一种新疆彩色棉花毛细管电泳DNA指纹图谱的构建方法及棉花品种鉴定方法技术

本发明专利技术提供了一种新疆彩色棉花毛细管电泳DNA指纹图谱的构建方法及棉花品种鉴定方法，属于植物品种鉴定技术领域。本发明专利技术基于毛细管电泳对新疆审定的彩色棉花品种进行了SSR标记的筛选，其中毛细管电泳不需要经过染色、显影等复杂过程进行样品基因型分析，节省时间和利于大样本处理，便于品种真实性及纯度检测上的应用；毛细管电泳检测方法，依据待检品种目标峰的位置，与同一毛细管泳道的内标比较，通过荧光线直接读出目标DNA特异目标条带大小，精确到1bp。精确到1bp。精确到1bp。

【技术实现步骤摘要】
一种新疆彩色棉花毛细管电泳DNA指纹图谱的构建方法及棉花品种鉴定方法


[0001]本专利技术涉及植物品种鉴定
，尤其涉及一种新疆彩色棉花毛细管电泳DNA指纹图谱的构建方法及棉花品种鉴定方法。

技术介绍

[0002]天然彩色棉是采用现代生物工程技术培育出来的一种在棉花吐絮时纤维就具有天然色彩的新型纺织原料。天然彩棉的纤维色彩天然，不需要漂白、染色，被公认为是“零污染”的绿色生态纺织品，深受广大消费者的喜爱。目前，在新疆，就已经形成我国最大的天然彩色棉花生产基地。
[0003]彩色棉花种子是新疆彩色棉花生产最重要的生产资料之一，而优良品种是彩色棉花高产和稳产的基础，品种混杂和纯度降低会明显降低彩色棉花的产量和质量。因此，彩色棉花品种鉴定对于彩色棉花育种至关重要。
[0004]常用的农作物品种鉴定方法主要有形态学鉴定法、物理化学鉴定法、生化鉴定法和DNA分子标记指纹图谱鉴定法。由于分子生物学技术的发展，利用分子标记技术构建作物品种DNA指纹图谱具有快速简便、检测准确的优点，已成为品种间鉴别、种子纯度检测的重要技术工具。如于1991年创立的微卫星DNA或短串联重复(STR)，是一种真核生物基因组中普遍存在的重复序列，重复序列一般由1～6个碱基组成，重复次数在不同物种或同一物种不同基因型之间是高度可变的。这些重复序列两端大多是保守的单拷贝序列，因此可以根据保守序列设计特异引物，通过PCR技术将中间的核心重复序列扩增出来，利用琼脂糖电泳或聚丙烯酰胺凝胶电泳分析技术可获得其长度多态性。
[0005]但是，利用琼脂糖电泳或聚丙烯酰胺凝胶电泳分析技术获得长度多态性存在不足之处，例如，不能检测出特异性目标条带大小，难以满足多批次棉花品种的鉴定与比较。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的在于提供一种新疆彩色棉花毛细管电泳DNA指纹图谱的构建方法及棉花品种鉴定方法，本专利技术的方法用于大样本处理，处理精度高。
[0007]为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
[0008]本专利技术提供了一种新疆彩色棉花毛细管电泳DNA指纹图谱的构建方法，包括以下步骤：
[0009]从已知的定位在染色体上的棉花SSR引物中筛选在不同棉种间有多态性的引物，作为核心引物；利用所述核心引物对新疆已审定的彩色棉花品种进行PCR扩增，得到扩增产物；
[0010]对所述扩增产物进行毛细管电泳，得到新疆彩色棉花毛细管电泳DNA指纹图谱。
[0011]优选的，所述核心引物包括：NBRI_HQ527820、HAU1952b、NAU4022、MON_CGR5447、NAU3774、BNL3031、HAU2588、NAU2126、NAU2240、NBRI_HQ526730、NAU3736b、Gh107、MON_
DPL0502、MGHES31、NAU4089、CCRI303、MON_SHIN
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1481、DPL0238、HAU
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SNP085、NAU2713a、NAU7049、BNL2535b、HAU3371、NAU3419c、CK988221
‑
PR
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ss、NAU3346b、CCRI596a、HAU3071a、NAU2631、HAU4748、HAU
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SNP113、BNL2865、MON_DPL0375c、Gh330、HAU2770、MUSS422a、MON_SHIN
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1584、MON_CGR5732和MON_CGR6812中的一种或几种。
[0012]优选的，所述新疆已审定彩色棉花品种包括：Xincaimian1、Xincaimian2、Xincaimian3、Xincaimian4、Xincaimian、Xincaimian6、Xincaimian7、Xincaimian8、Xincaimian10、Xincaimian11、Xincaimian12、Xincaimian13、Xincaimian14、Xincaimian15、Xincaimian16、Xincaimian17、Xincaimian18、Xincaimian19、Xincaimian20、Xincaimian21、Xincaimian22、Xincaimian23、Xincaimian24、Xincaimian25、Xincaimian26、Xincaimian27和Xincaimian28中的一种或几种。
[0013]优选的，所述PCR扩增的体系以10μl计，包括以下组分：DNA模板2.5μl、正向引物0.16μl、反向引物0.16μl、lodNTP 0.25μl、10
×
Taq buffer 1μl、MgCl20.8μl、Taq酶0.16μl和ddH2O 4.97μl。
[0014]优选的，所述PCR扩增的程序包括：94℃预变性3min；94℃变性50sec，58℃退火45sec，72℃延伸1min，35个循环；72℃延伸10min。
[0015]优选的，所述毛细管电泳得到电泳条带，所述毛细管电泳后还包括：以所述电泳条带中具有多态性的电泳条带构建新疆彩色棉花毛细管电泳DNA指纹图谱。
[0016]本专利技术还提供了上述方案所述构建方法构建得到的新疆彩色棉花毛细管电泳DNA指纹图谱在新疆彩色棉花品种鉴定中的应用。
[0017]优选的，所述新疆彩色棉花品种鉴定的方法包括以下步骤：
[0018]利用所述核心引物对待测彩色棉花品种进行PCR扩增，得到扩增产物；对所述扩增产物进行毛细管电泳，得到扩增产物的片段大小；
[0019]比对上述方案所述构建方法构建得到的新疆彩色棉花毛细管电泳DNA指纹图谱和待测彩色棉花品种的扩增产物的片段大小，确定待测彩色棉花品种。
[0020]本专利技术提供了一种新疆彩色棉花毛细管电泳DNA指纹图谱的构建方法，本专利技术基于毛细管电泳对新疆已审定的彩色棉花品种进行了SSR标记的筛选，其中毛细管电泳不需要经过染色、显影等复杂过程进行样品基因型分析，节省时间和利于大样本处理，便于品种真实性及纯度检测上的应用；毛细管电泳检测方法，依据待检品种目标峰的位置，与同一毛细管泳道的内标比较，通过荧光线直接读出目标DNA特异目标条带大小，精确到1bp。本专利技术基于毛细管电泳分别对新疆彩色棉花品种构建SSR分子指纹图谱，由于毛细管电泳扩增产物读取目标谱带能精确到1bp，所以对于品种在某一引物具有唯一特定谱带时，就可以鉴别该品种与其他品种，在进行品种DNA指纹检测时，简便快捷且准确性高。
附图说明
[0021]图1为新疆彩色棉花毛细管电泳DNA指纹图谱。
具体实施方式
[0022]本专利技术提供了一种新疆彩色棉花毛细管电泳DNA指纹图谱的构建方法，包括以下步骤：
[0023]从已知的定位在染色体上的棉花SSR引物中筛选在不同棉种间有多态性的引物，作为核心引物；利用所述核心引物对新疆已审定彩色棉花品种进行PCR扩增，得到扩增本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种新疆彩色棉花毛细管电泳DNA指纹图谱的构建方法，包括以下步骤：从已知的定位在染色体上的棉花SSR引物中筛选在不同棉种间有多态性的引物，作为核心引物；利用所述核心引物对新疆已审定的彩色棉花品种进行PCR扩增，得到扩增产物；对所述扩增产物进行毛细管电泳，得到新疆彩色棉花毛细管电泳DNA指纹图谱。2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述核心引物包括：NBRI_HQ527820、HAU1952b、NAU4022、MON_CGR5447、NAU3774、BNL3031、HAU2588、NAU2126、NAU2240、NBRI_HQ526730、NAU3736b、Gh107、MON_DPL0502、MGHES31、NAU4089、CCRI303、MON_SHIN
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1481、DPL0238、HAU
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SNP085、NAU2713a、NAU7049、BNL2535b、HAU3371、NAU3419c、CK988221
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PR
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ss、NAU3346b、CCRI596a、HAU3071a、NAU2631、HAU4748、HAU
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SNP113、BNL2865、MON_DPL0375c、Gh330、HAU2770、MUSS422a、MON_SHIN
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1584、MON_CGR5732和MON_CGR6812中的一种或几种。3.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述新疆已审定彩色棉花品种包括：Xincaimian1、Xincaimian2、Xincaimian3、Xincaimian4、Xincaimian5、Xincaimian6、Xincaimian7、Xincaimian8、Xincaimian10、Xincaimian11、Xi...

【专利技术属性】
技术研发人员：尤春源，聂新辉，田晓敏，林忠旭，鲍健，唐秉晖，张大伟，潘振远，雷杰杰，匡猛，林海荣，
申请(专利权)人：石河子大学，
类型：发明
国别省市：