一种IBD卵黄抗体微球及其制备方法技术

本发明专利技术属于卵黄抗体制备技术领域，具体涉及一种IBD卵黄抗体微球及其制备方法。该方法以黄精多糖、IBD卵黄抗体和柴胡精油作为微球内相，以聚乳酸

【技术实现步骤摘要】
一种IBD卵黄抗体微球及其制备方法


[0001]本专利技术属于卵黄抗体制备
，具体涉及一种IBD卵黄抗体微球及其制备方法。

技术介绍

[0002]鸡传染性法氏囊病（IBD）又称鸡传染性腔上囊病，是传染性法氏囊病毒引起的一种急性、高度传染性疾病。由于该病发病突然、病程短、死亡率高，且可引起鸡体免疫抑制，仍然是养鸡业的主要传染病之一，给养鸡业带来了极大的经济损失。预防接种是预防鸡传染性法氏囊病的一种有效措施，通过免疫注射产蛋鸡，从其生产的蛋黄中提取相应的卵黄抗体，用于疾病的预防和治疗，以被广泛用于临床。卵黄抗体具有多方面的优点：（1）大规模饲养、自动收集和分选鸡蛋是常规技术，与哺乳动物相比，鸡的饲养成本更低。（2）用母鸡生产抗体造成的损伤非常少，只需要收集鸡蛋，而不需要采血，因此对动物造成的应激刺激也很少。（3）与哺乳动物血清抗体相比，卵黄只含有IgY一类抗体，因此非常易于通过沉淀技术进行纯化。（4）一旦经过纯化，IgY可以在4℃稳定保存数年。（5）鸡的抗体还可以识别不同于哺乳动物抗体的抗原表位，因此可以形成不同于哺乳动物抗体的抗体库。（6）与IgG相比，IgY不会激活哺乳动物的补体系统或者在胃肠道中与哺乳动物的Fc受体结合导致炎症反应。
[0003]虽然卵黄抗体的优点非常突出，但是现在的传染性法氏囊病卵黄抗体还存在一些不足，例如，注射量大，易产生应激反应。针对传染性法氏囊病卵黄抗体的研究一直在不断进行。

技术实现思路

[0004]有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种IBD卵黄抗体微球，这种卵黄抗体微球能够有效提高卵黄抗体的免疫效力，减少注射量。
[0005]本专利技术所采用的技术方案为：一种IBD卵黄抗体微球的制备方法，包括以下步骤：1）将黄精多糖和IBD卵黄抗体混合搅拌均匀；2）将步骤1）得的溶液物料加入到柴胡精油中，用均质机均质乳化，作为微球内相；3）将聚乳酸
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羟基乙酸共聚物（PLGA）溶于二氯甲烷中得到溶液作为微球外相，溶液中聚乳酸
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羟基乙酸共聚物的浓度为0.5
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2%；4）将步骤2）溶液与步骤3）溶液以1:3
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10的比例混合得到混合液，向混合液中加入表面活性剂PEG400均质，以10000 r/min速率进行高剪切乳化，增加内相和外相的亲和性，使内相有效成分被包封于PLGA外相内；5）步骤4）的混合液置于磁力搅拌器中，在转速250 r/min的室温条件不断搅拌得到微球，使乳滴中的二氯甲烷完全挥发，离心得到微球，微球用蒸馏水洗涤3次除去多余的有机溶剂得到IBD卵黄抗体微球。
[0006]所述步骤2）中每10ml柴胡精油中含有3
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7g黄精多糖和5ml IBD卵黄抗体。
[0007]所述步骤5）制得的IBD卵黄抗体微球的粒径为25
‑
1000nm。
[0008]本专利技术中的柴胡精油也叫柴胡挥发油，制备时，采用水蒸气蒸馏法对粉碎的柴胡进行蒸馏提取，收集蒸馏液，取上层挥发油。
[0009]本专利技术中使用的IBD卵黄抗体采用以下方法制得：a、抗原制备：采集具有典型IBD病理变化的法氏囊和脾脏，剪碎后高速搅拌匀浆，离心取上清液，加入0.3%甲醛，37℃温箱中灭活48小时；b、抗原乳化：
①
油相准备：取10号白油94份，司本
‑
80 6份，硬脂酸铝2份，硬脂酸铝先与少量白油混合加热溶化后，补足白油，加入司本
‑
80，混匀得到油相；
②
水相准备：另取步骤a制得的抗原96份、吐温
‑
80 4份混匀得水相；
③
按油相3份、水相1份的比例混匀，取水相加入高速均质机内，慢慢搅拌，徐徐加入油相，加完高速搅拌，加入硫柳汞至其终浓度为0.01%，制成乳白色带粘滞性的IBD油乳剂灭活苗；c、鸡群免疫：试验种母鸡在18周龄时接种步骤b制得的IBD油乳剂灭活苗，每只鸡颈部皮下注射1.5ml，每间隔2周，进行一次加强免疫，持续给予3次免疫，之后每隔7天，测抗体效价，直到效价达1:128为止，收集试验鸡所产鸡蛋；d、卵黄抗体粗制：取步骤c所产鸡蛋的卵黄，在卵黄悬液内加入6倍量的蒸馏水稀释，用盐酸调节稀释液pH值为5.0~5.2，离心，取上清液，对上清液进行浓缩得到卵黄抗体液；e、卵黄抗体纯化：用超滤膜对步骤d的卵黄抗体液进行超滤纯化得精制IBD卵黄抗体。
[0010]与现有技术相比，本专利技术的有益技术效果是：1、微球是一种将药物有效成分包裹于高分子聚合物内，以实现药物长时间平稳释放目的的药物传递系统。微球具有可提高药物稳定性，缓释或控释药物的优势，同时微球还可防止药物在体内失活，使药物浓集于靶区，提高疗效，降低毒副作用。虽然微球的优势比较明显，但是在实际的研究过程，并不是任何药物成分均可以制成微球形态，这是由药物的特性所影响的。就像将IBD卵黄抗体与黄精多糖复配进行微球的制作，存在着诸多的困难，受到卵黄抗体（蛋白质类物质）和黄精多糖是中药成分的影响，采用常规的微球外相直接对其进行包封时的包封率一直不能达到要求，很容易导致卵黄抗体活性失效。
[0011]2、本专利技术的微球在制备时，所选择的柴胡精油可以对黄精多糖和IBD卵黄抗体进行很好的包容，柴胡精油可以使IBD卵黄抗体与黄精多糖包裹在其内，形成了一种初步的包封状态。内相继续进行包裹时，外层为柴胡精油的微球才可以被PLGA进行更理想的包封，这是因为PLGA为一种高分子有机化合物，这种高分子化合物能够对柴胡精油进行有效的包裹。同时柴胡精油还有解热功效，配合增强免疫效果。
[0012]3、本专利技术将IBD卵黄抗体与黄精多糖复配作为微球内相的主要有效成分，黄精多糖因其结构中具有许多羟基，可以通过取代蛋白质和水之间的氢键来提供稳定效果，增加卵黄抗体的稳定性，同时增强IBD卵黄抗体微球的免疫效力，可以协助激活免疫活性细胞和细胞因子，来共同增加免疫效果，最终可以实现在本专利技术的微球使用时，不需要很大的IBD卵黄抗体注射量就能实现理想的防治效果。黄精多糖可以增加水相黏度，提高初乳(W/O)的稳定性，增大药物向外水相扩散的阻力，对微球的包封率有一定的提高。
[0013]4、本专利技术所制成微球的平均粒径为25
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1000nm，这种微球特殊的结构有利于将卵黄抗体和黄精多糖递呈给免疫活性细胞，吞噬细胞吞噬微球，并能破坏微球的壳结构，释放卵黄抗体和黄精多糖，中和机体感染的IBD病毒，对于未感染IBD的鸡群起到预防保护作用，并使感染IBD发病的鸡群病情迅速控制。相同注射量的情况下，本专利技术的卵黄抗体微球效果优于普通的卵黄抗体，本专利技术的卵黄抗体微球实现了同等免疫效果下的注射量降低，随着注射量的降低，应激反应也随之降低。
附图说明
[0014]图1为激光粒度分析仪测得结果图。
具体实施方式
[0015]下面结合实施例来说明本专利技术的具体实施方式，但以下实施例只是用来详细说明本专利技术，并不以任何方式限制本专利技术的范围。
[本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种IBD卵黄抗体微球的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1）将黄精多糖和IBD卵黄抗体混匀；2）将步骤1）得的物料加入到柴胡精油中，混合均匀作为微球内相；3）将聚乳酸
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羟基乙酸共聚物溶于二氯甲烷中得到溶液作为微球外相，溶液中聚乳酸
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羟基乙酸共聚物的浓度为0.5
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2%；4）将步骤2）溶液与步骤3）溶液以体积比1:3
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10的比例混合得到混合液，向混合液中加入表面活性剂PEG400均质，使...

【专利技术属性】
技术研发人员：李自波，高媛媛，李国辉，姬星宇，黄向丽，何晓蓓，赵自冰，
申请(专利权)人：商丘美兰生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：