【技术实现步骤摘要】
一种大规模生产外泌体的细胞固定化材料的制备方法及其产品和应用
[0001]本专利技术涉及一种大规模生产外泌体的细胞固定化材料的制备及其产品和应用,属于生物领域。
技术背景
[0002]外泌体(EVs)是细胞分泌的粒径在30
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150nm范围的小膜泡,其内包含了复杂 RNA 和蛋白质,表面还含有多种细胞结合位点能被细胞捕获,因此EVs在载药细胞治疗中具有很大的应用前景。然而,由于EVs在细胞分泌后,会分散在培养基中,EVs与细胞的分离提纯尤为困难,特别在分离悬浮细胞生产的EVs。
[0003]现有的分离收集方法有超滤、超速离心等,均存在产品或仪器昂贵,不利于大规模分离制取。
技术实现思路
[0004]本专利技术目的在于提供一种大规模生产外泌体的细胞固定化材料的制备方法。
[0005]本专利技术的再一目的在于:提供一种上述方法制备的大规模生产外泌体的细胞固定化材料产品。
[0006]本专利技术的又一目的在于:提供一种上述产品的应用。
[0007]本专利技术目的通过下述方案实现:一种大规模生产外泌体的细胞固定化材料的制备方法,通过材料海藻酸钠(SA)、羧甲基纤维素(CMC)与氯化钙溶液交联成海藻酸钙凝胶(Ga
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SA),实现细胞的固定化培养,包括如下步骤:首先,在100 mL产纯水中加入SA、在搅拌条件下60℃加热2 h,再加入CMC继续加热搅拌1 h,自然冷却后,静置放置到气泡去除为止,得到CMC/SA溶液;随后,将培养的待固定细胞消化、 ...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种大规模生产外泌体的细胞固定化材料的制备方法,其特征在于,通过海藻酸钠(SA)、羧甲基纤维素(CMC)与氯化钙溶液交联成海藻酸钙凝胶(Ga
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SA)实现细胞的固定化培养,包括如下步骤:首先,在100 mL纯水中加入浓度为1%~5%SA、在搅拌条件下60℃加热2 h,再加入浓度为0.5%~1%CMC继续加热搅拌1 h,自然冷却后,静置放置到气泡去除为止,得到CMC/SA溶液;随后,将培养的待固定细胞消化、离心、重悬后,按照10*5浓度接种到CMC/SA溶液中,得到待培养的接种母液;最后,利用注射器,在200 rpm搅拌条件下,将接种母液垂直悬空缓慢滴加入浓度为1%~4%的氯化钙(CaCl2)溶液中,浸泡30 min待反应物交联成Ca
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SA凝胶后,将含包埋MGC
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803细胞的凝胶颗粒接种于配置的液体培养基中,其中所配培养基含80%
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90%的RPMI
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1640培养基、10%
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20%的胎牛血清以及1%的双抗贮存液(青霉素+链霉素,使青霉素和链霉素的终浓度分别为100 U/mL和100 μg/mL),然后进行3D悬浮培养,得到细胞固定化材料。2.根据权利要求1所述大规模生产外泌体的细胞固定化材料的制备方法,其特征在于,所述固定细胞为悬浮、贴壁生长各种干细胞、癌细胞。3.根据权利要求2所述大规模生产外泌体的细胞固定化材料的制备方法,其特征在于所述固定细胞为MGC
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803细胞。4.根据权利要求1至3任一项所述大规模生产外泌体的细胞固定化材料的制备方法,其特征在于按如下步骤制备:首先,在100 mL纯水中加入1 g SA、在搅拌条件下60℃加热2 h,再加入0.5 g CMC继续加热搅拌1 h,自然冷却后,静置放置到气泡去除为止,得到CMC/SA溶液;随后,将培养的MGC
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803细胞胰酶消化、离心、重悬后,按照10*5浓度接种到CMC/SA溶液中,得到待培养的接种母液;最后,利用注射器,在200 rpm搅拌条件下,将接种母液垂直悬空缓慢滴加入1000 mL 1% CaCl2中,浸泡30 min待反应物交联成Ca
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SA凝胶后,将含包埋MGC
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803细胞的凝胶颗粒接种于液体培养基中,进行3D悬浮培养,得到细胞固定化材料。5.根据权利要求1至3任一项所述大规模生产外泌体的细胞固定化材料的制备方法,其特征在于按如下步骤制备:首先,在100 mL纯水中加入2 g SA、在搅拌条件下60℃加热2 h,再加...
【专利技术属性】
技术研发人员:崔大祥,彭家伟,王晴,梁辉,
申请(专利权)人:上海纳米技术及应用国家工程研究中心有限公司,
类型:发明
国别省市:
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