一种联合检测多种呼吸道病毒的PCR引物组及试剂盒制造技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，特别是涉及一种联合检测多种呼吸道病毒的PCR引物组及试剂盒，所述PCR引物组包括甲型流感病毒检测引物对、甲型流感病毒H1N1检测引物对、甲型流感病毒H3N2检测引物对、乙型流感病毒检测引物对、人呼吸道合胞病毒检测引物对、人偏肺病毒检测引物对、鼻病毒/肠道病毒检测引物对。所述试剂盒中包括多重RT

【技术实现步骤摘要】
一种联合检测多种呼吸道病毒的PCR引物组及试剂盒


[0001]本专利技术涉及生物
，特别是涉及一种联合检测多种呼吸道病毒的PCR引物组及试剂盒。

技术介绍

[0002]呼吸道感染的发病率、死亡率、住院率和医疗负担均较高，呼吸道病毒如流感病毒和人呼吸道合胞病毒主要原因，特别是在幼儿、孕妇、老年人和其他合并症患者中。流感病毒和人呼吸道合胞病毒也是获得性肺炎的主要病原体。除流感病毒和人呼吸道合胞病毒外，临床常见的可导致呼吸道感染的病毒还包括人偏肺病毒、鼻病毒、副流感病毒、冠状病毒、腺病毒、博卡病毒等。
[0003]目前常用的呼吸道病毒检测方法主要包括以下：病毒分离培养、病毒抗原检测、病毒抗体检测、病毒直接检测、病毒核酸检测方法等。呼吸道病毒分离培养目前仍然是病毒诊断的金标准。然而该方法存在以下缺点：(1)操作复杂繁琐，不易标准化；(2)培养周期长；(3)检测环节较多；(4)人员技术要求较高。病毒抗原检测特异度较好，阳性提示活动性病毒感染，但灵敏度较低，常有假阴性。病毒抗体检测是利用抗原与抗体的特异性反应原理进行检测，该方法灵敏性低，仅反映人体免疫反应情况，而不能反映患者真实感染情况，仅可以用于回顾性调查，但对早期诊断意义不大。病毒直接检测通过电子显微镜直接观察呼吸道标本中病毒的典型特征形态，但要求标本有大量的病毒且要求有经验的技术人员和昂贵的电子显微镜设备，操作复杂，技术要求高。病毒核酸检测方法迅猛发展，由于其快速、简便、高通量、高敏感度及高特异度的优势，成为诊断呼吸道病毒感染的主要方法。常用的检测方法是实时荧光定量PCR法。尽管其具有高特异性、敏感性和时效性，但也存在如下缺点：(1)通量低：受限于荧光通道，单管仅能检测3种病毒；(2)成本高：多种病毒同时检测，成本较高。因此，亟需开发操作简单、准确度高、通量高、检测成本低，且可以针对同一份标本检测多种呼吸道病毒的检测技术，实现快速准确检测呼吸道病毒，可以大大提高检测效率、缩短检测周期、降低检测成本，具有显著的卫生经济学与社会经济学效益，适用于临床检测、卫生防疫及流行病学调查等。

技术实现思路

[0004]鉴于以上所述现有技术的缺点，本专利技术的目的在于提供一种联合检测多种呼吸道病毒的PCR引物组及试剂盒，用于解决现有技术中的问题。
[0005]为实现上述目的及其他相关目的，本专利技术提供一种联合检测多种呼吸道病毒的PCR引物组，所述PCR引物组包括甲型流感病毒检测引物对、甲型流感病毒H1N1检测引物对、甲型流感病毒H3N2检测引物对、乙型流感病毒检测引物对、人呼吸道合胞病毒检测引物对、人偏肺病毒检测引物对、鼻病毒/肠道病毒检测引物对。
[0006]本专利技术还提供所述PCR引物组在制备检测甲型流感病毒、甲型流感病毒H1N1、甲型流感病毒H3N2、乙型流感病毒、人呼吸道合胞病毒、人偏肺病毒和鼻病毒/肠道病毒的试剂
盒中的用途。
[0007]本专利技术还提供一种联合检测甲型流感病毒、甲型流感病毒H1N1、甲型流感病毒H3N2、乙型流感病毒、人呼吸道合胞病毒、人偏肺病毒和鼻病毒/肠道病毒的试剂盒，所述试剂盒中包括多重RT
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PCR反应物，所述多重RT
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PCR反应物中包括所述PCR引物组。
[0008]本专利技术还提供所述试剂盒在制备呼吸道病毒检测产品中的用途。
[0009]如上所述，本专利技术的联合检测多种呼吸道病毒的PCR引物组及试剂盒，具有以下有益效果：采用本专利技术的技术方案，可以联合检测并鉴定七种呼吸道病毒，该方法操作简单、检测准确、灵敏高，特异性高，显著缩短检测时间，可以实现2
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3小时内可出检测结果。外源RNA内参可以确保从核酸提取、逆转录和PCR扩增的检测过程中对核酸质量进行质控，避免因核酸提取质量、反转录以及PCR扩增的问题导致假阴性的问题。多重PCR与毛细管片段分析法相结合，可以实现单管检测多重呼吸道病毒，保证检测的通量且成本较低，适合疾控中心、医院及其它医疗机构使用。
附图说明
[0010]图1为本专利技术实施例2中的人呼吸道合胞病毒的毛细管电泳分离结果图。
[0011]图2为本专利技术实施例2中的甲型流感病毒H1N1(2009)的毛细管电泳分离结果图。
[0012]图3为本专利技术实施例2中的阳性质控品的毛细管电泳分离结果图。
[0013]图4为本专利技术实施例2中的阴性质控品的毛细管电泳分离结果图。
[0014]图5为本专利技术实施例3特异性分析结果。
[0015]图6为本专利技术对比例2中引物对1的扩增效果。
[0016]图7为本专利技术对比例2中引物对2的扩增效果。
[0017]图8为本专利技术对比例2中引物对3的扩增效果。
具体实施方式
[0018]本专利技术提供一种联合检测多种呼吸道病毒的PCR引物组，所述PCR引物组包括甲型流感病毒检测引物对、甲型流感病毒H1N1检测引物对、甲型流感病毒H3N2检测引物对、乙型流感病毒检测引物对、人呼吸道合胞病毒检测引物对、人偏肺病毒检测引物对、鼻病毒/肠道病毒检测引物对。
[0019]所述引物组还包括以下特征：
[0020]1)甲型流感病毒检测引物对：包括核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的上游引物和核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示的下游引物；
[0021]2)甲型流感病毒H1N1检测引物对：包括核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示的上游引物和核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示的下游引物；
[0022]3)甲型流感病毒H3N2检测引物对：包括核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示的上游引物和核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示的下游引物；
[0023]4)乙型流感病毒检测引物对：包括核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示的上游引物和核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示的下游引物；
[0024]5)人呼吸道合胞病毒检测引物对：包括核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示的上游引物和核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示的下游引物；
[0025]6)人偏肺病毒检测引物对：包括核苷酸序列如SEQ ID NO.11所示的上游引物和核苷酸序列如SEQ ID NO.12所示的下游引物；
[0026]7)鼻病毒/肠道病毒检测引物对：包括核苷酸序列如SEQ ID NO.13所示的上游引物和核苷酸序列如SEQ ID NO.14所示的下游引物。
[0027]所述甲型流感病毒包括甲型流感病毒H1N1、H1N2、H2N3、H3N2、H5N2、H9N2和H16N3。甲型流感病毒引物对以M基因相对保守序列为靶标设计，甲型流感病毒H1N1、H1N2、H2N3、H3N2、H5N2、H9N2和H16N3具有该共同序列。引物对以此序列为靶标设计，因此该引物对可以检测以上型别。
[0028]所述甲型流感病毒H1N1是指甲型流感病毒H1N1(2009)。
[0029]所述甲型流感病毒检测引物对和甲型流感病毒H1N1检测引物本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种联合检测多种呼吸道病毒的PCR引物组，其特征在于，所述PCR引物组包括甲型流感病毒检测引物对、甲型流感病毒H1N1检测引物对、甲型流感病毒H3N2检测引物对、乙型流感病毒检测引物对、人呼吸道合胞病毒检测引物对、人偏肺病毒检测引物对、鼻病毒和肠道病毒检测引物对。2.根据权利要求1所述的PCR引物组，其特征在于，所述引物组还包括以下特征：1)甲型流感病毒检测引物对：包括核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的上游引物和核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示的下游引物；2)甲型流感病毒H1N1检测引物对：包括核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示的上游引物和核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示的下游引物；3)甲型流感病毒H3N2检测引物对：包括核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示的上游引物和核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示的下游引物；4)乙型流感病毒检测引物对：包括核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示的上游引物和核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示的下游引物；5)人呼吸道合胞病毒检测引物对：包括核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示的上游引物和核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示的下游引物；6)人偏肺病毒检测引物对：包括核苷酸序列如SEQ ID NO.11所示的上游引物和核苷酸序列如SEQ ID NO.12所示的下游引物；7)鼻病毒和肠道病毒检测引物对：包括核苷酸序列如SEQ ID NO.13所示的上游引物和核苷酸序列如SEQ ID NO.14所示的下游引物。3.权利要求1或2所述的PCR引物组在制备检测甲型流感病毒、甲型流感病毒H1N1、甲型流感病毒H3N2、乙型流感病...

【专利技术属性】
技术研发人员：张祥林，张劲松，侯艳雯，魏鹏，胡秋萍，
申请(专利权)人：重庆巴斯德生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：