萘-茚二酮给受体类化合物及其制备方法与其在脂滴免洗荧光探针中的应用技术

本发明专利技术属于生物医药技术领域，涉及萘

【技术实现步骤摘要】
萘
‑
茚二酮给受体类化合物及其制备方法与其在脂滴免洗荧光探针中的应用


[0001]本专利技术属于生物医药
，涉及萘
‑
茚二酮给受体类化合物及其制备方法与其在脂滴免洗荧光探针中的应用。

技术介绍

[0002]公开该
技术介绍
部分的信息仅仅旨在增加对本专利技术的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
[0003]据专利技术人研究了解，目前，油红O染色是一种广泛使用的脂肪肝病诊断方法，通过对脂滴进行组织学染色。但是，这种方法存在化学结构不稳定、选择性和灵敏度低、步骤复杂耗时等缺点。荧光探针可以用于脂滴成像和动态跟踪，然而，专利技术人研究发现，目前大多数脂滴探针不适用于脂肪肝疾病诊断，其原因可能在于对组织的渗透性有限，以及体外和体外样品之间的染色差异。同时，目前的诊断型探针的一些关键成像参数，比如光稳定性和成像对比度等方面，仍有待进一步改进和完善。

技术实现思路

[0004]为了解决现有技术的不足，本专利技术的目的是提供萘
‑
茚二酮给受体类化合物及其制备方法与其在脂滴荧光探针中的应用，研究表明，该类化合物作为脂滴特异性免洗荧光探针，对生物样品具有高透过性、高成像对比度及更高的光稳定性。
[0005]为了实现上述目的，本专利技术的技术方案为：
[0006]一方面，一种萘
‑
茚二酮给受体类化合物，其化学结构如式I所示：
[0007][0008]其中，R1、R2分别独立为氢、低级烃基、醚基、取代烷基或酰基；R3、R4、R5、R6分别独立为氢、甲基、氟、氯、溴、碘、氰基、三卤甲基、硝基、苯基或吡啶基。
[0009]另一方面，一种上述萘
‑
茚二酮给受体类化合物的制备方法，包括按照如下反应路线获得式I所示化合物；
[0010][0011]其中，R1、R2、R3、R4、R5、R6分别如上所述。
[0012]第三方面，一种组合物，其含有上述的萘
‑
茚二酮给受体类化合物或其药学上可接受的盐。
[0013]第四方面，一种制剂，包括上述萘
‑
茚二酮给受体类化合物或其药学上可接受的盐或组合物和药学上可接受的载体。
[0014]第五方面，一种上述萘
‑
茚二酮给受体类化合物、组合物和/或制剂在脂滴免洗荧光探针中的应用。
[0015]本专利技术提供的萘
‑
茚二酮给受体类化合物具有扭曲分子内电荷转移(TICT)效应，利用该效应能够构建溶致变色的脂滴荧光探针，从而能够用于脂肪细胞中脂滴的免洗染色，由于TICT效应，该探针在极性溶剂中具有可忽略的荧光，而在非极性溶剂中荧光剧烈增强，该探针同时具有优异的光稳定性和生物兼容性。
[0016]从临床表现来看，脂肪肝病变的突出病理特征是肝细胞内脂滴中脂肪过度堆积，故过度表达和膨胀的脂滴可能成为诊断脂肪肝的潜在靶点。由于本专利技术提供的萘
‑
茚二酮给受体类化合物可以用于脂滴荧光探针，因而第六方面，一种上述萘
‑
茚二酮给受体类化合物、组合物和/或制剂在诊断脂肪肝或制备诊断脂肪肝试剂中的应用。
[0017]当以本专利技术提供的萘
‑
茚二酮给受体类化合物作为脂滴荧光探针时，该荧光探针以萘为给体，1,3
‑
茚二酮为受体基团，由于1,3
‑
茚二酮具有很强的吸电子性能，荧光探针对不同极性的溶剂表现出明显的溶致变色效应。由于TICT效应，荧光探针在极性溶剂中发射的微弱发光可以忽略不计。而在低极性环境(如脂滴)中，TICT效应受到抑制，荧光明显增强。正常肝组织和脂肪肝组织中的极性差异使得本专利技术所述的新型溶致变色荧光探针ANI能够在小鼠模型中诊断脂肪肝。
[0018]实验结果证实，本专利技术提供的萘
‑
茚二酮给受体类化合物作为脂滴荧光探针，可实现脂肪肝模型小鼠肝组织中脂滴过度积累的高信噪比区分。
[0019]本专利技术提供的萘
‑
茚二酮给受体类化合物作为脂滴荧光探针在细胞上的选择性经过了严格的证明。在本专利技术所述的脂滴荧光探针在细胞染色的基础上，通过与商业化的脂滴探针(BODIPY 493/503)进行复染实验，证实其具有较高的共定位系数(可达0.88)，进而确认本专利技术提供的脂滴荧光探针特异性染色脂滴。
[0020]本专利技术利用TICT效应构建免洗溶致变色荧光脂滴探针在高极性溶剂中表现出非
常微弱的荧光，在低极性溶剂中荧光显著增强，可高选择性定位细胞中的脂滴。
[0021]其中：活细胞为3T3
‑
L1前脂肪细胞；所述脂滴荧光探针的激发光是488nm时，脂滴荧光探针在绿色通道中几乎没有荧光，所述脂滴荧光探针的激发光是561nm时，脂滴荧光探针在红色通道(570
‑
670nm)中显示出很强的发射。
[0022]第七方面，一种上述萘
‑
茚二酮给受体类化合物、组合物和/或制剂在鉴别脂肪肝病组织与正常组织中的应用或制备鉴别脂肪肝病组织与正常组织的试剂中的应用。
[0023]采用3T3
‑
L1前脂肪细胞作为活细胞进行检测实验时，与对照组相比，脂肪肝病模型组小鼠肝组织中脂滴大量积聚，大小明显增大，萘
‑
茚二酮给受体类化合物作为脂滴荧光探针的亮红色荧光清晰可见。
[0024]实验证实：本专利技术提供的萘
‑
茚二酮给受体类化合物作为脂滴荧光探针可以区分脂肪肝病组织和正常肝组织。在正常肝组织中，经ANI染色可见弱的背景荧光；在脂肪肝病组织中，经ANI染色脂滴明显增多且增大，荧光显著增强。这证实了该探针可以区分脂肪肝病组织和正常肝组织。
[0025]第八方面，一种脂肪肝检测试剂盒，包括脂滴荧光探针和溶剂，所述脂滴荧光探针为上述萘
‑
茚二酮给受体类化合物、组合物和/或制剂。
[0026]本专利技术的有益结果是：相比于商用探针尼罗红和BODIPY，本专利技术提供的的萘
‑
茚二酮给受体类化合物作为溶致变色脂滴荧光探针具有高透过性和高成像对比度。该探针的毒性低，生物相容性好，且具有良好的光稳定性。孵育时间较短，免洗染色，高对比度脂滴成像。此外，可以通过脂滴的大小和数量来区分脂肪肝病变组织和正常肝组织，使得该探针在手术中对脂肪肝疾病的精确诊断和评估具有重要的应用价值。
附图说明
[0027]构成本专利技术的一部分的说明书附图用来提供对本专利技术的进一步理解，本专利技术的示意性实施例及其说明用于解释本专利技术，并不构成对本专利技术的不当限定。
[0028]图1为本专利技术实施例1制备ANI的合成路线及结构表征图；(A)ANI的合成路线；(B)ANI的单晶X射线结构；(C)在B3LYP/6
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31G(d，p)水平上计算的ANI分子HOMO和LUMO的空间电子云分布。本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种萘
‑
茚二酮给受体类化合物，其特征是，化学结构如式I所示：其中，R1、R2分别独立为氢、低级烃基、醚基、取代烷基或酰基；R3、R4、R5、R6分别独立为氢、甲基、氟、氯、溴、碘、氰基、三卤甲基、硝基、苯基或吡啶基。2.如权利要求1所述的萘
‑
茚二酮给受体类化合物，其特征是，所述低级烃基为1
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10个碳原子的直链、支链或环状的烃基基团；或，所述取代烷基为为ω
‑
甲酸酯基取代1
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6个碳原子烷基、ω
‑
甲酰胺基取代1
‑
6个碳原子烷基、ω
‑
卤素取代1
‑
6个碳原子烷基、ω
‑
羟基取代1
‑
6个碳原子烷基、ω
‑
氨基取代1
‑
6个碳原子烷基或ω
‑
巯基取代1
‑
6个碳原子烷基；其中，所述ω
‑
甲酸酯基取代1
‑
6个碳原子烷基中甲酸酯基为2
‑
5个碳原子烷基甲酸酯基；所述ω
‑
甲酰胺基取代1
‑
6个碳原子烷基中甲酰胺基为2
‑
5个碳原子烃基甲酰胺基；或，所述酰基为2
‑
6个碳原子烷基酰基、叔丁氧羰基、苯甲酰基、1
‑
6个碳原子取代苯甲酰基或卤素取代苯甲酰基；...

【专利技术属性】
技术研发人员：牛广乐，冯璐，朱婷，赵梦莹，
申请(专利权)人：山东大学，
类型：发明
国别省市：