一种阿德福韦酯片致突变杂质的检测方法技术

本发明专利技术公开了一种阿德福韦酯片致突变杂质的检测方法。该检测方法为：精密量取对照品溶液与供试品溶液，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算氯化苄的含量。本发明专利技术将阿德福韦酯片致突变杂质分离出来，从而实现阿德福韦酯片中其他杂质与致突变杂质的分离与测定，实现对制剂的质量控制。本发明专利技术采用操作简单的梯度洗脱方式，运行时间较短，灵敏度高，分离度和重现性好。分离度和重现性好。分离度和重现性好。

【技术实现步骤摘要】
一种阿德福韦酯片致突变杂质的检测方法


[0001]本专利技术属于医药质量检测
，具体涉及一种阿德福韦酯片致突变杂质的检测方法。

技术介绍

[0002]阿德福韦酯片为白色或类白色片，适用于治疗有乙型肝炎病毒活动复制证据，并伴有血清氨基酸转移酶(ALT或AST)持续升高或肝脏组织学活动性病变的肝功能代偿的成年慢性乙型肝炎患者。羟甲基杂质结构中具有N
‑
羟甲基类警示结构的致突变杂质，主要由阿德福韦单酯的降解产生。阿德福韦单酯为阿德福韦酯的主要降解杂质，阿德福韦单酯与其降解产物甲醛发生反应产生羟甲基杂质。生成过程如下：
[0003]
技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供一种阿德福韦酯片致突变杂质的检测方法。
[0005]所述的阿德福韦酯片致突变杂质的检测方法为：精密量取对照品溶液与供试品溶液，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算氯化苄的含量；色谱条件为：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.02
‑
0.05mol/L磷酸二氢钾溶液为流动相A，以乙腈为流动相B；检测波长为210
‑
280nm；流速为每分钟0.8
‑
1.1mL；柱温为25
‑
40℃；进样体积5
‑
20μl，洗脱梯度为：
[0006][0007][0008]所述供试品溶液的配制方法为：将待测药品研磨成细粉精密称定后置于50ml量瓶
中，加溶剂40ml，冰浴超声15分钟使阿德福韦酯溶解，放置至室温，用溶剂稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液；所述的溶剂为体积比为82:18的磷酸二氢钾溶液和乙腈混合液，所述磷酸二氢钾溶液的浓度为0.025mol/L。
[0009]所述对照品溶液的配制方法为：取羟甲基杂质对照品精密称定，加溶剂溶解并定量稀释制成每1ml中含羟甲基杂质2μg的溶液；所述的溶剂为体积比为82:18的磷酸二氢钾溶液和乙腈混合液，所述磷酸二氢钾溶液的浓度为0.025mol/L。
[0010]本专利技术将阿德福韦酯片致突变杂质分离出来，从而实现阿德福韦酯片中其他杂质与致突变杂质的分离与测定，实现对制剂的质量控制。本专利技术采用操作简单的梯度洗脱方式，运行时间较短，灵敏度高，分离度和重现性好。
附图说明
[0011]图1为具体实施方式得到的检测特征图谱。
具体实施方式
[0012]配制检测中用到的各溶液：
[0013]溶剂：0.025mol/L磷酸二氢钾溶液
‑
乙腈(82:18)；
[0014]供试品溶液：取本品细粉适量(约相当于阿德福韦酯50mg)，精密称定，置50ml量瓶中，加溶剂约40ml，冰浴超声15分钟使阿德福韦酯溶解，放置至室温，用溶剂稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液。
[0015]对照品溶液：取羟甲基杂质对照品适量，精密称定，加溶剂溶解并定量稀释制成每1ml中含羟甲基杂质2μg的溶液。
[0016]系统适用性溶液：分别取阿德福韦单酯、羟甲基杂质对照品适量，加溶剂溶解并稀释制成每1ml中分别约含阿德福韦单酯25μg与羟甲基杂质2μg的溶液，必要时置冰浴中超声使溶解。
[0017]灵敏度溶液：取阿德福韦酯对照品适量，加溶剂溶解并稀释制成每1ml中约含0.1μg的溶液。
[0018]空白辅料：精密称取空白辅料700mg，置50ml量瓶中，加稀释剂约40ml，冰浴超声15分钟，放置至室温，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
[0019]色谱条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.02～0.05mol/L磷酸二氢钾溶液为流动相A，以乙腈为流动相B，进行梯度洗脱；检测波长为210～280nm；流速为每分钟0.8～1.1ml；柱温为25～40℃；进样体积5～20μl；梯度洗脱条件：
[0020]时间(分钟)流动相A(％)流动相B(％)0955295548218126040216040283070383070
4295550955
[0021]系统适用性要求：系统适用性溶液色谱图中，羟甲基杂质与阿德福韦单酯峰之间的分离度应大于1.5；灵敏度溶液色谱图中，阿德福韦酯峰高的信噪比应大于10。
[0022]测定法：精密量取供试品溶液与对照品溶液，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。
[0023]专属性实验结果
[0024][0025]空白溶剂、空白辅料对羟甲基杂质的检测无干扰，分离度大于1.5，专属性实验通过。
[0026]定量限与检测限溶液配制：
[0027]定量限溶液：定量限溶液：
[0028]检测限溶液：
[0029]检测限实验结果
[0030]检测限浓度(ng/ml)检测限(ng)S/N5.2690.0052696.8
[0031]定量限实验结果
[0032][0033]检测限、定量限实验结果可满足检测需求。
[0034]线性与范围溶液配制：
[0035]羟甲基杂质贮备液：羟甲基杂质定量限溶液：液：
[0036]线性1线性1
[0037]线性2
[0038]线性3
[0039]线性4
[0040]线性5
[0041]线性与范围实验结果
[0042][0043]准确度溶液配制：
[0044]羟甲基杂质贮备液：对照品溶液：空白供试品溶液：精密称取本品细粉750mg，置50ml量瓶中，加稀释剂约40ml，冰浴超声15分钟，放置至室温，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得，平行配制3份。
[0045]准确度溶液：精密称取本品细粉750mg，9份，分别置50ml量瓶中，3份分别精密加入羟甲基杂质贮备液各1.6ml、2.0ml、2.4ml，加稀释剂约40ml，冰浴超声15分钟，放置至室温，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
[0046]准确度实验结果
[0047][0048][0049]羟甲基杂质的平均回收率(n＝9)结果为103.2％，RSD为2.4％，准确度验证结果满足需求。
[0050]重复性溶液配制：
[0051]羟甲基杂质贮备液：对照品溶液：空白供试品溶液：精密称取本品细粉750mg，置50ml量瓶中，加稀释剂约40ml，冰浴超声15分钟，放置至室温，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得，平行配制3份。
[0052]重复性溶液：精密称取本品细粉750mg，6份，分别置50ml量瓶中，各精密加入羟甲基杂质贮备液各2.0ml，加稀释剂约40ml，冰浴超声15分钟，放置至室温，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
[0053]重复性实验结果
[0054][0055]重复性结果满足检测需求。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种阿德福韦酯片致突变杂质的检测方法，其特征在于，所述检测方法具体操作为：精密量取对照品溶液与供试品溶液，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算氯化苄的含量；色谱条件为：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.02
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0.05mol/L磷酸二氢钾溶液为流动相A，以乙腈为流动相B；检测波长为210
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280nm；流速为每分钟0.8
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1.1mL；柱温为25
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40℃；进样体积5
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20μl，洗脱梯度为：时间(分钟)流动相A(％)流动相B(％)0955295548218126040216040283070383070429555...

【专利技术属性】
技术研发人员：孔凡刚，程红艳，杜爽，李续，
申请(专利权)人：辰欣药业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：