逆转血小板聚集的方法和组合物技术

本文提供了用于溶解在采集的血样中形成的血小板凝块的方法、相关组合物和试剂盒。本发明专利技术的方法、组合物和试剂盒可用于提高实验室环境中血样质量和血液测定准确度，尤其是在防止误诊诸如假性血小板减少症或假性白细胞增多症。多症。多症。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】逆转血小板聚集的方法和组合物
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求于2019年5月9日提交的美国临时专利申请序列号US 62/845,807的优先权。上述申请的全部内容通过引用整体并入本文。


[0003]本专利技术总体上涉及血小板凝集，更具体地涉及用于逆转和/或抑制血样中血小板聚集的方法和组合物。

技术介绍

[0004]血小板聚集是一种常见的实验室伪影，使得报告血小板计数复杂化或无法报告血小板计数。大多数血液学分析通过测定血小板的大小来计算其数量。特定大小范围之外的颗粒(例如，血细胞)被血小板通道忽略，并且不计为血小板。因此，当血样中的血小板由于伪影而聚集在一起时，仪器会排除这些血小板凝块并生成虚假的低血小板计数，称为假性血小板减少症(PTCP)，造成诊断错误、不必要的检查、患者焦虑，甚至不必要的血小板输注。
[0005]血小板聚集可能由各种潜在机制引起。例如，乙二胺四乙酸依赖性PTCP(EDTA
‑
PTCP)在实验室中很常见，估计在住院患者中的患病率为0.1％至2％。原因在于，针对血小板表面糖蛋白(GP)IIb/IIIa上表位的自身抗体引起的血小板在采血管中离体凝聚。EDTA诱导GP IIb/IIIa的构象变化，使这些表位暴露并造成血小板聚集。有人建议在替代抗凝剂(诸如柠檬酸盐或肝素)中采集血样可能有助于预防EDTA
‑
PTCP。然而，高达17％的EDTA
‑
PTCP患者在用柠檬酸盐采集血样时也会出现这种现象。
[0006]据报道，可能存在造成血小板聚集的其他因素，包含不正确的采血方法(诸如毛细血管采血)、抽血延迟和将血样暴露在低温下。通过离体补充阿米卡星逆转血小板聚集。病毒感染或使用药物和药品也可能是血小板聚集的诱因。
[0007]最近的研究集中在预防血小板凝块形成或在体内溶解血小板凝块，以避免血栓栓塞发作。需要可用于逆转或溶解在所采集的血样中形成的血小板凝块的方法和组合物。本文提供的专利技术满足这些需求。

技术实现思路

[0008]本文提供了用于逆转血样中血小板聚集的方法、组合物和试剂盒。在某些实施例中，本文提供用于溶解血样中血小板凝块的方法。在一些实施例中，该方法包含使所述血样与能够减少所述血样中反应性Ca
2+
的螯合剂接触。在一些实施例中，通过将血液抽入盛有肝素的容器中来采集所述血样。
[0009]在一些方面，所述肝素是肝素锂(LiHep)。在一些方面，所述螯合剂包含乙二胺四乙酸(EDTA)或其盐。在一些方面，所述螯合剂包含柠檬酸或其盐。在一些方面，通过使所述螯合剂与含有血小板凝块的所述血样接触来进行所述接触步骤。
[0010]在一些方面，所述螯合剂包含EDTA或其盐，并且通过将EDTA或其盐与所述血样接
触至最终EDTA浓度不超过约20mM进行所述接触步骤。在一些方面，通过使EDTA或其盐与所述血样接触至最终EDTA浓度范围为约4mM至约20mM EDTA进行所述接触步骤。
[0011]在一些方面，所述螯合剂包含柠檬酸或其盐，并且其中通过使酸性柠檬酸盐葡萄糖(ACD)溶液与所述血样接触至最终ACD浓度范围为约5体积％至约20体积％进行所述接触步骤。在一些方面，在所述接触步骤之后，所述方法还包含向所述血样施加物理力。在一些方面，所述物理力选自涡旋、移液管吸取、超声处理、声学混合、机械振动(例如，摇动、倒置、搅拌)和本领域已知的其他合适形式的物理力。
[0012]在一些方面，所述螯合剂包含EDTA或EDTA的盐，以及柠檬酸或柠檬酸的盐，并且其中通过使EDTA与所述血样接触至最终EDTA浓度为约18mM，并使所述ACD溶液与所述血样接触至最终ACD浓度为约9.7体积％进行所述接触步骤。在一些方面，所述螯合剂包含EDTA或EDTA的盐，以及柠檬酸或柠檬酸的盐，并且其中通过使EDTA或EDTA的盐与所述血样接触至最终EDTA浓度为约16.5mM，并使所述ACD溶液与所述血样接触至最终ACD浓度为约17.6体积％进行所述接触步骤。在一些方面，所述方法提高了测定的准确度。在一些方面，所述测定是全血细胞计数(CBC)测定、红细胞(RBC)计数测定、白细胞(WBC)计数测定、白细胞(WBC)分类测定、血小板计数测定或平均血小板容积(MPV)测定。在一些方面，所述方法防止误诊病症。在一些方面，所述误诊是假性血小板减少症或假性白细胞增多症。
[0013]在实施例中，本文提供了用于采集血样的方法。在一些实施例中，该方法包含将血液抽入盛有肝素的容器中以形成所述血样，以及使所述血样与能够减少所述血样中反应性Ca
2+
的螯合剂接触，从而逆转或防止血小板聚集并增加血小板计数。
[0014]在一些方面，所述螯合剂包含乙二胺四乙酸(EDTA)或其盐。在一些方面，通过使EDTA或其盐与所述血样接触以达到最终EDTA浓度不超过20mM进行所述接触步骤。在一些方面，通过使EDTA或其盐与所述血样接触至最终达到最终EDTA浓度范围为约4mM至约20mM进行所述接触步骤。在一些方面，所述最终EDTA浓度为约18mM或约16.5mM。
[0015]在一些方面，所述螯合剂包含酸性柠檬酸盐葡萄糖(ACD)溶液。在一些方面，通过使ACD与所述血样接触以达到最终ACD浓度范围为约5体积％至约20体积％进行所述接触步骤。在一些方面，所述最终ACD浓度为约9.7体积％或约17.6体积％。
[0016]在一些实施例中，所述方法还包含在对所述血样进行测定之前对所述血样施加物理力。在一些方面，所述物理力选自涡旋、移液管吸取、超声处理、声学混合、机械振动(例如，摇动、倒置、搅拌)和本领域已知的其他合适形式的物理力。在一些方面，盛有肝素的管是含LiHep的管。
[0017]在一个实施例中，本文提供了进行血液测定的方法。在一些方面，该方法包含以下步骤：通过将血液抽入盛有肝素的容器中来提供从受试对象采集的血样；从所述血样中获得两等分试样或更多等分试样；使所述血样的第一等分试样与乙二胺四乙酸(EDTA)或其盐和酸性柠檬酸盐葡萄糖(ACD)溶液接触；以及使所述第一等分试样进行选自一种或多种免疫测定、血小板激活测定和血细胞计数测定的第一测定。
[0018]在一些实施例中，在对所述第一等分试样进行所述第一测定之前，所述方法还包含对所述血样施加物理力。在一些方面，所述物理力是涡旋、移液管吸取、超声处理、声学混合和/或机械振动。在一些方面，所述血细胞计数测定包含全血细胞计数(CBC)测定、红细胞(RBC)计数测定、白细胞(WBC)计数测定、白细胞(WBC)分类测定、血小板计数测定或平均血
小板容积(MPV)测定。在一些方面，所述方法还包含将所述血样的第二等分试样进行选自一种或多种免疫测定和临床化学测定的第二测定。
[0019]在一个实施例中，本文提供了用于检测血样中血小板聚集的方法。在一些方面，该方法包含：(a)测量所述血样中第一血小板计数；(b)使所述血样与能够减本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种溶解血样中血小板凝块的方法，包括使所述血样与减少所述血样中反应性Ca
2+
的螯合剂接触，其中所述螯合剂存在的浓度小于约50体积％或约60mM。2.根据权利要求1所述的方法，其中通过将血液抽入盛有肝素的容器中来采集所述血样。3.根据权利要求2所述的方法，其中所述肝素是肝素锂(LiHep)。4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述螯合剂包括乙二胺四乙酸(EDTA)或其盐。5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中所述螯合剂包括柠檬酸或其盐。6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中通过使所述螯合剂与含有血小板凝块的所述血样接触来进行所述接触。7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中所述螯合剂包括EDTA或其盐，并且通过使EDTA或其盐与所述血样接触至最终EDTA浓度不超过约20mM进行所述接触。8.根据权利要求7所述的方法，其中通过使EDTA或其盐与所述血样接触至最终EDTA浓度范围为约4mM至20mM EDTA进行所述接触步骤。9.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中所述螯合剂包括柠檬酸或其盐，并且其中通过使酸性柠檬酸盐葡萄糖(ACD)溶液与所述血样接触至最终ACD浓度范围为约5体积％至20体积％进行所述接触。10.根据权利要求1至9中任一项所述的方法，其中在所述接触之后，所述方法还包括对所述血样施加物理力。11.根据权利要求10所述的方法，其中所述物理力是涡旋、移液管吸取、超声处理、声学混合和/或机械振动。12.根据权利要求1至11中任一项所述的方法，其中所述螯合剂包括EDTA或EDTA的盐，以及柠檬酸或柠檬酸的盐，并且其中通过使EDTA与所述血样接触至最终EDTA浓度为约18mM，并使所述ACD溶液与所述血样接触至最终ACD浓度为约9.7体积％进行所述接触。13.根据权利要求1至11中任一项所述的方法，其中所述螯合剂包括EDTA或EDTA的盐，以及柠檬酸或柠檬酸的盐，并且其中通过使EDTA或EDTA的盐与所述血样接触至最终EDTA浓度为约16.5mM，并使所述ACD溶液与所述血样接触至最终ACD浓度为约17.6体积％进行所述接触。14.根据权利要求1至13中任一项所述的方法，其中所述方法提高了测定的准确度。15.根据权利要求14所述的方法，其中所述测定是全血细胞计数(CBC)测定、红细胞(RBC)计数测定、白细胞(WBC)计数测定、白细胞(WBC)分类测定、血小板计数测定或平均血小板容积(MPV)测定。16.根据权利要求1至15中任一项所述的方法，其中所述方法防止误诊病症。17.根据权利要求16所述的方法，其中所述误诊为假性血小板减少症或假性白细胞增多症。18.一种采集血样的方法，包括将血液抽入盛有肝素的容器中以形成所述血样，以及使所述血样与能够减少所述血样中反应性Ca
2+
的螯合剂接触，其中所述螯合剂存在的浓度小于约50体积％或约60mM。19.根据权利要求18所述的方法，其中所述螯合剂包括乙二胺四乙酸(EDTA)或其盐。
20.根据权利要求18或19所述的方法，其中通过使EDTA或其盐与所述血样接触以达到最终EDTA浓度不超过约20mM进行所述接触。21.根据权利要求18或19所述的方法，其中通过将EDTA或其盐与所述血样接触以最终达到最终EDTA浓度范围为约4mM至20mM进行所述接触。22.根据权利要求21所述的方法，其中所述最终EDTA浓度为约18mM或约16.5mM。23.根据权利要求18至22中任一项所述的方法，其中所述螯合剂包括酸性柠檬酸盐葡萄糖(ACD)溶液。24.根据权利要求23所述的方法，其中通过使ACD与所述血样接触以达到最终ACD浓度范围为约5体积％至20体积％进行所述接触。25.根据权利要求24所述的方法，其中所述最终ACD浓度为约9.7体积％或约17.6体积％。26.根据权利要求18至25中任一项所述的方法，还包括在对所述血样进行测定之前对所述血样施加物理力。27.根据权利要求26所述的方法，其中所述物理力是涡旋、移液管吸取、超声处理、声学混合和/或机械振动。28.根据权利要求18至27中任一项所述的方法，其中所述盛有肝素的管是盛有肝素锂(LiHep)的管。29.一种进行血液测定的方法，包括：a)通过将血液抽入盛有肝素的容器中来提供从受试对象采集的血样；b)从所述血样中获得两等分试样或更多等分试样；c)使所述血样的第一等分试样与乙二胺四乙酸(EDTA)或其盐和酸性柠檬酸盐葡萄糖(ACD)溶液接触；以及d)对所述第一等分试样进行选自免疫测定、血小板激活测定和血细胞计数测定的第一测定，从而进行所述血液测定。30.根据权利要求29所述的方法，其中在对所述第一等分试样进行所述第一测定之前，所述方法还包括对所述血样施加物理力。31.根据权利要求30所述的方法，其中所述物理力是涡旋、移液管吸取、超声处理、声学混合和/或机械振动。32.根据权利要求29至31中任一项所述的方法，其中所述血...

【专利技术属性】
技术研发人员：F，
申请(专利权)人：特鲁维安科学公司，
类型：发明
国别省市：