成；所述运动芽孢杆菌D1TB
‑
5序列如SEQ ID NO：1所示；所述里氏木霉D1TF
‑
16序列如SEQ ID NO：2所示。2.一种如权利要求1所述当归根腐病生物防治剂的当归根腐病生物防治剂制备方法，其特征在于，所述当归根腐病生物防治剂制备方法包括：步骤一，进行运动芽孢杆菌和里氏木霉的筛选分离，并制备微生物斜面种子；同时进行微生物液体种子的培养；步骤二，将运动芽孢杆菌D1TB
‑
5接种于50L发酵罐中，在细菌液体培养基中进行培养，直至菌液中有效活菌数为4
×
108CFU/mL；步骤三，将里氏木霉D1TF
‑
16接种于50L发酵罐中，在真菌液体培养基中进行培养，直至菌液中有效活孢子数为4
×
108CFU/mL；步骤四，将所得两种扩大培养的菌剂按体积比1:1混合均匀，即得到所述防治当归根腐病害的功能性微生物菌剂。3.如权利要求2所述当归根腐病生物防治剂制备方法，其特征在于，步骤一中，所述进行运动芽孢杆菌和里氏木霉的筛选分离包括：通过梯度稀释法，选取浓度范围为10
‑5～10
‑8的液体土样，涂布于细菌固体培养基上和真菌固体培养基上，在30℃恒温培养，待菌物长出后分离纯化；具体包括以下步骤：(1)取10g健康当归根际土样，加入到装有100mL无菌水的三角瓶中，在200rpm在摇床上震荡30min后，取1mL混匀后的液体土样，加入到新的装有9mL无菌水的试管中；(2)在震荡器中震荡5min后，再取1mL液体土样加到新的装有9mL无菌水的试管中，直至将土样稀释到10
‑8；(3)依次选取10
‑5、10
‑6、10
‑7和10
‑8浓度的土样，分别吸取100μL涂布于细菌固体培养基和真菌固体培养基上，在30℃恒温培养，待菌物长出后通过平板划线法，分离纯化出菌株，4℃保存备用。4.如权利要求2所述当归根腐病生物防治剂制备方法，其特征在于，步骤一中，所述制备微生物斜面种子包括：将运动芽孢杆菌D1TB
‑
5接种于细菌固体培养基，30℃恒温培养48h后，即得运动芽孢杆菌D1TB

【专利技术属性】
技术研发人员：彭轶楠，季彬，王治业，祁宏山，席鹏，叶泽，杜津昊，
申请(专利权)人：甘肃省科学院生物研究所，
类型：发明
国别省市：