嗜盐鱼芽孢杆菌LH-B.0015及其菌剂与用途制造技术

本发明专利技术公开了一种嗜盐鱼芽孢杆菌（Piscibacillus halophilus）LH

【技术实现步骤摘要】
嗜盐鱼芽孢杆菌LH-B.0015及其菌剂与用途


[0001]本专利技术涉及环保微生物领域，特别是嗜盐鱼芽孢杆菌LH-B.0015、含嗜盐鱼芽孢杆菌LH-B.0015的微生物菌剂及其应用。

技术介绍

[0002]在海产品加工、腌制品加工、化工、石油和养殖等行业中，外排含氮废水大多具有高盐的特点。比如金属精炼废水含有大量的硝酸盐氮、海产品加工废水普遍含有大量的蛋白质和氨氮。高盐废水一般是指总含盐质量分数至少1% 的废水，海水代用等众多的工业实践过程中，含盐量有时甚至高达15~30%，目前高盐废水产出途径和产量不断增加，废水水量以3％的年增长速率逐年增长，高含盐废水如果不能达标排放，则会污染地表、土壤、沿海和河口等，引发诸如富营养化等各种环境问题和生态问题。
[0003]高盐度对常规生物处理系统中微生物的正常代谢会产生不利的影响，主要包括：渗透压偏高，微生物细胞质壁分离，使生长受到阻碍甚至死亡；微生物代谢酶活性受阻；水体密度增加，影响污泥沉降效果等。因此普通生化处理对高盐含氮废水难以稳定运行，一直是污水处理的瓶颈。而很多企业利用清水稀释至0.8% 以下进行处理，这样不仅造成水资源的浪费，同时也增加处理设施及排污总量。因此，如何有效、经济地实现高含盐废水生物脱氮处理成为亟待解决的科学和工程难点问题，而实现有效、经济的高含盐废水生物脱氮的关键是找到高效嗜（耐）盐微生物。
[0004]嗜（耐）盐微生物的存在为高含盐废水生物脱氮处理提供新的思路，它是一类生活在高盐环境内的极端微生物，广泛存在于盐场、盐湖、土壤等高盐环境内。根据盐度生存范围（1~30%），嗜盐微生物分为耐盐菌、轻度嗜盐菌、中度嗜盐菌和极端嗜盐菌。这些嗜（耐）盐微生物在长期的进化过程中形成独特的高盐环境中生存的能力，具有极为特殊的生理结构和代谢机制。嗜盐微生物的细胞膜、细胞壁结构性成分和功能性成分的稳定性、反应动力学、酶系的性质、代谢途径及信息传递、蛋白质核酸成分及构象等方面为适应高盐环境而具有特异性。这些耐盐机制保证了嗜盐微生物在高盐环境内进行新陈代谢和生长。
[0005]大连海事大学李健（李健.一株中度嗜盐菌同步异氧硝化好氧反硝化脱氮性质研究，大连海事大学2016年工程硕士学位论文）分离筛选出一株能够以SND方式脱氮的菌株BO2，鉴定为Halomonas菌株，最优脱氮NaCl浓度为60g/L（6%）、最适脱氮C/N为5、最适脱氮初始(NH4)2SO4浓度为500mg/L，168h脱氮率达99.37%。
[0006]青岛大学张培玉等人（张培玉、郭沙沙等.1株中度嗜盐硝化菌的鉴定及在高盐废水中的应用，《安全与环境学报》,2010,10（3）:13-17）分离出1株中度嗜盐异氧硝化菌gs2，鉴定为盐单胞菌属，该菌株能在NaCl质量分数为0-20%的培养基中生长，NaCl质量分数超过15%时，菌株生长受到明显抑制。该菌具有异氧硝化能力，同时还具有一定好氧反硝化能力，可实现同步硝化反硝化。
[0007]现有技术关于嗜盐菌的硝化反硝化能力报道较少，尤其是在盐度≥15%的条件下，能够实现同步硝化反硝化脱氮的菌。从环境中获取耐盐能力大于15%的嗜盐硝化反硝化是
高盐废水生物脱氮需要解决的关键技术问题。

技术实现思路

[0008]本专利技术所要解决的技术问题是针对现有技术的不足，提供一种能够在高盐条件下进行异氧硝化好氧反硝化的LH-B.0015菌株。
[0009]本专利技术所要解决的另一个技术问题是提供了一种微生物菌剂。
[0010]本专利技术的再一个问题是提供上述嗜盐鱼芽孢杆菌LH-B.0015的应用及含嗜盐鱼芽孢杆菌LH-B.0015微生物菌剂的用途，以解决高盐条件下的生物脱氮问题，尤其是盐度≥15%条件下的生物脱氮问题。
[0011]本专利技术的目的是通过以下技术方案实现：本专利技术公开的嗜盐鱼芽孢杆菌LH-B.0015，根据其形态特征和生理生化特征及16SrRNA基因序列在Genbank中的检索结果，分类命名为Piscibacillus halophilus LH-B.0015。LH-B.0015的系统发育分析树见图1。该菌株于2018年8月20日保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为CGMCC NO:16318。本专利技术的嗜盐鱼芽孢杆菌LH-B.0015的16SrRNA序列长度为1430 bp，如序列表所示。
[0012]本专利技术的嗜盐鱼芽孢杆菌LH-B.0015能够在盐浓度1%-30%、pH6-11、温度15-45℃范围内生长，最适生长盐度为1%-25%，最适生长pH为7.0-8.5、最适生长温度为25-35℃。
[0013]本专利技术所述的嗜盐鱼芽孢杆菌从海底底泥样品中分离获得，其生长以胺类、酚类等为碳源，以氨氮、凯氏氮为氮源，同时能够以NO
3-或NO
2-为电子受体生长。
[0014]本专利技术还公开了嗜盐鱼芽孢杆菌LH-B.0015的用途，该用途为将嗜盐鱼芽孢杆菌LH-B.0015或者其发酵液作有效成份用于处理盐浓度1％～30％的高盐废水，尤其是用于高盐废水的生物脱氮处理。可以在异氧条件下对高盐废水进行硝化处理，或者在缺氧/好氧条件下对高盐废水进行反硝化处理。也可以对高盐废水进行同步异氧硝化缺氧/好氧反硝化处理。
[0015]还可以嗜盐鱼芽孢杆菌LH-B.0015或者其发酵液作有效成份用于高盐含氮废水处理、海水净化治理或者盐碱地治理。
[0016]本专利技术还提供了一种微生物菌剂，该微生物菌剂含有权利要求1所述的嗜盐鱼芽孢杆菌LH-B.0015的菌种发酵液。所述的微生物菌剂中嗜盐鱼芽孢杆菌LH-B.0015的菌种发酵液的质量含量优选不低于10%。菌剂的制备方法可以采用现有技术中公开的常规菌剂的制备方法。
[0017]本专利技术所述的微生物菌剂可以在高盐废水处理中的应用。进一步优选对于盐度大于15%的高盐废水进行异氧硝化好氧反硝化。利用本专利技术菌株LH-B.0015制备的微生物菌剂，当以生物脱氮为主要目标进行应用时，该菌剂的最适耐盐浓度范围是3%-25%。当废水盐浓度为3%-25%，该菌剂可以NH
4-N、NO
3-N、NO
2-N为电子受体，并且TN≤100mg/L、C/N≥5，且经过72h，NH
4-N、NO
3-N、NO
2-N的去除率可以达到90%以上。
[0018]本专利技术所述的微生物菌剂中，所述的嗜盐鱼芽孢杆菌LH-B.0015的菌种发酵液的制法是：将培养基灭菌后，接种嗜盐鱼芽孢杆菌LH-B.0015，置于35℃，100-120rpm培养48-72h，所得培养液按10%的量转接至新鲜培养基中，反复转接2-4次，至培养液OD600＞1.5，即得嗜盐鱼芽孢杆菌LH-B.0015的菌种发酵液；
培养基：甘油500mg/L、葡萄糖250mg/L、甲醇500mg/L、甲胺200mg/L、氯化钠100～250g/L、苯酚100mg/L、苯胺50mg/L、乙酸钠250mg/L、檬酸三钠250mg/L、酵母粉100mg/L、本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种嗜盐鱼芽孢杆菌（Piscibacillus halophilus）LH-B.0015，其特征在于：其保藏号为CGMCC NO:16318。2.权利要求1所述的嗜盐鱼芽孢杆菌LH-B.0015的用途，其特征在于：该用途为将嗜盐鱼芽孢杆菌LH-B.0015或者其发酵液作有效成份用于处理盐浓度1％～30％的高盐废水。3.根据权利要求2所述的用途，其特征在于：所述的用途为将嗜盐鱼芽孢杆菌LH-B.0015或者其发酵液作有效成份用于盐浓度1％～30％的高盐废水的生物脱氮处理。4.根据权利要求3所述的用途，其特征在于：在异氧条件下对高盐废水进行硝化处理，或者在缺氧/好氧条件下对高盐废水进行反硝化处理。5.根据权利要求3所述的用途，其特征在于：对高盐废水进行同步异氧硝化缺氧/好氧反硝化处理。6.权利要求1所述的用途，其特征在于：该用途为将嗜盐鱼芽孢杆菌LH-B.0015或者其发酵液作有效成份用于高盐含氮废水处理、海水净化治理或者盐碱地治理。7.一种微生物菌剂，其特征在于：该微生物菌剂含有权利要求1所述的嗜盐鱼芽孢杆菌LH-B.0015的菌...

【专利技术属性】
技术研发人员：田凤蓉，王开春，孙文妮，徐军，张璐璐，洪磊，袁丽娟，曲昂，
申请(专利权)人：中蓝连海设计研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：