一种具有脑靶向功能的雷公藤甲素和小檗碱共载纳米脂质体的制备方法技术

本发明专利技术实施例公开了一种雷公藤甲素和小檗碱共载隐形化纳米脂质体的制备方法，以柠檬酸为水化介质采用改良乙醇注入法制备PEG化空白脂质体PL和羧基端空白脂质体PL

【技术实现步骤摘要】
一种具有脑靶向功能的雷公藤甲素和小檗碱共载纳米脂质体的制备方法


[0001]本专利技术实施例涉及医药学
，尤其是一种具有脑靶向功能的隐形雷公藤甲素和小檗碱共载纳米脂质体的制备方法。

技术介绍

[0002]阿尔茨海默病(AD)是最常见的老年性痴呆，病症特点为进行性认知功能衰退和频繁出现神经系统综合征，发病年龄日趋年轻化。全球超过5000万人患有痴呆症，每年所需费用高达1万亿美元。AD已成为给患者家庭和社会带来沉重负担的重大公共卫生问题。目前AD临床治疗药物主要是姑息对症的胆碱酯酶抑制剂和谷氨酸受体拮抗剂，只能暂时缓解临床症状，无法延迟或阻断AD的病理进程，且毒副作用大、不良反应多。因此迫切需要切实有效的防治药物来抵抗这种致残，并最终致命的疾病。
[0003]雷公藤甲素TP是从雷公藤提取的非甾体类抗炎药，可以抑制神经胶质细胞的异常活化，降低炎性因子的表达，能够抑制Aβ蛋白的产生及βAPP裂解酶(BACE1)表达，显著减少细胞周期素依赖蛋白激酶5(Cdk5)和激动因子P25的表达,从而发挥抗炎、抗氧化和免疫调节作用，改善AD小鼠的认知能力。
[0004]小檗碱BR是一种常见的异喹啉类季铵生物碱，作为一种多靶点作用的药物对AD的病理具有一定的改善作用。但TP在消化、循环、血液等系统和多脏器分布，对免疫系统、血液系统、消化系统、心脏、肝脏、肾脏均具有明显的毒副作用，会引起严重不良反应，严重影响限制了TP的临床应用，同时其体内广泛分布同时降低了其脑内药物浓度和生物利用度；BR口服很难吸收、生物利用度极低，常规口服制剂脑内难以达到有效药物浓度，同时在体内广泛分布又产生心肌毒性等毒性作用，这些问题严重制约了其在AD临床治疗中的推广应用。
[0005]综上所述，现有技术存在的问题是：AD病程目前还不能被有效阻断，现有的治疗药物只能暂时缓解AD的症状，且副作用大，针对单一靶点的治疗存在较大的局限性。TP和BR在体内广泛分布，产生的多脏器毒性，生物利用度极低，到达脑部药物很少，局限了其临床应用。

技术实现思路

[0006]为解决上述技术问题，本专利技术创造的实施例提供一种具有脑靶向功能的隐形雷公藤甲素和小檗碱共载纳米脂质体的制备方法，包括：
[0007]以柠檬酸为水化介质采用改良乙醇注入法制备PEG化空白脂质体PL和羧基端空白脂质体PL
‑
COOH；
[0008]利用盐酸调解羧基端空白脂质体PL
‑
COOH的pH值为7，取梯度的PEG化空白脂质体PL，按照药脂比1:15
‑
25加入盐酸小檗碱BR溶液，得到BR
‑
PL和BR
‑
PL
‑
COOH脂质体；
[0009]在BR
‑
PL和BR
‑
PL
‑
COOH脂质体中加入雷公藤甲素TP溶液，在40
‑
60℃恒温孵育至少60min，冰水浴终止载药，制得雷公藤甲素和小檗碱共载隐形化纳米脂质体TP
‑
BR
‑
PL和TP
‑
BR
‑
PL
‑
COOH。
[0010]进一步，以柠檬酸为水化介质采用改良乙醇注入法制备PEG化空白脂质体PL和羧基端空白脂质体PL
‑
COOH，包括：
[0011]按照HSPC/CH比为2
‑
4：1，mPEG
2000
‑
DSPE/DSPE
‑
PEG
2000
‑
COOH比为1：1.5
‑
2.5混合，加入乙醇，在50
‑
75摄氏度下水浴加热，挥干乙醇，加入预热至相同温度的柠檬酸
‑
柠檬酸钠缓冲液，水浴搅拌得空白脂质体初品；
[0012]以超声波细胞粉碎机处理空白脂质体初品，并依次通过0.8μm、0.45μm、0.22μm微孔滤膜进行整粒，分别制得PEG化空白脂质体PL和羧基端空白脂质体PL
‑
COOH。
[0013]进一步，利用盐酸调解羧基端空白脂质体PL
‑
COOH的pH值为7，取梯度的PEG化空白脂质体PL，按照药脂比1:15
‑
25加入盐酸小檗碱BR溶液，得到BR
‑
PL和BR
‑
PL
‑
COOH脂质体，包括：
[0014]将磷酸钠溶液与羧基端空白脂质体PL
‑
COOH混悬液混合，并调节外水相pH为7；
[0015]取梯度空白脂质体PL，按药脂比1：15
‑
25加入盐酸小檗碱BR溶液，在45
‑
60℃恒温孵育至少15min，冰水浴终止载药得BR
‑
PL和BR
‑
PL
‑
COOH脂质体。
[0016]进一步，在BR
‑
PL
‑
COOH脂质体中加入雷公藤甲素TP溶液进行载药时，载药温度为55摄氏度；载药时间为15min，药脂比为l：20。
[0017]进一步，还包括：将TP
‑
BR
‑
PL
‑
COOH过葡聚糖凝胶Sephadex G
‑
100微柱除去未包封的游离药物，在冰水浴条件下，向其中加入EDC水溶液和NHS水溶液，磁力搅拌活化至少0.5h至室温后加入脑靶向配体Lf，加入TEA，反应至少4h后终止反应，得到脑靶向雷公藤甲素和小檗碱共载隐形化纳米脂质体TP
‑
BR
‑
Lf。
[0018]进一步，按照HSPC/CH比为3：1，mPEG
2000
‑
DSPE/DSPE
‑
PEG
2000
‑
COOH比为1：2混合。
[0019]进一步，还包括：梯度空白脂质体PL的制备方法包括：
[0020]以(阴阳离子交换纤维柱除盐建立梯度，得最终磷脂浓度约为20mg/mL的具有(NH4)2SO4跨膜离子梯度的空白脂质体PL混悬液。
[0021]进一步，采用Y迷宫实验测定TP
‑
BR
‑
Lf对AD模型小鼠行为学能力影响的测定：
[0022]侧脑室注射Aβ1‑
42
建立AD小鼠模型；
[0023]将小鼠放入A臂末端，可自由出入A、B、C三个臂，记录小鼠5min内进入三个臂的总次数N及进臂顺序，以连续进入三个不同的臂为一次正确交替反应，记录正确交替反应次数N
s
，其中，迷宫实验装置由三个夹角为120
°
的支臂组成，分别为A、B、C三臂；
[0024]用自发交替反应率alternation behavior％反映小鼠空间工作本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种雷公藤甲素和小檗碱共载隐形化纳米脂质体的制备方法，其特征在于，包括：以柠檬酸为水化介质采用改良乙醇注入法制备PEG化空白脂质体PL和羧基端空白脂质体PL
‑
COOH；利用盐酸调解羧基端空白脂质体PL
‑
COOH的pH值为7，取梯度的PEG化空白脂质体PL，按照药脂比1:15
‑
25加入盐酸小檗碱BR溶液，得到BR
‑
PL和BR
‑
PL
‑
COOH脂质体；在BR
‑
PL和BR
‑
PL
‑
COOH脂质体中加入雷公藤甲素TP溶液，在40
‑
60℃恒温孵育至少60min，冰水浴终止载药，制得雷公藤甲素和小檗碱共载隐形化纳米脂质体TP
‑
BR
‑
PL和TP
‑
BR
‑
PL
‑
COOH。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，以柠檬酸为水化介质采用改良乙醇注入法制备PEG化空白脂质体PL和羧基端空白脂质体PL
‑
COOH，包括：按照HSPC/CH比为2
‑
4：1，mPEG
2000
‑
DSPE/DSPE
‑
PEG
2000
‑
COOH比为1：1.5
‑
2.5混合，加入乙醇，在50
‑
75摄氏度下水浴加热，挥干乙醇，加入预热至相同温度的柠檬酸
‑
柠檬酸钠缓冲液，水浴搅拌得空白脂质体初品；以超声波细胞粉碎机处理空白脂质体初品，并依次通过0.8μm、0.45μm、0.22μm微孔滤膜进行整粒，分别制得PEG化空白脂质体PL和羧基端空白脂质体PL
‑
COOH。3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，利用盐酸调解羧基端空白脂质体PL
‑
COOH的pH值为7，取梯度的PEG化空白脂质体PL，按照药脂比1:15
‑
25加入盐酸小檗碱BR溶液，得到BR
‑
PL和BR
‑
PL
‑
COOH脂质体，包括：将磷酸钠溶液与羧基端空白脂质体PL
‑
COOH混悬液混合，并调节外水相pH为7；取梯度空白脂质体PL，按药脂比1：15
‑
25加入盐酸小檗碱BR溶液，在45
‑
60℃恒温孵育至少15min，冰水浴终止载药得BR
‑
PL和BR
‑
PL
‑
COOH脂质体。4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，在BR
‑
PL
‑
COOH脂质体中加入雷公藤甲素TP溶液进行载药时，载药温度为55摄氏度；载药时...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴正治，王林，李映红，李芷悦，李利民，刘展艳，刘洁人，李子雯，
申请(专利权)人：吴正治，
类型：发明
国别省市：