一种裂解结合液、RNA提取试剂盒及RNA提取方法技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，尤其涉及一种裂解结合液、RNA提取试剂盒及RNA提取方法。利用该裂解结合液可在室温环境下不加热提取病毒样本中的RNA，不容易产生气溶胶污染；提取过程方便快捷，无需使用蛋白酶K；提取时间缩短至9分钟，大大节省了病毒RNA提取时间，同时提取效果大于等于市面上大部分同类试剂盒，提取出的RNA可直接用于后续RT

【技术实现步骤摘要】
一种裂解结合液、RNA提取试剂盒及RNA提取方法


[0001]本专利技术涉及生物
，尤其涉及一种裂解结合液、RNA提取试剂盒及RNA提取方法。

技术介绍

[0002]近年来，越来越多的科研结果表明，RNA在生命进程中的作用远不止于此，在2002年度Science评选的10大科学成就中RNAi名列榜首。在所有RNA实验中，最关键的步骤是分离得到纯度高且完整的RNA。RNA病毒作为感染性疾病重要的病原之一，其检测对于临床治疗有重要的意义。在临床上病毒核酸检测可作为病毒感染重要的参考依据，而病毒的核酸提取是首要工作。
[0003]实验室提取RNA的方法有异硫氰酸胍
‑
苯酚法(Trizol)、酚
‑
SDS法、盐酸胍法等，目前通常采用传统的Trizol法，最大的特点是Trizol试剂含有多组分分离作用，可同时分离一个样品的RNA、DNA、蛋白质，但是存在分离效率不高，RNA纯度不稳定等缺点。
[0004]现在市面上的病毒RNA提取试剂盒包括硅基质膜柱提法试剂盒与磁珠法试剂盒两种，其中硅基质膜柱提法试剂盒须使用离心机多次离心，操作相对繁琐并且较难实现自动化操作，提取速度慢；对于检测机构检测大量样本而言提取时间比较久。磁珠法试剂盒配合自动化核酸提取仪提取时间大部分都在20分钟到40分钟之间，且提取过程中需要加热到60℃以上，过高的温度加上手工提取过程中高速涡旋或自动化提取中的磁棒套高速震荡，提取过程会产生气溶胶，气溶胶内可能携带病毒核酸导致(1)造成提取过程中各个样本之间交叉污染风险，影响实验结果的准确性(2)气溶胶外泄造成实验人员感染病毒的风险。而且，这两种试剂盒中使用蛋白酶K，蛋白酶K需要低温冷藏或冷冻，保存不方便并且有保存或运输不当蛋白酶K变性失活的风险。

技术实现思路

[0005]有鉴于此，本专利技术提供了一种裂解结合液、RNA提取试剂盒及RNA提取方法，该裂解结合液可以在室温状态下配合自动化核酸提取仪在9分钟内快速提取病毒RNA并且无需蛋白酶K的病毒RNA提取试剂盒，方便快捷高效，减少气溶胶污染风险。
[0006]为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
[0007]一种裂解结合液，包括DEPC水和如下浓度的组分：
[0008][0009]作为优选，所述裂解结合液包括DEPC水和如下浓度的组分：
[0010][0011]一些具体实施例中，所述裂解结合液包括DEPC水和如下浓度的组分：
[0012][0013]一些实施方案中，所述裂解结合液还包括0.1
‑
1wt％十二烷基磺酸钠和/或0.1
‑
10wt％月桂基硫酸钠。
[0014]一些具体实施例中，所述裂解结合液包括DEPC水和如下浓度的组分：
[0015][0016]本专利技术还提供了以上所述的裂解结合液在提取血液RNA中的应用。
[0017]本专利技术还提供了RNA提取试剂盒，包括本专利技术所述的裂解结合液。
[0018]一些实施方案中，所述RNA提取试剂盒还包括清洗液、洗脱液和磁珠中的至少一种。
[0019]一些实施方案中，所述清洗液包括第一清洗液和第二清洗液；
[0020]所述第一清洗液包括以下组分：
[0021]0.1
‑
10M盐酸胍；
[0022]0.1
‑
10M氯化钠；
[0023]0.01
‑
0.5vol％吐温
‑
20；
[0024]10
‑
60vol％异丙醇；
[0025]第二清洗液为80％乙醇；
[0026]所述洗脱液为DEPC水。
[0027]本专利技术还提供一种病毒RNA的提取方法，利用本专利技术所述的裂解结合液处理样本后提取待测样本中的RNA，或利用本专利技术所述的试剂盒提取待测样本中的RNA。
[0028]一些实施方案中，所述提取方法具体包括如下步骤：
[0029]1)将磁珠进行羧基改性后悬浮于缓冲液中，得到第一混合液；
[0030]3)将待测样本中加入裂解结合液得到第二混合液；
[0031]4)第一混合液与第二混合，得到含有核酸
‑
磁珠的第三混合液；
[0032]5)利用磁力吸附第三混合液的中核酸
‑
磁珠，去除上清液；收集磁珠，依次用第一清洗液和第二清洗液洗涤，干燥，再加入第二清洗液洗涤；
[0033]6)将洗涤后的磁珠干燥，然后用洗脱液洗脱，收集洗脱液，获得病毒RNA。
[0034]一些具体实施方案中，所述磁珠为超顺磁性二氧化硅磁珠；所述第一混合液中，超顺磁性二氧化硅磁珠的浓度为10
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100mg/mL，具体浓度可为10、30mg/mL、50mg/mL、80mg/mL或100mg/mL。
[0035]本专利技术提供了一种裂解结合液、RNA提取试剂盒及RNA提取方法。利用该裂解结合液在室温环境下不加热提取病毒样本中的RNA，不容易产生气溶胶污染；提取过程方便快捷，无需使用蛋白酶K；提取时间缩短至9分钟，大大节省了病毒RNA提取时间，同时提取效果大于等于市面上大部分同类试剂盒，提取出的RNA可直接用于后续RT
‑
qPCR检测或保存于
‑
70℃冰箱中。
附图说明
[0036]图1示本专利技术RNA提取试剂盒自动化提取时各试剂的放置示意图；
[0037]图2示本专利技术RNA提取试剂盒自动化提取过程示意图；
[0038]图3示实施例3中利用qPCR检测加热和不加热对RNA提取的影响；
[0039]图4示实施例4中利用qPCR检测试剂预冷和室温对RNA提取的影响；
[0040]图5示实施例5中利用qPCR比较本专利技术试剂盒与对照试剂盒不加热对提取的RNA的影响。
具体实施方式
[0041]本专利技术提供了一种裂解结合液、RNA提取试剂盒及RNA提取方法。本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本专利技术。本专利技术的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本
技术实现思路
、精神和范围内对本文的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本专利技术技术。
[0042]本专利技术采用的试材皆为普通市售品，皆可于市场购得。
[0043]下面结合实施例，进一步阐述本专利技术：
[0044]实施例1裂解结合液及试剂盒
[0045](一)试剂盒组成：
[0046]第一清洗液(0.1
‑
10M盐酸胍；0.1
‑
10M氯化钠；0.01
‑
0.5vol％吐温
‑
20；
[0047]10
‑
60vol％异丙醇；
[0048]第二清洗液为80％乙醇；<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种裂解结合液，包括DEPC水和如下浓度的组分：2.根据权利要求1所述的裂解结合液，其特征在于，包括DEPC水和如下浓度的组分：3.根据权利要求1所述的裂解结合液，其特征在于，包括DEPC水和如下浓度的组分：
4.根据权利要求1～3任一项所述的裂解结合液，其特征在于，还包括0.1
‑
1wt％十二烷基磺酸钠和/或0.1
‑
10wt％月桂基硫酸钠。5.权利要求1～4任一项所述的裂解结合液在提取血液RNA中的应用。6.RNA提取试剂盒，包括：权利要求1～4任一项所述的裂解结合液；和清洗液、洗脱液和磁珠中的至少一种。7.根据权利要求6所述的RNA提取试剂盒，其特征在于，所述清洗液包括第一清洗液和第二清洗液；所述第一清洗液包括以下组分：0.1
‑
10M盐酸胍；0.1
‑
10M氯化钠；0.01
‑
0.5vol％吐温
‑<...

【专利技术属性】
技术研发人员：庞经昊，黄明贤，任辉，
申请(专利权)人：苏州海狸生物医学工程有限公司，
类型：发明
国别省市：