医疗用途、方法和用途技术

描述了抑制微小RNA

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】Opin Clin Nutr Metab Care.)》2012；15:641
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648)。
[0007]此外，维生素E或维生素E与其它药物的组合对经活检证实的NASH患者的肝损伤的影响已在一些小型研究中进行了调查，但观察到了相互矛盾的结果(Sanyal AJ等人,“用于非酒精性脂肪性肝炎的吡格列酮、维生素E或安慰剂(Pioglitazone,vitamin E,or placebo for nonalcoholic steatohepatitis.)”《新英格兰医学杂志(N Engl J Med.)》2010；362:1675
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1685；Harrison SA等人,“维生素E和维生素C治疗可改善非酒精性脂肪性肝炎患者的纤维化(Vitamin E and vitamin C treatment improves fibrosis in patients with nonalcoholic steatohepatitis.)”《美国胃肠病学杂志(Am J Gastroenterol.)》2003；98:2485
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2490；和Dufour JF等人,“熊去氧胆酸与维生素E在非酒精性脂肪性肝炎中的随机安慰剂对照试验(Randomized placebo
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controlled trial of ursodeoxycholic acid with vitamin E in nonalcoholic steatohepatitis.)”《临床胃肠病学与肝病学(Clin Gastroenterol Hepatol.)》2006；4:1537
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1543)。
[0008]最近，两项大型多中心随机对照试验调查了维生素E在NAFLD受试者中的功效。在“PIVENS”试验中，在患有侵袭性NASH且没有糖尿病或肝硬化的成年患者中，与吡格列酮或安慰剂治疗组相比，高剂量维生素E补充剂(800UI q.d.)显著改善NASH组织学；然而，据报道，胰岛素抵抗和血浆甘油三酯水平增加(Sanyal AJ等人,2010)。相比之下，“TONIC”试验发现，在实现儿童NAFLD患者ALT水平持续降低的主要结果方面，维生素E和二甲双胍均不优于安慰剂(Lavine JE等人,“维生素E或二甲双胍治疗儿童和青少年非酒精性脂肪性肝病的效果：TONIC随机对照试验(Effect of vitamin E or metformin for treatment of nonalcoholic fatty liver disease in children and adolescents:the TONIC randomized controlled trial.)”《美国医学协会杂志(JAMA.)》2011；305:1659
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1668)。
[0009]因此，尽管有一些关于补充维生素E在NAFLD/NASH中的功效的报道，但对其安全性存在担忧。此外，在将抗氧化剂的作用解释为完全或甚至主要是由于化合物的抗氧化性质时，需要谨慎。一个相关的问题是即使是公认的抗氧化剂化合物的非标准剂量。如维生素E、维生素C和辅酶Q等药剂发挥作用，因为它们是单电子受体，但也可以充当具有高反应性的单电子供体。在高浓度下，维生素C和辅酶Q都可以成为促氧化剂，并有可能导致肝损伤(Abudu N等人,“人体动脉硬化中的维生素，重点强调维生素C和维生素E(Vitamins in human arteriosclerosis with emphasis on vitamin C and vitamin E.)”《临床化学学报(Clin Chim Acta.)》2004；339:11
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25)。
[0010]缺乏有益影响，并且在一些情况下，观察到有害影响突出了新治疗方法的重要性。此外，目前的肝脏疾病诊断涉及侵入性技术，并且因此可以诊断氧化应激并鉴定易患胰岛素抵抗、2型糖尿病、NASH和肝细胞癌的患者的非侵入性技术将是有益的。

技术实现思路

[0011]在此背景下，专利技术人惊奇地发现，肝脏中特定的微小RNA(miRNA)，即miR
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144的沉默通过增加抗氧化反应来降低肝脏中的氧化应激。因此，专利技术人的发现鉴定了一种用于肝脏疾病和/或肝脏病状的新型疗法。靶向内源性抗氧化反应(而不是使用最终阻断内源性反应的外源性抗氧化剂)为肝脏胰岛素抵抗和NASH提供了一种有吸引力的疗法。
[0012]此外，专利技术人惊奇地发现，可以容易地测量这种miRNA，用于诊断易患肝脏疾病和/
或肝脏病状(如NASH)的肝脏氧化应激。
[0013]因此，在第一方面，本专利技术提供了一种抑制微小RNA
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144(miR
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144)的药剂，所述药剂用于在受试者中治疗或预防其中氧化应激是促成因素的肝脏疾病和/或肝脏病状。
[0014]在第二方面，本专利技术提供了一种抑制微小RNA
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144(miR
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144)的药剂在制备用于在受试者中治疗或预防其中氧化应激是促成因素的肝脏疾病和/或肝脏病状的药物中的用途。
[0015]在第三方面，本专利技术提供了一种用于在受试者中治疗或预防其中氧化应激是促成因素的肝脏疾病和/或肝脏病状的方法，其中所述方法包括向所述受试者施用抑制微小RNA
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144(miR
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144)的药剂。
[0016]如本文所述，专利技术人惊奇地发现，肝脏中的核因子红细胞2相关因子2(NRF2)受由肝脏巨噬细胞并在肥胖胰岛素抵抗患者血液中高水平表达的miRNA(miR
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144)调节。肥胖小鼠肝脏巨噬细胞中miR
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144的特异性沉默增加了NRF2蛋白质水平，从而导致巨噬细胞和肝细胞释放的ROS减少，并且氧化应激和葡萄糖耐受性总体降低。
[0017]如所附实例所述，抗氧化防御在肥胖胰岛素抵抗患者的肝脏中无效，但在苗条或肥胖的胰岛素敏感个体中有效。这是由于与健康对照组相比，肥胖胰岛素抵抗人类和小鼠的肝脏中的核因子红细胞2相关因子2(NRF2)蛋白质水平显著降低。
[0018]核因子红细胞2相关因子2(NRF2；也被称为“NFE2L2”和“Nrf2”)是一种碱性亮氨酸拉链转录因子和氧化还原稳态的主要调节剂。在正常生理条件下，NRF2通过与Kelch样ECH相关蛋白1(KEAP1)的结合而靶向蛋白酶体降解。相反，在氧化应激下，这种复合物解离，并且NRF2转移到细胞核，在所述细胞核处其与抗氧化反应元件(ARE)结合，从而驱动抗氧化反应。
[0019]miRNA是小的(通常为17个到27个核苷酸)非编码RNA，其通过影响mRNA的稳定性和翻译，参与多细胞生物中基因表达的转录后调节。miRNA各自由较长的前体RNA分子(“前体miRNA”)加工而成。前体miRNA是从非蛋白质编码基因转录而来的。前体可以具有至少50个、60个、66个、70个、本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种抑制微小RNA
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144(miR
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144)的药剂，所述药剂用于在受试者中治疗或预防其中氧化应激是促成因素的肝脏疾病和/或肝脏病状。2.一种抑制微小RNA
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144(miR
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144)的药剂在制备用于在受试者中治疗或预防其中氧化应激是促成因素的肝脏疾病和/或肝脏病状的药物中的用途。3.一种用于在受试者中治疗或预防其中氧化应激是促成因素的肝脏疾病和/或肝脏病状的方法，其中所述方法包括向所述受试者施用抑制微小RNA
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144(miR
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144)的药剂。4.根据权利要求1所述的供使用的药剂、根据权利要求2所述的用途或根据权利要求3所述的方法，其中所述药剂降低肝脏细胞中的miR
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144表达和/或活性。5.根据权利要求1到4中任一项所述的供使用的药剂、用途或方法，其中所述药剂被递送至肝脏细胞。6.根据权利要求4到5中任一项所述的供使用的药剂、用途或方法，其中所述肝脏细胞是吞噬性肝脏细胞、肝细胞、内皮细胞和/或嗜中性粒细胞。7.根据权利要求6所述的供使用的药剂、用途或方法，其中所述吞噬性肝脏细胞是肝脏巨噬细胞。8.根据权利要求5到7中任一项所述的供使用的药剂、用途或方法，其中将所述药剂递送至肝脏细胞导致肝脏细胞，例如吞噬细胞、肝细胞、内皮细胞和/或嗜中性粒细胞中的miR
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144表达和/或活性降低。9.根据权利要求1到8中任一项所述的供使用的药剂、用途或方法，其中所述氧化应激是由肥胖症、酒精、环境污染物和/或如抗炎药、抗镇痛药、抗癌药和/或抗抑郁药等药物诱导的。10.根据权利要求1到9中任一项所述的供使用的药剂、用途或方法，其中所述氧化应激是肝脏细胞中的氧化应激。11.根据权利要求10所述的供使用的药剂、用途或方法，其中肝脏中的所述氧化应激的特征在于以下至少一项：a)增加的脂质过氧化；b)活性氧(ROS)增加和/或积聚；c)降低的核因子红细胞2相关因子2(NRF2)活性和/或蛋白质水平；和/或d)增加的miR
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144的表达和/或活性。12.根据权利要求1到11中任一项所述的供使用的药剂、用途或方法，其中所述其中氧化应激是促成因素的肝脏疾病和/或肝脏病状选自包括以下的组：非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)、纤维化、肝硬化、肝细胞癌(HCC)和/或由酒精、环境污染物和/或如抗炎药、抗镇痛药、抗癌药和/或抗抑郁药等药物诱导的肝损伤。13.根据权利要求1到12中任一项所述的供使用的药剂、用途或方法，其中miR
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144在肝脏细胞中介导以下至少一项：i.NRF2活性和/或蛋白质水平；ii.细胞外ROS的产生；iii.GATA4磷酸化和/或活性；iv.细胞内糖原的水平；以及v.内源性抗氧化反应。
14.根据权利要求1到13中任一项所述的供使用的药剂、用途或方法，其中miR
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144表达和/或活性的降低在肝脏细胞中导致以下至少一项：i.NRF2活性和/或蛋白质水平增加；ii.细胞内ROS降低和/或ROS的释放降低；iii.GATA4的磷酸化和/或活性降低；iv.细胞内糖原的水平增加；以及v.内源性抗氧化反应恢复和/或增加。15.根据权利要求1到14中任一项所述的供使用的药剂、用途或方法，其中所述药剂选自包括以下的组：核酸分子和小分子。16.根据权利要求15所述的供使用的药剂、用途或方法，其中所述核酸分子选自包括以下的组：反义寡核苷酸和抑制性RNA分子。17.根据权利要求16到17中任一项所述的供使用的药剂、用途或方法，其中所述反义寡核苷酸包括与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3和/或SEQ ID NO:4中存在的核苷酸序列的至少一部分互补的核苷酸序列。18.根据权利要求16到17中任一项所述的供使用的药剂、用途或方法，其中所述反义寡核苷酸包括与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和/或SEQ ID NO:3至少50％互补的核苷酸序列。19.根据权利要求16到18中任一项所述的供使用的药剂、用途或方法，其中与miR
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144序列中存在的核苷酸序列的至少一部分互补的所述核苷酸序列的长度为15个、16个、17个、18个、19个、20个、20个、21个、22个或23个核苷酸。20.根据权利要求16到19中任一项所述的供使用的药剂、用途或方法，其中所述反义寡核苷酸包括与成熟miR
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144序列中存在的核苷酸序列的至少一部分互补的核苷酸序列。21.根据权利要求16到20中任一项所述的供使用的药剂、用途或方法，其中所述反义寡核苷酸包括与SEQ ID NO:4至少80％、85％、90％、95％或100％互补的核苷酸序列。22.根据权利要求16所述的供使用的药剂、用途或方法，其中所述抑制性RNA分子包括双链区，并且优选地，其中所述双链区包括与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3和/或SEQ ID NO:4中存在的核苷酸序列的至少一部分基本上相同和基本上互补的核苷酸序列。23.根据权利要求22所述的供使用的药剂、用途或方法，其中所述双链区包括与SEQ ID NO:1、SEQ ID No:2和/或SEQ ID NO:3中存在的核苷酸序列的至少一部分至少50％互补的核苷酸序列。24.根据权利要求22所述的供使用的药剂、用途或方法，其中所述双链区包括与成熟miR
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144序列基本上相同和基本上互补的核苷酸序列。25.根据权利要求22到24中任一项所述的供使用的药剂、用途或方法，其中所述双链区包括与SEQ ID NO:4至少80％、85％、90％、95％或100％互补的核苷酸序列。26.根据权利要求5到25中任一项所述的供使用的药...

【专利技术属性】
技术研发人员：M，
申请(专利权)人：V，
类型：发明
国别省市：