一种新型冠状病毒（2019-nCOV）IgG/IgM抗体检测试剂盒及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种新型冠状病毒(2019

【技术实现步骤摘要】
一种新型冠状病毒(2019
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nCOV)IgG/IgM抗体检测试剂盒及其制备方法


[0001]本专利技术涉及医学检验领域，具体涉及一种新型冠状病毒(2019
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nCOV)IgG/IgM抗体检测试剂盒及其制备方法。

技术介绍

[0002]胶体金免疫层析技术(Gold immunichromatogra
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phy assay,GICA)是一种将胶体金标记技术、免疫检测技术和层析和层析分析技术等多种方法有机结合在一起的固相标记免疫检测技术。它的原理是：以条状纤维层析材料为固相，通过毛细作用使样品中的待测物与层析材料上针对待测物的受体(抗原或抗体)发生高特异性、高亲和性的免疫反应，层析过程中免疫复合物被富集或截留在层析材料的一定区域(检测带)，运用可目测的标记物(胶体金)而得到直管的实验现象(显色)。而有力标记物则越过检测带，与结合标记物自动分离。这种分析技术具有操作简单快速，可单份测定，无须特殊仪器等优点，适合于各级医疗单位使用，亦可用于家庭成员的诊断、保健、体检等方面。
[0003]胶体金可以和蛋白质等各种生物大分子结合，胶体金颗粒带有一层表面阴性电荷，与蛋白质表面的阳性电荷通过静电感应吸附，因此，环境pH和离子强度是影响吸附的主要因素，其他如胶体金颗粒的大小、蛋白质分子量及蛋白质浓度等也会影响蛋白质吸附。虽然对于大部分蛋白质来说，能够较容易和胶体金结合吸附，但仍然存在部分蛋白质在加入胶体金溶液后出现死金的现象(例如新冠病毒N蛋白)。通常这种情况，会先调整胶体金pH，如果不能改善，则对蛋白质进行简单处理，如稀释、透析等。但对于一些蛋白质，尤其价格昂贵的原料，蛋白质的处理往往会带来较大的损失，或者蛋白质的量很少，不足以进行一次处理。这个时候需要一种有效的解决办法。

技术实现思路

[0004]本专利技术通过在胶体金与标记蛋白的标记过程中加入适量酪蛋白酸钠，可以有效解决因电荷作用造成的聚沉死金等异常现象，同时通过调节pH值保证了蛋白具有较高的标记效率，显著提升了试纸条的检测性能(包括稳定性、灵敏度以及特异性)。
[0005]为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术手段：一种新型冠状病毒(2019
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nCOV)IgG/IgM抗体检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括试纸条以及稀释液，所述试纸条包括：样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫以及底衬，所述样品垫、结合垫1、结合垫2、硝酸纤维素膜以及吸水垫依次搭接粘贴在所述底衬上；所述标记垫1上包被有RBD蛋白
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示踪粒子复合物，所述标记垫2上包被有N蛋白
‑
示踪粒子复合物；所述硝酸纤维素膜上设置有检测线T2、检测线T1以及质控线C。
[0006]优选地，所述示踪粒子为胶体金。
[0007]优选地，所述N蛋白
‑
胶体金的标记过程包括：将N蛋白与酪蛋白钠混匀后再加入胶体金溶液中，所述N蛋白与酪蛋白钠的质量比为1.25
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5。
[0008]优选地，所述胶体金溶液的pH为7.0
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9.0，优选为8.0。
[0009]优选地，所述检测线T2上包被鼠抗人IgM单克隆抗体，所述检测线T1上包被鼠抗人IgG单克隆抗体，所述质控线上包被羊抗鸡IgY抗体。
[0010]优选地，所述稀释液包括0.2
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2.0g/L的缓冲液、0.2
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10g/L盐离子、1
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2g/L的防腐剂；所述缓冲液选自十二水磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、MOPS、Tris缓冲液中的至少一种，优选为十二水磷酸氢二钠以及磷酸二氢钾的组合；所述盐离子选自氯化钠或氯化钾中的至少一种，优选为氯化钠以及氯化钾的组合；所述防腐剂选自叠氮钠或Proclin
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300中的至少一种，优选为Proclin
‑
300。
[0011]一种新型冠状病毒(2019
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nCOV)IgG/IgM抗体检测试剂盒的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
[0012](1)结合垫1的处理
[0013]将RBD蛋白加入胶体金溶液1中，标记10
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30min后，加入2
‑
10％封闭剂，搅拌10
‑
30min后，10000rpm，离心20分钟，弃上清，沉淀以胶体金标记复溶液恢复体积，得到RBD蛋白金标复合物，4℃保存；
[0014]将上述RBD蛋白金标复合物以OD20
‑
OD50的浓度包被于结合垫1上，随后冷冻干燥处理，即得结合垫1；
[0015](2)结合垫2的处理
[0016]将N蛋白与酪蛋白钠混匀后，加入胶体金溶液2中，标记10
‑
30min后，加入2
‑
10％封闭剂，搅拌10
‑
30min后，10000rpm，离心20分钟，弃上清，沉淀以胶体金标记复溶液恢复体积，得到N蛋白金标复合物，4℃保存；
[0017]将上述N蛋白金标复合物以OD10
‑
OD40的浓度包被与结合垫2上，随后冷冻干燥处理，即得结合垫2；
[0018](3)硝酸纤维素膜的处理：
[0019]在硝酸纤维素膜上包被检测线T2、检测线T1以及质控线C后进行干燥处理：
[0020]a.检测线T2的制备
[0021]将鼠抗人IgM单克隆抗体以1.0
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3.0ul/cm喷涂于硝酸纤维素膜上靠近样本垫端；
[0022]b.T1检测线的制备：
[0023]将的鼠抗人IgG单克隆抗体以1.0
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3.0ul/cm包被于T2检测线侧方，且远离样品垫端；；
[0024]d.C质控线的制备：
[0025]将的羊抗鸡IgY抗体溶液以1.0
‑
3.0ul/cm包被于T1检测线侧方，且远离样品垫端；
[0026](4)组装：
[0027]在底衬上依次粘贴样品垫、硝酸纤维素膜以及吸水垫，切成3
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5mm宽的试纸条。
[0028]优选地，在步骤(1)中，所述N蛋白与酪蛋白钠的质量比为1.25
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5；在步骤(1)以及步骤(2)中，所述胶体金溶液1的pH值为6.0
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8.0，优选为7.0；所述胶体金溶液2的pH值为7.0
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9.0，优选为8.0。
[0029]优选地，所述胶体金标记复溶液的组分包括：20
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50mmol/缓冲液、1
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10g/蛋白、10
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20g/L表面活性剂、20
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60g/L保护剂、大分子物质0.1
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0.5g/L、1
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2.0g/L防腐剂；所述缓冲液选自甘氨酸、Tris缓冲液、MOPS缓冲液中的至少一种；所述蛋白选自酪本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种新型冠状病毒(2019
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nCOV)IgG/IgM抗体检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括试纸条以及稀释液，所述试纸条包括：样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫以及底衬，所述样品垫、结合垫1、结合垫2、硝酸纤维素膜以及吸水垫依次搭接粘贴在所述底衬上；所述标记垫1上包被有RBD蛋白
‑
示踪粒子复合物，所述标记垫2上包被有N蛋白
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示踪粒子复合物；所述硝酸纤维素膜上设置有检测线T2、检测线T1以及质控线C。2.根据权利要求1所述的一种新型冠状病毒(2019
‑
nCOV)IgG/IgM抗体检测试剂盒，其特征在于，所述示踪粒子为胶体金。3.根据权利要求2所述的一种新型冠状病毒(2019
‑
nCOV)IgG/IgM抗体检测试剂盒，其特征在于，所述N蛋白
‑
胶体金的标记过程包括：将N蛋白与酪蛋白钠混匀后再加入胶体金溶液中，所述N蛋白与酪蛋白钠的质量比为1.25
‑
5。4.根据权利要求3所述的一种新型冠状病毒(2019
‑
nCOV)IgG/IgM抗体检测试剂盒，其特征在于，所述胶体金溶液的pH为7.0
‑
9.0，优选为8.0。5.根据权利要求4所述的一种新型冠状病毒(2019
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nCOV)IgG/IgM抗体检测试剂盒，其特征在于，所述检测线T2上包被鼠抗人IgM单克隆抗体，所述检测线T1上包被鼠抗人IgG单克隆抗体，所述质控线上包被羊抗鸡IgY抗体。6.根据权利要求5所述的一种新型冠状病毒(2019
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nCOV)IgG/IgM抗体检测试剂盒，其特征在于，所述稀释液包括0.2
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2.0g/L的缓冲液、0.2
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10g/L盐离子、1
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2g/L的防腐剂；所述缓冲液选自十二水磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、MOPS、Tris缓冲液中的至少一种，优选为十二水磷酸氢二钠以及磷酸二氢钾的组合；所述盐离子选自氯化钠或氯化钾中的至少一种，优选为氯化钠以及氯化钾的组合；所述防腐剂选自叠氮钠或Proclin
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300中的至少一种，优选为Proclin
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300。7.根据权利要求1
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5任一项所述的一种新型冠状病毒(2019
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nCOV)IgG/IgM抗体检测试剂盒的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)结合垫1的处理将RBD蛋白加入胶体金溶液1中，标记10
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30min后，加入2
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10％封闭剂，搅拌10
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30min后，10000rpm，离心20分钟，弃上清，沉淀以胶体金标记复溶液恢复体积，得到RBD蛋白金标复合物，4℃保存；将上述RBD蛋白金标复合物以OD20
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OD50的浓度包被...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘巧娜，刁维均，
申请(专利权)人：中元汇吉生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：