一种粪便乳铁蛋白检测试剂盒及其制备方法技术

本发明专利技术提供一种粪便乳铁蛋白检测试剂盒及其制备方法，包括PVC底板，PVC底板上由左到右依次搭接设置有样品垫、胶体金金标垫、硝酸纤维素膜和吸水纸；硝酸纤维素膜内含有从左到右依次分布设置的检测线T、对照线R和质控线C，对应的检测线T、对照线R和质控线C处分别在硝酸纤维素膜上形成检测区T、对照区T和质控区C；样品垫右侧端部搭接于胶体金金标垫的左侧端部上侧，胶体金金标垫右侧端部搭接于硝酸纤维素膜的左侧端部上侧，吸水纸左侧端部搭接于硝酸纤维素膜的右侧端部上侧；整体操作简单、性能可靠，实现快速准确的定性检测粪便乳铁蛋白，直观地判断待测样品中是否含有乳铁蛋白，成本低廉、适于临床快速检测。适于临床快速检测。适于临床快速检测。

【技术实现步骤摘要】
一种粪便乳铁蛋白检测试剂盒及其制备方法


[0001]本专利技术涉及医疗检测技术，尤其是一种粪便乳铁蛋白检测试剂盒及其制备方法。

技术介绍

[0002]腹泻在临床上是一种很常见的症状，然而腹泻的诊断和治疗却存在很多困难与问题。腹泻的病因多种多样，如果可以通过一种简单的检测手段就能判断腹泻是否为炎症性质，那么许多侵入性的诊断方法就没有必要了。
[0003]粪便中的白细胞代表肠道内存在炎症，故对粪便中白细胞的检测尤为重要，但是检测方法要求严格，且在临床上不易操作。乳铁蛋白(1actoferrin， LF)是近年发现的、与铁结合的糖蛋白，由大多数粘膜分泌，是多形核中性粒细胞继发性颗粒的主要成分，主要分布表达于中性粒细胞、上皮细胞、还有组织体液中，具有促进铁吸收、抗菌、免疫调节、抗感染、抗氧化、抗病毒等多种功能。现有的研究表明，乳铁蛋白参与炎性反应及肿瘤免疫，具有广泛的生物学活性，肠道炎症期间，白细胞浸润粘膜，导致粪便中乳铁蛋白浓度增加。乳铁蛋白有很强的稳定性，粪便可放置很长时间，并且乳铁蛋白可以用简单而便宜的方法检测出来，在临床上的实用性很强。
[0004]由于乳铁蛋白在粪便中极其稳定，因而远优于以往的粪便标志物，特别是与肿瘤的粪便DNA检测相比，标本无需冷冻保存，在临床应用极为方便，采用胶体金法检测粪便乳铁蛋白，也比酶联免疫法检测更为简单快捷， 10～15分钟即可判读结果，同时其检测重复性好，成品结构稳定、使用性能佳，可以部分代替目前有创的检测手段，临床实用性强。
[0005]近年来，胶体金法体外诊断试剂是IVD发展的一个重要方向，该项技术发展迅速，在生物医学领域特别是医学检验中得到了广泛应用，受到了高度和广泛重视，并得到了世界医学检验界的认可。因此，在结果判断上，如何借助胶体金法体外诊断试剂判断样本中是否含有乳铁蛋白抗原，是目前检测粪便乳铁蛋白迫切需要解决的一个技术难题。

技术实现思路

[0006]本专利技术提供一种操作简单、性能可靠，无需借助任何仪器下、直观快速地判断出样品中是否含有乳铁蛋白抗原，具有成本低廉、适于临床快速检测的粪便乳铁蛋白检测试剂盒及其制备方法。
[0007]为达到上述专利技术目的，采用的技术方案如下：
[0008]一种粪便乳铁蛋白检测试剂盒，包括PVC底板，所述PVC底板上由左到右依次搭接设置有样品垫、胶体金金标垫、硝酸纤维素膜和吸水纸；
[0009]所述硝酸纤维素膜内含有从左到右依次分布设置的检测线T和质控线 C，对应的检测线T和质控线C处分别在硝酸纤维素膜上形成检测区T和质控区C；
[0010]所述样品垫右侧端部搭接于所述胶体金金标垫的左侧端部上侧，所述胶体金金标垫右侧端部搭接于硝酸纤维素膜的左侧端部上侧，所述吸水纸左侧端部搭接于硝酸纤维素膜的右侧端部上侧；
[0011]所述胶体金金标垫的左侧端部位于样品垫的内侧，所述硝酸纤维素膜的左侧端部位于胶体金金标垫的内侧，所述硝酸纤维素膜的右侧端部位于吸水纸的内侧。
[0012]优选地，所述胶体金金标垫的材质为玻璃纤维。
[0013]优选地，所述样品垫的材质为聚酯膜或玻璃纤维。
[0014]优选地，所述样品垫、胶体金金标垫、硝酸纤维素膜和吸水纸的条宽均不小于2.5mm。
[0015]一种粪便乳铁蛋白检测试剂盒的制备方法，包括以下步骤：
[0016]A、制备样品垫：
[0017]将玻璃纤维平放在玻璃或保鲜膜上，将配好的样本垫处理液适量体积倒在玻璃纤维上，将液体均匀涂布于玻璃纤维上，将涂布好的样本垫放于钉盘吸塑上干燥，在干燥房间的湿度≤25％环境下干燥12～24小时，将干燥的样本垫放于自封袋密封、备用；
[0018]B、制备胶体金金标垫：
[0019]制备胶体金溶液和标记乳铁蛋白抗体及标记物抗体，然后喷涂至玻璃纤维上，干燥，得到胶体金金标垫；
[0020]C、制备硝酸纤维素膜：
[0021]用包被缓冲液稀释检测线包被抗体、质控线包被抗体制备成包被工作液，即检测线包被液和质控线包被液，采用喷膜仪将制备的检测线包被液和质控线包被液分别包被在硝酸纤维素膜上，形成检测线T和质控线C，得到含有检测线T和质控线C的硝酸纤维素膜；
[0022]D、贴板及切割：
[0023]将样品垫、胶体金金标垫、硝酸纤维素膜和吸水纸顺序搭接PVC底板上，并按照规格要求切割成条宽不小于2.5mm。
[0024]进一步地，所述步骤A中的样本垫处理液由0.3％～0.7％吐温20、0.3％～0.7％曲拉通X
‑
100、3.5％～4.5％BSA、0.25％防腐剂的pH为8.0的 0.05mol/L Tris
‑
HCl缓冲液组成。
[0025]进一步地，所述步骤A中钉盘吸塑的材质为聚氯乙烯，钉盘吸塑的规格为：550*310mm，由2mm钉尖组成，钉子与钉子之间的间距为2cm。使用时，涂布好的样本垫放于钉盘吸塑上干燥，整个样本垫悬空有利于气体的流通，使样本垫干燥更均一，干燥时间更短。
[0026]进一步地，所述步骤B中，具体包括以下步骤：
[0027]a、烧制胶体金溶液；
[0028]b、制备粪便乳铁蛋白胶体金溶液、标记物胶体金溶液；
[0029]c、涂布：取玻璃纤维，将适量液体均匀涂布于玻璃纤维上，将涂布好的玻璃纤维进行干燥；
[0030]d、胶体金金标垫干燥后，用铝箔袋封存备用。
[0031]进一步地，所述步骤B中，胶体金金标垫制备完成后，含有粪便乳铁蛋白标记抗体和标记物抗体。
[0032]进一步地，所述步骤C中，具体包括以下步骤：
[0033]e、按照配方要求配制乳铁蛋白检测线包被抗体和质控线包被物的溶液，对应分别形成检测线包被液、质控线包被液，喷量为0.8～1.2μL/cm，最终检测线包被液、质控线包被液浓度为1.0mg/mL；
[0034]f、取已粘贴硝酸纤维素膜的PVC底板，按照距离间隔一次性划出检测线T和质控线C；其中，硝酸纤维素膜的规格宽度为20mm；
[0035]g、质控线C至检测线T间距离5mm，误差≤
±
0.5mm；检测线T至硝酸纤维素膜的底端距离为7mm，误差≤
±
0.5mm；
[0036]h、设定干燥温湿度，湿度≤25％、温度≤30℃的环境下干燥，干燥时间为12～24h；
[0037]i、将干燥的硝酸纤维素膜放于自封袋密封，备用。
[0038]进一步地，所述步骤D中，具体包括以下步骤：
[0039]j、检查生产车间湿度，确保湿度≤25％才能开始工作；
[0040]k、撕开PVC底板上表面的离层纸，将胶体金金标垫黏贴在PVC底板上，让胶体金金标垫的上边缘与硝酸纤维素膜的下边缘重叠1～2mm，将样品垫粘贴在胶体金金标垫的下方，让样品垫的上边缘与胶体金金标垫的下边缘重叠1～2mm；
[0041]1、撕开PVC底板上表面的离层纸，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种粪便乳铁蛋白检测试剂盒，包括PVC底板(1)，其特征在于：所述PVC底板(1)上由左到右依次搭接设置有样品垫(2)、胶体金金标垫(3)、硝酸纤维素膜(4)和吸水纸(5)；所述硝酸纤维素膜(4)内含有从左到右依次分布设置的检测线T(6)和质控线C(7)，对应的检测线T(6)和质控线C(7)处分别在硝酸纤维素膜(4)上形成检测区T和质控区C；所述样品垫(2)右侧端部搭接于所述胶体金金标垫(3)的左侧端部上侧，所述胶体金金标垫(3)右侧端部搭接于硝酸纤维素膜(4)的左侧端部上侧，所述吸水纸(5)左侧端部搭接于硝酸纤维素膜(4)的右侧端部上侧；所述胶体金金标垫(3)的左侧端部位于样品垫(2)的内侧，所述硝酸纤维素膜(4)的左侧端部位于胶体金金标垫(3)的内侧，所述硝酸纤维素膜(4)的右侧端部位于吸水纸(5)的内侧。2.根据权利要求1所述的一种粪便乳铁蛋白检测试剂盒，其特征在于，所述胶体金金标垫(3)的材质为玻璃纤维。3.根据权利要求1所述的一种粪便乳铁蛋白检测试剂盒，其特征在于，所述样品垫(2)的材质为聚酯膜或玻璃纤维。4.根据权利要求1所述的一种粪便乳铁蛋白检测试剂盒，其特征在于，所述样品垫(2)、胶体金金标垫(3)、硝酸纤维素膜(4)和吸水纸(5)的条宽均不小于2.5mm。5.根据权利要求1～4中任意一项所述的一种粪便乳铁蛋白检测试剂盒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：A、制备样品垫(2)：将玻璃纤维平放在玻璃或保鲜膜上，将配好的样本垫处理液适量体积倒在玻璃纤维上，将液体均匀涂布于玻璃纤维上，将涂布好的样本垫放于钉盘吸塑(8)上干燥，在干燥房间的湿度≤25％环境下干燥12～24小时，将干燥的样本垫放于自封袋密封、备用；B、制备胶体金金标垫(3)：制备胶体金溶液和标记乳铁蛋白抗体及标记物抗体，然后喷涂至玻璃纤维上，干燥，得到胶体金金标垫；C、制备硝酸纤维素膜(4)：用包被缓冲液稀释检测线包被抗体、质控线包被抗体制备成包被工作液，即检测线包被液和质控线包被液，采用喷膜仪将制备的检测线包被液和质控线包被液分别包被在硝酸纤维素膜上，形成检测线T(6)和质控线C(7)，得到含有检测线T(6)和质控线C(7)的硝酸纤维素膜(4)；D、贴板及切割：将样品垫(2)、胶体金金标垫(3)、硝酸纤维素膜(4)和吸水纸(5)顺序搭接PVC底板(1)上，并按照规格要求切割成条宽不小于2.5mm。6.根据权利要求5所述的一种粪便乳铁蛋白检测试剂盒的制备方法，其特征在于，所述步骤A中的样本垫处理液由0.3％～0.7％吐温20、0.3％～0.7％曲拉通X
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100...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭亚，黄春英，林燕清，
申请(专利权)人：珠海科域生物工程股份有限公司，
类型：发明
国别省市：