用于非小细胞肺癌CYFRA21-1检测的电化学发光免疫传感器及检测方法技术

本发明专利技术提供用于非小细胞肺癌CYFRA21

【技术实现步骤摘要】
用于非小细胞肺癌CYFRA21
‑
1检测的电化学发光免疫传感器及检测方法


[0001]本专利技术属于电化学发光免疫传感器、纳米复合材料
，涉及一种用于非小细胞肺癌CYFRA21
‑
1检测的电化学发光免疫传感器及检测方法。

技术介绍

[0002]肺癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一，已成为全球癌症相关死亡的主要原因。 肺癌分为小细胞肺癌和非小细胞肺癌，其中非小细胞肺癌（NSCLC）约占所有肺癌的85％，而且大约有75％的NSCLC患者在被发现时已经处于晚期。现有的诊断方法具有价格昂贵、过程复杂耗时、患者机体损伤大等缺点。因此对于非小细胞肺癌而言，探索成本较低、简便快捷且机体损伤小的疾病诊断方法具有重要的临床意义。CYFRA21
‑
1是细胞角蛋白19（CK19）的可溶性片段。它是非小细胞肺癌常见的生物标志物，其水平与肿瘤的类型和严重程度密切相关，所以检测CYFRA21
‑
1对于肺癌的诊断具有重要意义。
[0003]目前CYFRA21
‑
1的检测方法主要有传统方法如荧光测定法、表面等离子共振分析和免疫放射测定方法等。虽然灵敏度高但存在如耗时、成本高、设备昂贵和操作繁琐等不足，因此开发一种简便、灵敏、快速和经济的方法用于临床标本CYFRA21
‑
1的检测是非常有必要的。

技术实现思路

[0004]为了解决现有技术中的问题，本专利技术提供一种用于非小细胞肺癌CYFRA21
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1检测的电化学发光免疫传感器。本专利技术构建了以双金属有机框架作为载体，MXene和NiMn LDH的纳米复合材料作为基底，协同促进Luminol发光的夹心型电化学发光免疫传感器,为非小细胞肺癌的检测提供了新的诊断途径。
[0005]除特殊说明外，本专利技术所述份数均为重量份，所述百分比均为质量百分比。
[0006]为实现上述目的，本专利技术的技术方案为：一种用于非小细胞肺癌CYFRA21
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1检测的电化学发光免疫传感器，其特征在于，通过信号探针和基底材料构建用于非小细胞肺癌CYFRA21
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1检测的电化学发光免疫传感器。
[0007]所述构建用于非小细胞肺癌CYFRA21
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1检测的电化学发光免疫传感器的方法为：将基底材料MXene
‑
PEI
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NiMn LDH溶液滴加到清洁的玻碳电极表面上，然后将 AuNPs溶液滴加到玻碳电极表面上，再将用PBS缓冲液室温溶解的Ab1滴加在玻碳电极上，4℃孵育12 h；接着在电极上滴加 1% BSA溶液，4℃孵育30 min；最后将用PBS缓冲液室温溶解的CYFRA21
‑
1滴在玻碳电极上，4℃孵育1.5 h，即得到用于CYFRA21
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1检测的电化学发光免疫传感器。
[0008]所述信号探针由La
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MOF@ZIF
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67@AuNPs@Luminol溶液与 Ab2于室温搅拌12小时，离心后沉淀洗涤，得到信号探针。
[0009]所述La
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MOF@ZIF
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67@AuNPs@Luminol溶液的制备包括如下步骤：
1）ZIF
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67分散液的制备：将 Co(NO3)2·
6H2O和 2
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甲基咪唑用甲醇溶解，在室温下搅拌3小时，然后离心，用甲醇和水洗涤，60℃下干燥得棕色粉末，然后将棕色粉末分散在超纯水中制得浓度为1mg/mL的ZIF
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67分散液；2）La
‑
MOF分散液的制备:将 La(NO3)3和2
‑
氨基对苯二甲酸加入到 DMF 溶液中，室温下搅拌10分钟，然后转移到衬有聚四氟乙烯的不锈钢高压釜中，在150℃下反应6 h，冷却至室温，甲醇和水洗涤，离心收集沉淀物，60℃真空干燥12h；最后将干燥的沉淀物分散在超纯水中制得浓度为1mg/ml的La
‑
MOF分散液；3）AuNPs溶液的制备：将 100 mL 0.01% HAuCl
4 溶液在搅拌下煮沸，然后加入 2.5 mL 1% 柠檬酸钠溶液，保持沸腾15 min后冷却至室温。最后，溶液颜色变为紫红色，表明AuNPs的成功合成。
[0010]4）La
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MOF @ZIF
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67 @AuNPs@Luminol的制备：首先，将1mL 1mg/mL La
‑
MOF 分散液加入1mL 1mg/mL ZIF
‑
67分散液中，并在室温下搅拌12小时，离心洗涤后得到La
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MOF@ZIF
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67纳米复合材料分散液；然后将AuNPs溶液加入纳米复合材料分散液中，并在室温下保持均匀搅拌4小时，用水冲洗，离心得到沉淀 La
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MOF@ZIF
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67@AuNPs，再用超纯水溶解得到La
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MOF@ZIF
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67@AuNPs溶液；再加入Luminol，搅拌4 h后离心，沉淀用超纯水溶解得到La
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MOF@ZIF
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67@AuNPs@Luminol溶液。
[0011]所述基底材料MXene
‑
PEI
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NiMn LDH溶液的制备为将MXene分散体与 1% PEI溶液混合，然后将混合物在室温下搅拌2小时，加入NiMn LDH分散液，搅拌8小时，离心后将沉淀洗涤得MXene
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PEI
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NiMn LDH基底材料；然后将MXene
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PEI
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NiMn LDH基底材料溶于超纯水中得到基底材料MXene
‑
PEI
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NiMn LDH溶液，于4℃备用。
[0012]所述NiMn LDH分散液的制备为将 MnSO4·
4H2O、 Ni(NO3)2·
6H2O 和 NH4F溶解在超纯水中，超声处理成均匀溶液后，滴加 NH3·
H2O，然后在室温下搅拌4小时，再老化12小时，产物离心，沉淀用超纯水洗涤后60℃真空烘箱中干燥12小时；最后将干燥后的沉淀分散在超纯水中，制得浓度为1mg/ml的NiMn LDH分散液。
[0013]一种用于非小细胞肺癌CYFRA21
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1检测的电化学发光免疫传感器，其特征在于，制备过程包括如下步骤：（1）信号探针的制备：1）ZIF
‑
67分散液的制备：将 1.455 g Co(NO3)2·
6H2O 和1.65 g 2
‑
甲基咪唑分别溶解在30 mL甲醇中，混合，在室温下搅拌3小时，然后将混合物离心，得到棕色粉末，用甲醇和水洗涤，60℃下干燥，将本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于非小细胞肺癌CYFRA21
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1检测的电化学发光免疫传感器，其特征在于：通过信号探针和基底材料构建用于非小细胞肺癌CYFRA21
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1检测的电化学发光免疫传感器；所述构建用于非小细胞肺癌CYFRA21
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1检测的电化学发光免疫传感器的方法为：将基底材料MXene
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PEI
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NiMn LDH溶液滴加到清洁的玻碳电极表面上，然后将AuNPs溶液滴加到玻碳电极表面上，再将用PBS缓冲液室温溶解的Ab1滴加在玻碳电极上，4℃孵育12h；接着在电极上滴加1％BSA溶液，4℃孵育30min；最后将用PBS缓冲液室温溶解的CYFRA21
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1滴在玻碳电极上，4℃孵育1.5h，即得到用于CYFRA21
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1检测的电化学发光免疫传感器。2.如权利要求1所述的电化学发光免疫传感器，其特征在于：所述信号探针由La
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MOF@ZIF
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67@AuNPs@Luminol溶液与Ab2于室温搅拌12小时，离心，沉淀洗涤制得。3.如权利要求2所述的电化学发光免疫传感器，其特征在于：所述La
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MOF@ZIF
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67@AuNPs@Luminol溶液的制备包括如下步骤：1)ZIF
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67分散液的制备：将Co(NO3)2·
6H2O和2
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甲基咪唑用甲醇溶解，在室温下搅拌3小时，然后离心，用甲醇和水洗涤，60℃下干燥得棕色粉末，然后将棕色粉末分散在超纯水中制得浓度为1mg/mL的ZIF
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67分散液；2)La
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MOF分散液的制备:将La(NO3)3和2
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氨基对苯二甲酸加入到DMF溶液中，室温下搅拌10分钟，然后转移到衬有聚四氟乙烯的不锈钢高压釜中，在150℃下反应6h，冷却至室温，甲醇和水洗涤，离心收集沉淀物，60℃真空干燥12h；最后将干燥的沉淀物分散在超纯水中制得浓度为1mg/ml的La
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MOF分散液；3)AuNPs溶液的制备：将100mL 0.01％HAuCl4溶液在搅拌下煮沸，然后加入2.5mL 1％柠檬酸钠溶液，保持沸腾15min后冷却至室温；4)La
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MOF@ZIF
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67@AuNPs@Luminol的制备：首先，将1mL 1mg/mL La
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MOF分散液加入1mL 1mg/mL ZIF
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67分散液中，并在室温下搅拌12小时，离心洗涤后得到La
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MOF@ZIF
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67纳米复合材料分散液；然后将AuNPs溶液加入纳米复合材料分散液中，并在室温下保持均匀搅拌4小时，用水冲洗，离心得到沉淀La
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MOF@ZIF
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67@AuNPs，再用超纯水溶解得到La
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MOF@ZIF
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67@AuNPs溶液；再加入Luminol，搅拌4h后离心，沉淀用超纯水溶解得到La
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MOF@ZIF
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67@AuNPs@Luminol溶液。4.如权利要求1
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3任一项所述的电化学发光免疫传感器，其特征在于：所述基底材料MXene
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PEI
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NiMn LDH溶液的制备为将MXene分散体与1％PEI溶液混合，然后将混合物在室温下搅拌2小时，加入NiMn LDH分散液，搅拌8小时，离心后将沉淀洗涤得MXene
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PEI
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NiMn LDH基底材料；然后将MXene
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PEI
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NiMn LDH基底材料溶于超纯水中得到基底材料MXene
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PEI
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NiMn LDH溶液。5.如权利要求4所述的电化学发光免疫传感器，其特征在于：所述NiMn LDH分散液的制备为将MnSO4·
4H2O、Ni(NO3)2·
6H2O和NH4F溶解在超纯水中，超声处理成均匀溶液后，滴加NH3·
H2O，然后在室温下搅拌4小时，再老化12小时，产物离心，沉淀用超纯水洗涤后60℃真空烘箱中干燥12小时；最后将干燥后的沉淀分散在超纯水中，制得浓度为1mg/ml的NiMn LDH分散液。6.一种用于非小细胞肺癌CYFRA21
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1检测的电化学发光免疫传感器，其特征在于，制备过程包括如下步骤：(1)信号探针的制备：
1)ZIF
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67分散液的制备：将1.455g Co(NO3)2·
6H2O和1.65g 2
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甲基咪唑分别溶解在30mL甲醇中，混合，在室温下搅拌3小时，然后将混合物离心，得到棕色粉...

【专利技术属性】
技术研发人员：母昭德，郭蕾，白丽娟，
申请(专利权)人：重庆医科大学，
类型：发明
国别省市：