一种缩酚酸环醚类化合物、菌株、制备方法及应用技术

本发明专利技术公开了一种式(Ⅰ)所示缩酚酸环醚类化合物、菌株、制备方法及在制备抗菌药物中的应用，本发明专利技术筛选的篮状真菌WHUF0362培养方便易存活，利用该篮状真菌WHUF0362发酵提取的化合物(I)，结构新颖，且对幽门螺旋杆菌26695和幽门螺旋杆菌G27有一定的抑制作用，MIC值为16μg/ml，其提取分离方法简易，便于对其进行进一步的药理和临床研究，为开发疗效好且毒副作用小的新型抗菌药物创造条件。用小的新型抗菌药物创造条件。用小的新型抗菌药物创造条件。

【技术实现步骤摘要】
一种缩酚酸环醚类化合物、菌株、制备方法及应用
(一)

[0001]本专利技术涉及一种缩酚酸环醚类化合物、菌株、制备方法及应用。
(二)
技术介绍

[0002]海洋真菌是一类生活在海洋中的能形成孢子且有真核结构的微生物。大多数真菌栖于某种基物而生活，真菌在海洋中的分布主要取决于寄主的分布，在潮间带高潮线、河口、浅海沙滩、深海沉积物及众多海洋生物中均有分布。海洋真菌次级代谢产物具有结构丰富多样、生物活性谱广且强度高的特点，是海洋活性天然产物的重要来源。生物活性主要有抗菌、抗肿瘤、抗氧化、酶抑制活性等。如现已广泛用于临床的抗生素头孢菌素C，是从海洋真菌中分离获得。
[0003]Chen等人曾报道的tenellic acid A methyl ester为缩酚酸环醚类化合物，分离自海洋软木软柳珊瑚来源的真菌Talaromyces sp.的发酵液中，该化合物对HepG2、Hep3B、MCF
‑
7、PC
‑
3和HCT
‑
116细胞系表现出细胞毒性。但从海洋微生物中获得具有抗幽门螺旋杆菌的化合物文献报道较少。
[0004]本专利技术筛选得到一株菌株
‑
海洋来源的篮状真菌WHUF0362，经发酵培养获得的新缩酚酸环醚类化合物，迄今在国内外尚未见有与此雷同的化合物及活性的相关专利或文献报道。
(三)
技术实现思路

[0005]本专利技术目的是提供一种式(Ⅰ)所示具有酯基的新缩酚酸环醚类化合物及其制备方法和在制备抗菌药物中的应用，该化合物利用篮状真菌WHUF0362发酵培养制备，具有抑制幽门螺旋杆菌26695或幽门螺旋杆菌G27活性，为治疗幽门螺旋杆菌感染提供了新的途径。
[0006]本专利技术采用的技术方案是：
[0007]第一方面，本专利技术提供了一种式(Ⅰ)所示缩酚酸环醚类化合物：
[0008][0009]第二方面，本专利技术提供了一种式(Ⅰ)所示缩酚酸环醚类化合物的制备方法，所述方法包括如下步骤：
[0010](1)发酵培养：篮状真菌(Talaromyces sp.)WHUF0362接种至大米培养基中，室温(25
‑
30℃)静置发酵10
‑
15天(优选15天)，得到发酵物；所述大米培养基是将大米与水以质
量比1：1
‑
10混合而成，优选1:1.5；所述大米可以是可食用稻米，优选东北大米；所述篮状真菌(Talaromyces sp.)WHUF0362保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏日期2021年11月30日，保藏编号CCTCC NO：M20211516，地址：中国武汉武汉大学；
[0011](2)粗提物：将发酵物搅拌分散，加入等体积的乙酸乙酯超声提取，过滤，滤液减压浓缩至无液体冷凝，干燥(优选60℃干燥5h)，得到粗提物；
[0012](3)分离提取：
[0013]a、粗提物用乙酸乙酯溶解后采用正相硅胶色谱柱分离，依次用体积比10:1、1:1石油醚
‑
乙酸乙酯，体积比30:1、5：1二氯甲烷
‑
甲醇，纯甲醇作为洗脱剂进行洗脱，洗脱速度均为10
‑
30mL/min(优选20mL/min)，洗脱体积均为2
‑
6个(优选5个)柱体积，每瓶接500mL流出液，经薄层层析(TLC，展开剂为二氯甲烷
‑
甲醇9:1，v/v)点板监测，合并Rf为0.71
‑
1.0的流出液，记为组分A1；合并Rf为0.61
‑
0.7的流出液，记为组分A2；合并Rf为0.51
‑
0.6的流出液，记为组分A3；合并Rf为0.41
‑
0.5的流出液，记为组分A4；合并Rf为0.31
‑
0.4的流出液，记为组分A5；合并Rf为0.21
‑
0.3的流出液，记为组分A6；合并Rf为0.1
‑
0.2的流出液，记为组分A7；
[0014]b、组分A3再经MCI填料开放色谱柱分离，以体积浓度20％、40％、60％、70％、80％、85％、90％、95％、100％的甲醇
‑
水做为洗脱剂进行洗脱，洗脱速度均为10
‑
30mL/min(优选20mL/min)，洗脱体积均为2
‑
6个(优选5个)柱体积，合并20％甲醇
‑
水的流出液，记为组分C1；合并40％甲醇
‑
水的流出液，记为组分C2；合并60％甲醇
‑
水的流出液，记为组分C3；合并70％甲醇
‑
水的流出液，记为组分C4；合并80％甲醇
‑
水的流出液，记为组分C5；合并85％甲醇
‑
水的流出液，记为组分C6；合并90％甲醇
‑
水的流出液，记为组分C7；合并95％甲醇
‑
水的流出液，记为组分C8；合并100％甲醇
‑
水的流出液，记为组分C9；
[0015]c、组分C9经正相硅胶色谱柱分离，依次用体积比10:1、5:1石油醚
‑
乙酸乙酯作为洗脱剂进行洗脱，洗脱速度均为5
‑
15mL/min(优选10mL/min)，洗脱体积均为2
‑
6个(优选5个)柱体积，每瓶接500mL流出液，经TLC(展开剂为石油醚
‑
乙酸乙酯2:1，v/v)点板，合并Rf为0.91
‑
1.0的流出液，记为组分C9‑
1；合并Rf为0.81
‑
0.9的流出液，记为组分C9‑
2；合并Rf为0.71
‑
0.8的流出液，记为组分C9‑
3；合并Rf为0.61
‑
0.7的流出液，记为组分C9‑
4；合并Rf为0.51
‑
0.6的流出液，记为组分C9‑
5；合并Rf为0.41
‑
0.5的流出液，记为组分C9‑
6；合并Rf为0.21
‑
0.4的流出液，记为组分C9‑
7；合并Rf为0
‑
0.2的流出液，记为组分C9‑
8；
[0016]d、步骤c收集的C9‑
3组分再经半制备型高效液相色谱分离，以体积比69：31的甲醇
‑
水等度洗脱，收集27.5min处的馏分，浓缩蒸干(优选40
‑
60℃)，得到式(I)所示缩酚酸环醚类化合物。
[0017]进一步，步骤(1)中篮状真菌WHUF0362发酵前先进行活化和种子扩大培养，再将种子液以体积浓度5％的接种量接种至大米培养基中，所述活化和种子扩大培养为：将篮状真菌WHUF0362接种到平板培养基中，于28℃培养箱培养3
‑
5d，优选3d天，至菌落长至成熟；取孢子接种于ISP4液体培养基中，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种式(Ⅰ)所示缩酚酸环醚类化合物：2.一种权利要求1所述缩酚酸环醚类化合物的制备方法，其特征在于所述方法包括如下步骤：(1)发酵培养：篮状真菌(Talaromyces sp.)WHUF0362接种至大米培养基中，室温静置发酵10
‑
15天，得到发酵物；所述大米培养基是将大米与水以质量比1：1
‑
10混合而成；所述篮状真菌WHUF0362保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏日期2021年11月30日，保藏编号CCTCC NO：M20211516，地址中国武汉武汉大学；(2)粗提物：将发酵物搅拌分散，加入等体积的乙酸乙酯超声提取，过滤，滤液减压浓缩至无液体冷凝，干燥，得到粗提物；(3)分离提取：a、粗提物用乙酸乙酯溶解后采用正相硅胶色谱柱分离，依次用体积比10:1、1:1石油醚
‑
乙酸乙酯，体积比30:1、5：1二氯甲烷
‑
甲醇，纯甲醇作为洗脱剂进行洗脱，洗脱速度均为10
‑
30mL/min，洗脱体积均为2
‑
6个柱体积，每瓶接500mL流出液，以体积比9:1的二氯甲烷
‑
甲醇为展开剂进行薄层层析点板监测，合并Rf值为0.71
‑
1.0的流出液，记为组分A1；合并Rf值为0.61
‑
0.7的流出液，记为组分A2；合并Rf值为0.51
‑
0.6的流出液，记为组分A3；合并Rf值为0.41
‑
0.5的流出液，记为组分A4；合并Rf值为0.31
‑
0.4的流出液，记为组分A5；合并Rf值为0.21
‑
0.3的流出液，记为组分A6；合并Rf值为0.1
‑
0.2的流出液，记为组分A7；b、组分A3再经MCI色谱柱分离，以体积浓度20％、40％、60％、70％、80％、85％、90％、95％、100％的甲醇
‑
水做为洗脱剂进行洗脱，洗脱速度均为10
‑
30mL/min，洗脱体积均为2
‑
6个柱体积，合并20％甲醇
‑
水的流出液，记为组分C1；合并40％甲醇
‑
水的流出液，记为组分C2；合并60％甲醇
‑
水的流出液，记为组分C3；合并70％甲醇
‑
水的流出液，记为组分C4；合并80％甲醇
‑
水的流出液，记为组分C5；合并85％甲醇
‑
水的流出液，记为组分C6；合并90％甲醇
‑
水的流出液，记为组分C7；合并95％甲醇
‑
水的流出液，记为组分C8；合并100％甲醇
‑
水的流出液，记为组分C9；c、组分C9经正相硅胶色谱柱分离，依次用体积比10:1、5:1石油醚
‑
乙酸乙酯作为洗脱剂进行洗脱，洗脱速度均为5
‑
15mL/min，洗脱体积均为2
‑
6个柱体积，每瓶接500mL流出液，经体积比2:1的石油醚
‑
乙酸乙酯进行薄层层析点板监测，合并Rf值为0.91
‑
1.0的流出液，记为组分C9‑<...

【专利技术属性】
技术研发人员：吕华伟，洪葵，苏海波，薛雅馨，李行诺，
申请(专利权)人：武汉大学，
类型：发明
国别省市：