固定脂肪酶的方法技术

公开了一种将脂肪酶固定到含有氨基官能团的支持物上的方法，所述方法包括在表面活性材料的存在下使所述脂肪酶与所述支持物接触。材料的存在下使所述脂肪酶与所述支持物接触。

【技术实现步骤摘要】
固定脂肪酶的方法


[0001]本专利技术涉及将脂肪酶固定到具有氨基官能团的支持物上的方法，采用所述固定的脂肪酶产生甘油三酯组合物的方法，以及脂肪酶在酯交换反应中的应用。

技术介绍

[0002]脂肪酶(E.C.3.1.1.3)属于酶家族，特异性催化三
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、二和单酰基甘油的酯键形成甘油和脂肪酸。它们还能催化诸如相互酯化、酯化、酸解、醇解和氨解的其他反应。脂肪酶的高成本导致酶促反应在经济上不具吸引力。脂肪酶的固定是提高脂肪酶工业敏感性的一种途径并且能够回收脂肪酶蛋白。采用各种途径预先处理支持物或者脂肪酶可以将脂肪酶固定在不同的支持物上。
[0003]Nevena等(NEVENA,Z.将来自皱褶念珠菌的脂肪酶固定到赛帕珠上：高碘酸氧化脂肪酶的作用(Immobilization of lipase from Candida rugosa on Sepabeads:the effect of lipase oxidation by periodates).Bioprocess Biosyst Eng.2011,第34篇,第803
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810页)描述了使用某些具有氨基官能团或者环氧基团的作为固定来自皱褶念珠菌的非特异性脂肪酶的合适的支持物。具有氨基官能团的需要用戊二醛或高碘酸活化以显示其改善的活性。
[0004]Palomo等(PALOMO,Jose M等，脂肪酶在高度疏水的支持物(十八烷基
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赛帕珠)上的界面吸附：脂肪酶的开放形式的固定、过度活化和稳定，Journal of Molecular Catalysis B:Enzymatic.2002,第19期，第20篇，第279
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286页)测试了各种脂肪酶在高度疏水支持物(例如十八烷基
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上的固定。
[0005]酶活性易受到固定试剂如戊二醛或固定支持物的影响。为了确保酶固定后的稳定性和活性，常常加入非脂肪酶蛋白如鸡蛋白蛋白或牛血清白蛋白。然而，已知这些动物蛋白质可导致过敏反应。
[0006]仍然需要简化的固定方法而不需要预先活化支持物，并且需要正确选择保留脂肪酶活性和稳定性以利于商业相关甘油三酯组合物的制备的支持物。

技术实现思路

[0007]本专利技术的目的是提供一种固定方法，其中可以避免支持物的预先活化，并且如果确实这样的话，疏水支持物如具有十八烷基的(EC
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OD)能够进行酯交换反应以获得商业上重要的产物。本专利技术的另一个目的是提供一种固定方法，所述方法避免用非脂肪酶蛋白如动物来源的白蛋白的处理以确保脂肪酶的活性和稳定性而制备甘油三酯组合物。
[0008]根据本专利技术，提供了一种在表面活性材料的存在下将脂肪酶固定到具有氨基官能团的支持物上的方法。术语氨基官能团指致力于与脂肪酶相互作用或结合的氨基基团。
[0009]本专利技术的另一方面是采用固定到具有氨基官能团的支持物上的脂肪酶，通过酶促酯交换制备甘油三酯的方法。
[0010]本专利技术的另一方面还提供了固定的脂肪酶在制备包含至少15％OPO的甘油三酯脂
肪组合物中的应用。
[0011]具有氨基官能团的支持物可以是具有氨基官能团如氨基
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环氧、或具有C1
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C24，优选的是C2
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C10碳链的烷基氨基的支持物。所述支持物包含甲基丙烯酸类聚合物。优选的是所述聚合物形成基质。
[0012]本专利技术优选的支持物含有烷基氨基官能团，如乙基氨基或己基氨基。
[0013]支持物与脂肪酶之间的作用机制或者是通过离子相互作用或者是化学结合，优选离子相互作用。
[0014]表面活性剂可以由糖(单糖、双糖或多糖)，多元醇(例如去水山梨糖醇和山梨醇)或者分子量为350到35000的聚乙二醇如PEG600、1500、4000形成。尤其合适的非离子表面活性剂是聚氧乙烯去水山梨糖醇C8
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C24脂肪酸酯，具体是源自月桂酸的那些，例如吐温或者源自油酸的那些，例如吐温
[0015]水性溶液中表面活性剂的浓度应足以确保支持物被酶有效负载。对水性溶液施用至少0.01重量％、优选0.01
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10重量％、最优选0.1
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5重量％的表面活性剂浓度可得到非常好的结果。
[0016]支持物(克)上脂肪酶的理想载量(克)为1
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20重量％，优选5
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15重量％。
[0017]施用的接触时间可以在宽范围内变化。然而，适当的接触时间为1
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72小时。
[0018]水性脂肪酶溶液优选的浓度为1
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20克/升。
[0019]虽然脂肪酶可以是任意现有技术的脂肪酶，但优选是选自以下的脂肪酶：1)来自米赫根毛霉(Rhizomucor miehei)、稻根霉菌(Rhizopus oryzae)和嗜热真菌(Thermomyces Lanuginosus)的1,3
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特异性脂肪酶，2)来自卡门柏青霉(Penicillium Camembertii)、对部分甘油三酯水解特异性的脂肪酶，如Amano G，和3)酯或甘油三酯水解特异性的脂肪酶，优选来自皱褶念珠菌(Candida rugosa)的脂肪酶。尤其优选来自稻根霉菌(Rhizopus oryzae)的1,3
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特异性脂肪酶如来自Amano的脂肪酶D。
[0020]脂肪酶的固定可以以许多不同的方式进行。适当地，支持物、脂肪酶和/或表面活性剂之间的接触作为批量工艺，作为固定床中连续工艺，作为在流化床中或者在连续搅拌罐中连续工艺进行，用脂肪酶溶液的连续移动实现所述接触。
[0021]本专利技术固定的脂肪酶可以以任意酶转化工艺施加，例如甘油三酯、甘油二酯或酯的水解，以及脂肪酸或甘油二酯或甘油三酯的酯化或酯交换。这些工艺也是本专利技术的一部分，前提是工艺中使用本专利技术固定的脂肪酶。
[0022]制备甘油三酯的优选工艺是制备包含通式为ABA的对称甘油三酯例如OPO或SOS的甘油三酯组合物，其中O是油酸，P是棕榈酸，S是选自棕榈酸和硬脂酸的饱和脂肪酸。本专利技术尤其优选的甘油三酯组合物包含至少15％OPO。
[0023]甘油三酯脂肪和油是重要的商业产品，在食品工业等利于广泛使用。一些甘油三酯具有重要营养，甘油三酯1,3
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二油酰
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棕榈酰甘油酯(OPO)是母乳脂肪的重要组分。
实施例
[0024]以下非限制性实施例阐述了本专利技术，并不以任意方式限制本专利技术的范围。除非另有说明，在实施例和通篇说明书中，所有百分比、份数和比例是基于重量的。
[0025]实施例1：具有水性脂肪酶D的的制备
[0026]制备脂肪酶溶液：根据表1制备七种脂肪酶溶液。样品N
°
7是对照样品。所有试剂在室温下以150转/分钟混合3
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24小时，然后离心本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种生产甘油三酯的方法，所述方法包括：将脂肪酶固定到含有氨基官能团的支持物上，其中将脂肪酶固定到支持物上的方法包括在表面活性材料存在下使脂肪酶与支持物接触；和使用固定的脂肪酶通过酶促酯化作用生产甘油三酯。2.根据权利要求1所述的生产甘油三酯的方法，其中，所述甘油三酯具有对称结构ABA。3.根据权利要求2所述的方法，其中，所述对称的甘油三酯是OPO。4.根据权利要求2所述的方法，其中，所述对称的甘油三酯是SOS。5.根据权利要求1
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3中任一项所述的方法，其中，原料的C52甘油三酯变化成产物为至少15重量％。6.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述脂肪酶是1,...

【专利技术属性】
技术研发人员：K，
申请(专利权)人：荷兰洛德斯克罗科兰有限公司，
类型：发明
国别省市：