植物乳杆菌LactobacillusplantarumING1及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一株植物乳杆菌Lactobacillus plantarum ING1及其应用。该植物乳杆菌为革兰氏染色阳性杆菌，葡萄糖同型发酵，耐酸性强，在pH3.0可以弱生长，在pH3.5可正常生长，生长速率快，产酸能力强，MRS液体培养基培养20小时pH可降到4.0以下，生育温域宽，5

【技术实现步骤摘要】
植物乳杆菌Lactobacillus plantarum ING1及其应用


[0001]本专利技术涉及一株植物乳杆菌Lactobacillus plantarum ING1及其应用。

技术介绍

[0002]饲草产业作为草地畜牧业发展的重要物质基础，是高效养殖中不可或缺的一环。我国草地自然资源丰富，是畜牧业健康稳定发展的根本，是肉羊业、肉牛业和奶牛业持续繁荣发展的基本保障。在保护天然草地的前提下，合理开发利用牧草资源，拓展饲料来源，丰富饲料种类，是缓解饲草供求不均衡，实现天然草地可持续利用的重要手段。干草流通便利，是世界范围内应用最广的饲草产品之一，但天然草地牧草主产区的牧草收获加工通常正值雨季，雨热同期的环境条件导致干草调制的难度增加，雨淋等原因造成的营养物质流失通常可占干物质总量的20~30%，严重影响牧草的饲用价值。显然，传统干草调制技术在利用和储藏上具有局限性，已无法满足当前天然草地生态保护和现代畜牧业可持续发展的迫切需求。
[0003]同鲜草或干草不同，青贮饲料具有独特的营养价值和理化特性，青贮能够最大限度的保存原料中的营养成分，适口性好，是草食家畜日粮的重要组成部分。青贮饲料中易发酵碳水化合物和真蛋白质含量通常较低，有机酸和非蛋白氮的含量较高，加之较短的饲料长度等独特优势，可以有效增加家畜的干物质采食量；此外，青贮饲料在营养成分、消化率和代谢能等方面与原料更为接近，能提高营养物质的吸收利用效率，有益于家畜机体健康。同时，青贮饲料较低的pH值不利于病菌和寄生虫的生命活动，降低了饲料中病虫害对家畜生长发育的不良影响。天然草地牧草群落结构复杂，不仅包括家畜喜食的豆科和禾本科牧草，还包括有特殊气味或质地粗硬的牧草。青贮可以改善天然草地牧草的气味和质地，并有效防除针茅属牧草对家畜的伤害，从而扩大饲料来源。天然草地牧草刈割后直接青贮可以有效保存营养成分，提高消化率，延长储藏时间；同时，青贮饲料的调制和储藏不受气候条件限制，可为家畜所需青绿饲料的全年均衡供给提供保障。青贮不仅最大限度地保存了天然草地牧草的营养价值，也解决了牧草刈割后补偿生长和安全越冬等问题，可以有效保护天然草地，有助于实现天然草地的可持续发展，生态效益、经济效益和社会效益显著。
[0004]但是现有技术在青贮饲料的调制过程中，有害微生物的生长和繁殖会导致营养物质的降解流失，影响青贮饲料品质。天然草地牧草的草种较为复杂，且具有“三低”的特性，即水分含量低、可溶性碳水化合物含量低、天然附着的乳酸菌数量低。天然草地牧草青贮调制难度较大，目前仍缺乏高效的专用青贮添加剂。
[0005]乳酸菌为革兰氏阳性菌，抗过氧化氢酶、厌氧、无孢子、无运动性，被认为是青贮发酵的关键启动因子而被广泛应用于青贮饲料生产加工。乳酸菌按发酵类型可分为同型发酵和异型发酵。同型、异型乳酸发酵参与发酵的微生物类群不同，其中同型乳酸发酵产物只含乳酸，产物理论发酵率高。同型发酵乳酸菌利用可溶性碳水化合物产生以乳酸为主的有机酸，降低青贮饲料pH值来抑制梭菌和霉菌等腐败菌的生长，延长青贮饲料的保存时间。但天然草地牧草群落结构复杂，水分含量低，植物表面附着乳酸菌数量少，可溶性碳水化合物含
量低和缓冲能值高等系列问题使乳酸菌添加剂难以有效发挥其能力，青贮效果不佳。因此，筛选适用于天然草地牧草青贮专用添加剂是解决天然草地牧草青贮的关键。

技术实现思路

[0006]为了克服现有技术中的问题，本专利技术的目的在于提供一株植物乳杆菌Lactobacillus plantarum ING1及其应用。
[0007]本专利技术植物乳杆菌Lactobacillus plantarum ING1的生物学特性为革兰氏染色阳性杆菌，葡萄糖同型发酵，耐酸性强（在pH3.0可以弱生长，在pH3.5可正常生长），生长速率快（MRS液体培养基培养20小时pH可降到4.0以下），生育温域宽（5
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50℃可生长繁殖）。2021年6月15日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC），北京市朝阳区北辰西路1号院3号，CGMCC No. 22706。
[0008]本专利技术植物乳杆菌Lactobacillus plantarum ING1的获得方法是：富集培养该菌，稀释平板法筛选获得：将装有500 mL蒸馏水的锥形瓶、装有4.5 mL蒸馏水的试管、MRS固体培养基及平板灭菌，灭菌后将MRS培养基倒入平板内。无菌条件下，取10g天然牧草青贮样品于拍打袋内，再加入90 mL灭菌蒸馏水振荡均匀，使其最终浓度为10
‑1，然后取500 uL该液体加入含有4500 uL灭菌蒸馏水的试管振荡使其均匀，连续稀释，使其浓度分别为10
‑2，10
‑3，10
‑4和10
‑5，取10
‑1，10
‑3和10
‑5液体20 uL反复进行平板划线分离，直至得到单菌落，将其单菌落用无菌接种针接种到含有20%甘油MRS液体培养基的2 mL冻存管内，于
‑
80℃保存备用。其中MRS培养基为蛋白胨 (Proteose peptone NO. 3) 10.0 g；牛肉膏 (Beef Extract) 10.0 g；酵母提取物 (Yeast Extract) 5.0 g；葡萄糖 (Dextrose) 20.0 g；吐温 (Polysorbate 80) 1.0 g；柠檬酸铵 (Ammonium Citrate) 2.0 g；醋酸钠 (Sodium Acetate) 5.0 g；硫酸镁 (Magnesium sulfate) 0.1 g；硫酸锰(Manganese Sulfate) 0.05 g；磷酸氢二钾 (Dipotassium Phosphate) 2.0 g；蒸馏水 (Distilled Water) 1000 Ml；固体培养基加15 g/L 琼脂(Agar)，121 ℃，灭菌15 min。
[0009]本专利技术用生理生化方法筛选出生长速度快、产酸能力强、耐酸能力强及生育温域宽的植物乳杆菌Lactobacillus plantarum ING1。提取植物乳杆菌Lactobacillus plantarum ING1全长基因，然后运用PCR扩增引物27f(5'
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AGAGTTTGATCCTGGCTCAG
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3')和1492r(5'
‑
TACGGCTACCTTGTTACGACT
‑
3')，扩增出16S rRNA基因，利用BLAST(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST)比对寻找已知分类地位中与待测乳酸菌菌株基因序列同源性最高的菌种。从GenBank中选取已知乳酸菌菌株的基因序列，将其与待测乳酸菌菌株的16S rRNA基因序列进行比较，确定其相似种。最后，将筛选出的菌株及对照菌（市售商业菌剂）分别添加到不同牧草中，开封后分析青贮饲料营养品质和发酵品质，并计算微生物数量，与空白组和对照菌进行对比，确认Lactobacillus planta本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一株植物乳杆菌Lactobacillus plantarum ING1，其特征在于，为革兰氏染色阳性杆菌，葡萄糖同型发酵，耐酸性强，在pH3.0弱生长，在pH3.5正常生长，生长速率快，MRS液体培养基培养20小时pH可降到4.0以下，生育温域宽，5
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50℃可生长繁殖；2021年6月15日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC），北京市朝阳区北辰西路1号院3号，CGMCC No. 22706。2.一种根据...

【专利技术属性】
技术研发人员：贾玉山，尤思涵，格根图，都帅，包健，李宇宇，司强，袁宁，刘明健，王宇，
申请(专利权)人：内蒙古农业大学，
类型：发明
国别省市：