核酸保护试剂及应用制造技术

本发明专利技术涉及一种核酸保护试剂及应用，具体公开了糖醇和牛血清白蛋白联合使用在制备核酸保护试剂中的应用。本发明专利技术的核酸保护试剂通过糖醇和牛血清白蛋白联合使用的协同作用，降低核酸酶对核酸标准品的降解，对于低拷贝数的核酸标准品，也能起到稳定核酸的作用，对于核酸标准品的保存效果稳定性好，满足核酸标准品的保存需求，并且不会对PCR反应和PCR产物的检测产生影响。测产生影响。测产生影响。

【技术实现步骤摘要】
核酸保护试剂及应用


[0001]本专利技术涉及基因检测
，具体而言，涉及一种核酸保护试剂及应用。

技术介绍

[0002]基因检测前常常需要对试剂盒的灵敏度进行检测，为保证检测灵敏度的准确性，通常要将核酸标准品从较高拷贝数(10
13
copies/mL)稀释至不同拷贝数梯度的核酸标准品，操作过程繁琐，检测前准备时间长。
[0003]其中，低拷贝数核酸是重要的临床无创分子标志物，随着基因诊断技术的发展，低拷贝数核酸具有极大的临床应用价值，在疾病早期诊断、分期、治疗监测、预后判断以及产前基因诊断和病原体感染基因检测等方面具有重要意义。
[0004]目前，在核酸的使用过程中，并没有有效的核酸保护剂能保存核酸标准品，尤其是低拷贝数的核酸标准品。

技术实现思路

[0005]为了解决上述问题，本专利技术的第一目的在于提供糖醇和牛血清白蛋白联合使用在制备核酸保护试剂中的应用，能够用于保存核酸标准品，解决低拷贝数核酸标准品易降解的问题。
[0006]本专利技术的一种实现方式中，糖醇在核酸保护试剂中的质量体积分数为1～3％，牛血清白蛋白在核酸保护试剂中的质量体积分数为0.05～1％。
[0007]本专利技术的一种实现方式中，糖醇包括甘露醇和木糖醇中的至少一种。
[0008]本专利技术的第二目的在于提供一种核酸保护试剂，核酸保护试剂包括糖醇和牛血清白蛋白。
[0009]本专利技术的一种实现方式中，核酸保护试剂包括质量体积分数为1～3％的糖醇以及0.05～1％的牛血清白蛋白。
[0010]本专利技术的一种实现方式中，核酸保护试剂还包括海藻糖、甘氨酸、Tris
‑
HCl缓冲液、EDTA和氯化钠中的至少一种。
[0011]本专利技术的一种实现方式中，海藻糖的质量体积百分数为1～5％；
[0012]甘氨酸的质量体积百分数为1～5％；
[0013]Tris
‑
HCl缓冲液的摩尔浓度为10～25mmol/L；
[0014]EDTA螯合剂的摩尔浓度为1～2.5mmol/L；
[0015]氯化钠的摩尔浓度为10～100mmol/L。
[0016]本专利技术的一种实现方式中，核酸保护试剂的pH值为7.8～8.0。
[0017]本专利技术的第三目的在于提供上述核酸保护试剂在制备用于核酸检测的试剂盒中的应用。
[0018]本专利技术地第四目的在于提供一种用于核酸检测的试剂盒，包括核酸标准品，核酸标准品保存于上述核酸保护试剂中。
[0019]本专利技术地第五目的在于提供一种核酸保护试剂的使用方法，其特征在于，将核酸保护试剂和核酸标准品混合保存。
[0020]本专利技术的一种实现方式中，核酸保护试剂和核酸标准品混合保存的温度为
‑
80～37℃。
[0021]本专利技术的一种实现方式中，所述核酸标准品包括质粒标准品和基因组DNA标准品中的至少一种。
[0022]本专利技术的一种实现方式中，质粒标准品的拷贝数为不超过109copies/mL；
[0023]所述基因组DNA标准品浓度不超过10
‑3ng/μL；或者
[0024]所述核酸标准品中核酸的拷贝数为不超过106copies/mL；
[0025]基因组DNA浓度不超过10
‑4ng/μL。
[0026]本专利技术公开的糖醇和牛血清白蛋白联合使用在制备核酸保护试剂的应用，通过糖醇和牛血清白蛋白联合使用的协同作用，降低核酸酶对核酸标准品的降解，对于低拷贝数的核酸标准品，也能起到稳定核酸的作用，对于核酸标准品的保存效果稳定性好，满足核酸标准品的保存需求。
附图说明
[0027]图1为本专利技术实施例2提供的核酸保护试剂保存核酸50天后的PCR实验结果图；
[0028]图2为本专利技术实施例2提供的核酸保护试剂保存核酸47天的qPCR验证实验结果图；
[0029]图3为本专利技术实施例3提供的核酸保护试剂保存105copies/mL的核酸的qPCR实验结果图；
[0030]图4为本专利技术实施例3提供的核酸保护试剂保存104copies/mL的核酸的qPCR实验结果图；
[0031]图5为实施例4提供的核酸保护试剂在不同保存温度下保存HMPV模板的qPCR实验结果图。
[0032]图6为实施例4提供的核酸保护试剂不同保存温度下保存MEV模板的qPCR实验结果图；
[0033]图7为实施例4提供的核酸保护试剂在不同保存时间下保存MEV模板的qPCR实验结果图；
[0034]图8为实施例4提供的核酸保护试剂保存不同类型的模板的qPCR实验结果图；
[0035]图9为实施例4提供的核酸保护试剂在37℃加速条件下保存MeV、229E模板的qPCR实验结果图；
[0036]图10为实施例4提供的核酸保护试剂保存大肠杆菌gDNA和质粒DNA反复冻融后的qPCR实验结果图。
具体实施方式
[0037]现将详细地提供本专利技术实施方式的参考，其一个或多个实例描述于下文。提供每一实例作为解释而非限制本专利技术。实际上，对本领域技术人员而言，显而易见的是，可以对本专利技术进行多种修改和变化而不背离本专利技术的范围或精神。例如，作为一个实施方式的部分而说明或描述的特征可以用于另一实施方式中，来产生更进一步的实施方式。
[0038]因此，旨在本专利技术覆盖落入所附权利要求的范围及其等同范围中的此类修改和变化。本专利技术的其它对象、特征和方面公开于以下详细描述中或从中是显而易见的。本领域普通技术人员应理解本讨论仅是示例性实施方式的描述，而非意在限制本专利技术更广阔的方面。
[0039]目前，在核酸的保存过程中，低拷贝数的核酸极易发生降解，而大部分保护试剂一般用于保护核酸样本，如血浆样本等，其保护的对象是生物样本中的核酸，其中的一些核酸保护试剂含有核酸裂解物质如EDTA、胍盐、柠檬酸钠等会对PCR反应造成抑制作用，无法直接用于PCR检测，必须经过核酸提取步骤才能进行PCR检测。
[0040]对于核酸标准品，由于其对核酸浓度要求很精确，且保存时间和稳定性要求也较高，现有核酸保护试剂无法也满足其保存要求，例如既能起到保护核酸的作用，又不影响PCR反应和检测，因而没有有效的核酸保护剂能保存核酸标准品，尤其是保护低拷贝数核酸标准品，低拷贝数核酸易降解，进而也限制了低拷贝数核酸在基因检测试剂盒中的应用。
[0041]为了至少部分解决上述技术问题的至少一个，本专利技术的第一方面提供了糖醇和牛血清白蛋白联合使用在制备核酸保护试剂中的应用，以用于保存核酸标准品，并解决核酸标准品无法保存的问题，尤其是低拷贝数或者低浓度的核酸标准品易降解而无法保存的问题。
[0042]本专利技术公开的糖醇和牛血清白蛋白联合使用在制备核酸保护试剂的应用，通过糖醇和牛血清白蛋白联合使用的协同作用，降低核酸酶对核酸标准品的降解，对于低拷贝数的核酸标准品，也能起到稳定核酸的作用，对于核酸标准品的保存效果稳定本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.糖醇和牛血清白蛋白联合使用在制备核酸保护试剂中的应用。2.一种核酸保护试剂，其特征在于，所述核酸保护试剂包括糖醇和牛血清白蛋白。3.根据权利要求1所述的应用，或者权利要求2所述的核酸保护试剂，其特征在于，所述糖醇在所述核酸保护试剂中的质量体积分数为1～3％，所述牛血清白蛋白在所述核酸保护试剂中的质量体积分数为0.05～1％；和/或所述糖醇包括甘露醇和木糖醇中的至少一种。4.根据权利要求2所述的核酸保护试剂，其特征在于，所述核酸保护试剂还包括海藻糖、甘氨酸、Tris
‑
HCl缓冲液、EDTA螯合剂和氯化钠中的至少一种；和/或所述核酸保护试剂的pH值为7.8～8.0。5.根据权利要求4所述的核酸保护试剂，其特征在于，所述海藻糖的质量体积百分数为1～5％；所述甘氨酸的质量体积百分数为1％～5％；所述Tris
‑
HCl缓冲液的摩尔浓度为10～25mmol/L；...

【专利技术属性】
技术研发人员：杜军，姚家成，曹文刚，肖晓文，
申请(专利权)人：湖北擎科生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：