一种诊断脊髓损伤以及筛选脊髓损伤治疗药物的方法技术

本发明专利技术应用二代高通量测序技术对创伤性脊髓损伤组织进行了全基因组真核RNA测序，完成了创伤性脊髓损伤实验动物高压氧治疗前后的基因表达谱的筛选和对比分析，将高压氧治疗组分别与假手术组和损伤组的基因表达谱进行对比分析，发现6个RNA在三个实验组相比中都具有统计学差异，上述基因可以用于脊髓损伤快速诊断方法以及筛选脊髓损伤药物，对于脊髓损伤的诊断和治疗具有重要意义。的诊断和治疗具有重要意义。

【技术实现步骤摘要】
一种诊断脊髓损伤以及筛选脊髓损伤治疗药物的方法


[0001]本专利技术涉及生物技术
，具体涉及一种诊断脊髓损伤以及筛选治疗脊髓损伤药物的方法。

技术介绍

[0002]脊髓损伤致残率高、医疗花费高，给患者本人和家庭带来沉重的心理和经济负担，迄今为止，尚缺乏有效的治疗手段。随着社会经济尤其是交通、建筑业的发展，脊髓损伤的发病率在逐年增高。据统计，全球创伤性脊髓损伤发生率为每10万人10.5例，也就是说全球每年有768473例新增病例，我国脊髓损伤人数则已突破百万，并以每年12万的速度剧增。
[0003]脊髓损伤分为原发性和继发性损伤。原发性损伤是暴力直接或间接作用于脊髓组织，造成的组织破坏、出血和坏死。继发性损伤是在原发性损伤发生数分钟后，发生局部组织水肿、缺血缺氧、炎症反应、细胞凋亡等一系列“瀑布”式生物化学反应，导致持续数天至数周的继发性细胞损伤、死亡，其损伤程度是影响脊髓损伤预后的主要因素。由于原发性损伤不可控，因此如何减轻继发性损伤已成为目前脊髓损伤治疗的焦点和迫在眉睫的任务。
[0004]高压氧治疗是指在高于海平面压力(1.0个大气压ATA)的治疗舱内间断呼吸100％氧气的干预方法。作为一种安全无创的物理治疗方式，自19世纪70年代以来，国内外学者就陆续报道高压氧治疗能够促进脊髓损伤患者的神经功能恢复，证实了其在临床脊髓损伤患者中的治疗效果。
[0005]近年，国内外学者进行了大量的动物实验研究，证实了高压氧治疗通过提高血氧分压、增加毛细血管血氧弥散半径、改善局部微环境、减轻水肿、抑制脂质过氧化、减轻炎症反应、减少细胞凋亡、促进血管新生等减轻继发性脊髓损伤，促进神经功能恢复。
[0006]应用二代高通量测序技术对创伤性脊髓损伤组织进行了全基因组真核RNA测序，完成了创伤性脊髓损伤实验动物高压氧治疗前后的基因表达谱的筛选和对比分析，将高压氧治疗组分别与假手术组和损伤组的基因表达谱进行对比分析，发现6个RNA在三个实验组相比中都具有统计学差异，上述基因可以用于脊髓损伤快速诊断方法以及筛选脊髓损伤药物，对于脊髓损伤的诊断和治疗具有重要意义。

技术实现思路

[0007]本专利技术的目的在于克服上述技术问题，提供一种全面的诊断脊髓损伤的基因组合物、试剂盒以及基于基因表达量改变筛选治疗脊髓损伤药物的试剂盒。
[0008]为实现上述目的，本专利技术采用的技术方案为：
[0009]一种脊髓损伤的诊断基因标志物，所述标志物包括Hmox1、Igfbp3、Adam8、Tnc、Ftl1和Lgals1基因。
[0010]另一方面，提供一种脊髓损伤的诊断试剂盒，所述试剂盒包含检测Hmox1、Igfbp3、Adam8、Tnc、Ftl1和Lgals1基因或蛋白表达量的试剂。
[0011]进一步的作为标志物为基因组合物。
[0012]优选地，试剂包含检测上述基因的引物。
[0013]进一步的，所述引物序列为
[0014][0015][0016]另一方面，提供所述标志物以及试剂盒的用途，所述用途是制备诊断脊髓损伤试剂或试剂盒的用途。
[0017]另一方面，提供一种筛选脊椎损伤有效药物的试剂盒，所述试剂盒包含检测Hmox1、Igfbp3、Adam8、Tnc、Ftl1和Lgals1基因或蛋白表达量的试剂。
[0018]所述检测表达量的试剂包括引物，所述引物序列为
[0019][0020]另一方面，所述试剂盒用于制备筛选脊椎损伤有效药物的试剂或试剂盒。
[0021]与现有技术相比，本专利技术鉴定出一组能够快速鉴定脊髓损伤的标志物。本专利技术应用二代高通量测序技术对创伤性脊髓损伤组织进行了全基因组真核RNA测序，完成了创伤
性脊髓损伤实验动物高压氧治疗前后的基因表达谱的筛选和对比分析，将高压氧治疗组分别与假手术组和损伤组的基因表达谱进行对比分析，发现6个基因在三个实验组相比中都具有统计学差异。高压氧是目前治疗脊髓损伤的有效手段，本专利技术通过对高压氧治疗前后表达量变化基因的筛选获得6个基因可以进一步用于创伤性脊髓损伤治疗药物的筛选，当某些化学成分表现出与高压氧治疗类似的6个基金表达量改变时，其极有可能成为治疗创伤性脊髓损伤的药物。
附图说明
[0022]图1是本专利技术实施2中SH假手术组脊髓组织HE染色结果。
[0023]图2是本专利技术实施2中SCI脊髓损伤组脊髓组织HE染色结果。
[0024]图3是本专利技术实施2中HBO高压氧治疗组脊髓组织HE染色结果。
[0025]图4是本专利技术实施2组织病理学评分结果。
[0026]图5是本专利技术实施3高压氧治疗后肢运动功能评估结果。
具体实施方式
[0027]为使本领域的技术人员更好地理解本专利技术的技术方案，以下实施例对本专利技术的作进一步详细描述，以下实施例仅用于说明专利技术，但不用来限制本专利技术的范围。
[0028]实施例1
[0029]应用二代高通量测序技术对创伤性脊髓损伤组织进行全基因组真核RNA测序。
[0030]1、模型制作
[0031]C57BL/6小鼠采用改良Allen
’
s法制作脊髓撞击损伤模型：戊巴比妥腹腔注射麻醉实验小鼠(75mg/kg)，T10棘突为中心术区，切除T10棘突及椎板，显露硬脊膜，使用MASCIS脊髓损伤撞击器造成脊髓损伤(10g，6.25mm)。术毕逐层缝合伤口。
[0032]撞击成功标志为：脊髓组织水肿，出血，硬脊膜完整膨隆呈紫红色；小鼠出现摆尾反射，双下肢回缩扑动，迟缓性瘫痪。
[0033]假手术组小鼠仅暴露脊髓后逐层缝合伤口，不接受脊髓撞击。
[0034]2、高压氧治疗
[0035]上述高压氧组实验小鼠在造模后6h置入高压氧舱进行高压氧治疗，纯氧洗舱5min，升压10min，稳压于2ATA，持续吸氧60min，减压10min，高压氧治疗时保持持续通风，氧流量维持于8～10L/min，舱内氧浓度在95％以上，1次/d。
[0036]3、原始数据
[0037]RNA测序数据
[0038]纳入3组实验小鼠，分别为SH假手术组(组1)，假手术组即实验小鼠仅暴露脊髓组织，未造成脊髓损伤，术后未进行高压氧治疗；SCI脊髓损伤组(组2)，脊髓损伤组即采用改良Allen
’
s法造成脊髓撞击损伤，术后未进行高压氧治疗；HBO高压氧治疗组(组3)，高压氧治疗组即造成脊髓撞击伤后，进行高压氧治疗。每个实验组随机抽取3只小鼠脊髓组织进行RNA测序。结果见表1。
[0039]表1 RNA测序结果分析
[0040][0041]注：HBO高压氧治疗组(组3)，SCI脊髓损伤组(组2)，SH假手术组(组1)，p<0.05为有统计学意义。Fc，fold change(差异倍数)。
[0042]qPCR检测的试剂、仪器和原始数据：
[0043]①
试剂：Trizol：美国Invitrogen公司；本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种脊髓损伤的诊断标志物，所述标志物包括Hmox1、Igfbp3、Adam8、Tnc、Ftl1和Lgals1基因。2.一种脊髓损伤的诊断试剂盒，所述试剂盒包含检测如权利要求1所述标志物基因或蛋白表达量的试剂。3.如权利要求2所述诊断试剂盒，所述试剂包含检测上述基因的引物。4.如权利要求3所述诊断试剂盒，所述引物序列为：5.权利要求1所述诊断标志物以及权利要求2
‑
4所述试剂盒在制备诊断脊髓损伤试剂或试剂盒中的用途。6.一种筛选脊椎损伤有效药物...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘雪华，苏庆军，杨晶，梁芳，孙振程，
申请(专利权)人：首都医科大学附属北京朝阳医院，
类型：发明
国别省市：