高效腐解液体菌肥及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种高效腐解液体菌肥及其制备方法，所述菌肥中包含枯草芽孢杆菌、玫瑰黄链霉菌、哈茨木霉、皮壳正青霉、嗜热毁丝霉、戊糖片球菌，有效活菌数≥1

【技术实现步骤摘要】
高效腐解液体菌肥及其制备方法和应用


[0001]本专利技术属于有机物料腐熟剂领域或液体菌肥领域，具体涉及一种高效腐解液体菌肥及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]因国家相关部委相继颁布了秸秆禁烧和资源化综合利用等政策，以秸秆还田为优先的模式得以快速发展。秸秆是纤维组分含量非常高的农副产物，其中难分解的大分子化学组分纤维素、半纤维素和木质素结构紧密复杂聚合度高、性质稳定具有较强的抗分解能力，导致在自然条件下的还田秸秆腐解速率缓慢，大量未充分腐解的秸秆会引发病虫害加剧、影响下茬作物生长等问题。利用自然界中的相关功能菌对秸秆进行生物转化，具有降解效率高、安全、无污染等特点。
[0003]目前，市面上的商用菌剂大多是由降解木质纤维素的功能菌复合而成，普遍存在系统稳定性差和效果不持久等问题。利用微生物对秸秆进行生物转化时，由于秸秆碳氮比较高，在秸秆碳转化过程中，微生物需要通过吸收氮素来维持其生长代谢，而菌剂通常喷洒于秸秆表面，可利用的氮素局限于秸秆氮的释放，对土壤中氮素的利用相对较难，造成菌剂施用后功能降解菌定殖弱的问题；另一方面，秸秆降解过程中功能降解菌会受到代谢产物积累引起的阻遏效应，由于缺乏木质纤维素中间代谢产物降解菌，容易导致秸秆碳转化过程的不平衡，进而难以持续发挥秸秆腐解功能。

技术实现思路

[0004]本专利技术主要针对上述秸秆菌剂组分中缺乏氮源以及木质纤维素中间产物代谢菌的问题，提供高效腐解液体菌肥的制备方法，一方面，菌肥液中已含有微生物生长代谢所需的速效和缓释氮源，施用时无需额外补充氮源就能有效提高秸秆的腐熟效率；另一方面，融合了不同菌株的多种代谢途径以及不同降解酶系上的互补，戊糖片球菌能够有效降解秸秆木质纤维素的中间代谢产物，如低分子寡聚糖、乳酸、乙醇等，解除代谢产物积累引起的阻遏效应。
[0005]为了解决上述技术问题，本专利技术的第一目的在于先提供一种高效腐解液体菌肥，其内含有可分泌纤维素酶和木聚糖酶的三种高效腐解菌：寡养单胞菌（Stenotrophomonas sp.WS6
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1）、无色杆菌（Achromobacter sp.WS6
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2）和戊糖片球菌（Pediococcus pentosaceus YC2），且菌肥中有效活菌数≥1
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109cfu/mL；所述寡养单胞菌（Stenotrophomonas sp.WS6
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1）、该菌株于2019年12月18日保藏在中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏地址：中国，武汉，武汉大学，保藏编号为：CCTCC No:M 20191060；所述无色杆菌（Achromobacter sp.WS6
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2）、该菌株于2019年12月18日保藏在中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏地址：中国，武汉，武汉大学，保藏编号为：CCTCC No:M 20191061；
所述戊糖片球菌（Pediococcus pentosaceus YC2）、该菌株于2019年12月18日保藏在中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏地址：中国，武汉，武汉大学，保藏编号为：CCTCC No:M 20191062。液体菌肥施用时无需额外补充氮源本专利技术提供的上述高效腐解液体菌肥进一步设置为，所述菌肥中含有皮壳正青霉，所述皮壳正青霉购自北京北纳创联生物技术研究院，皮壳正青霉的资源编号为BNCC146720。采用耐冷型皮壳正青霉，其代谢途径以及不同降解酶系上的互补，能有效解除代谢产物积累引起的阻遏效应，腐解速度快。
[0006]本专利技术提供的上述高效腐解液体菌肥进一步设置为，所述菌肥中还含有枯草芽孢杆菌、玫瑰黄链霉菌、哈茨木霉、嗜热毁丝霉中的一种或多种。
[0007]本专利技术提供的上述高效腐解液体菌肥更进一步设置为，所述菌肥剂中的枯草芽孢杆菌、玫瑰黄链霉菌、哈茨木霉、嗜热毁丝霉均购自北京北纳创联生物技术研究院，枯草芽孢杆菌的资源编号为BNCC188080、玫瑰黄链霉菌的资源编号为BNCC228869、哈茨木霉的资源编号为BNCC336568、嗜热毁丝霉的资源编号为BNCC186098。
[0008]本专利技术的第二目的在于提供一种高效腐解液体菌肥的制备方法，高效腐解液体菌肥的制备方法，包括如下步骤：步骤1，菌种活化按无菌操作从斜面保种培养基上取适量纯培养物，将寡养单胞菌、无色杆菌接种至LB固体平板；接种后的平板倒置平放于培养箱26~30
°
C温度下培养，待细菌长出单个菌落、真菌产孢子稳定且大小均匀；步骤2，种子培养在无菌条件下，将步骤1活化后的寡养单胞菌、无色杆菌用接种环挑取单个菌落，分别接种于LB液体培养基；各株菌接种后26~30
°
C、150r/min摇床振荡培养，培养时间根据各菌的生长曲线确定，获得对数生长中后期的菌株种子液；步骤3，扩大培养通过步骤2获得的种子液按10~20%（V/V）接种量转接于对应类型的液体培养基中，进行扩繁，根据各株菌的生长速率调整接菌和培养时间，以便在同一时间获得浓度基本一致的菌液，扩大培养后的菌液依然按无菌操作，进行离心浓缩；步骤4，混合发酵将步骤3菌株经过离心浓缩收集的菌体/孢子，用无菌水制成浓度一致的重悬，按照1:1比例混合，将混合菌液接种到液体发酵培养基中，室温下自然发酵10d左右，得到性质功能稳定、有效活菌数≥1
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109cfu/mL的液体菌肥。
[0009]本专利技术提供的上述高效腐解液体菌肥制备方法进一步设置为，所述步骤1，菌种活化中还包括按无菌操作从斜面保种培养基上取适量纯培养物，将枯草芽孢杆菌接种至LB固体平板；哈茨木霉、皮壳正青霉、嗜热毁丝霉接种至PDA固体平板；玫瑰黄链霉菌接种至高氏1号固体平板；乳酸菌接种至基础固体培养基，接种后的平板倒置平放于培养箱26~30
°
C温度下培养，待细菌长出单个菌落、真菌产孢子稳定且大小均匀。
[0010]本专利技术提供的上述高效腐解液体菌肥制备方法进一步设置为，所述步骤2种子培养中还包括在无菌条件下，将步骤1活化后的枯草芽孢杆菌用接种环挑取单个菌落，接种于LB液体培养基；哈茨木霉、皮壳正青霉、嗜热毁丝霉固体平板中加少量无菌水，接种环轻轻
刮取菌苔以洗下孢子，然后用无菌棉过滤去菌丝，再接种至PDA液体培养基；玫瑰黄链霉菌接种至含有玻璃珠的高氏1号液体培养基；乳酸菌接种至MRS液体培养基；各株菌接种后26~30
°
C、150r/min摇床振荡培养，培养时间根据各菌的生长曲线确定，获得对数生长中后期的菌株种子液。
[0011]本专利技术提供的上述高效腐解液体菌肥制备方法更进一步设置为，LB液体培养基：蛋白胨10g、牛肉膏10g、氯化钠5g，蒸馏水1000mL，pH6.5~7，配制固体培养基时添加琼脂20g；PDA培养基：200g去皮土豆煮汁1000ml、蔗糖20g、磷酸二氢钾3g、硫酸镁1.5g、维生素B1 10mg，pH自然；配制固体培养基时添加琼脂20g；高氏1号培养基：可溶性淀粉20 g、硝酸钾本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.高效腐解液体菌肥，其特征在于，其内含有可分泌纤维素酶和木聚糖酶的三种高效腐解菌：寡养单胞菌（Stenotrophomonas sp.WS6
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1）、无色杆菌（Achromobacter sp.WS6
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2）和戊糖片球菌（Pediococcus pentosaceus YC2），且菌肥中有效活菌数≥1
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109cfu/mL；所述寡养单胞菌（Stenotrophomonas sp.WS6
‑
1）、该菌株于2019年12月18日保藏在中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为：CCTCC No.20191060；所述无色杆菌（Achromobacter sp.WS6
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2）、该菌株于2019年12月18日保藏在中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为：CCTCC No.20191061；所述戊糖片球菌（Pediococcus pentosaceus YC2）、该菌株于2019年12月18日保藏在中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为：CCTCC No.20191062。2.如权利要求1所述的高效腐解液体菌肥，其特征在于，所述菌肥中含有皮壳正青霉，所述皮壳正青霉购自北京北纳创联生物技术研究院，皮壳正青霉的资源编号为BNCC146720。3.如权利要求1所述的高效腐解液体菌肥，其特征在于，所述菌肥中还含有枯草芽孢杆菌、玫瑰黄链霉菌、哈茨木霉、嗜热毁丝霉中的一种或多种。4.根据权利要求3所述的高效腐解液体菌肥，其特征在于，所述菌肥剂中的枯草芽孢杆菌、玫瑰黄链霉菌、哈茨木霉、嗜热毁丝霉均购自北京北纳创联生物技术研究院，枯草芽孢杆菌的资源编号为BNCC188080、玫瑰黄链霉菌的资源编号为BNCC228869、哈茨木霉的资源编号为BNCC336568、嗜热毁丝霉的资源编号为BNCC186098。5.高效腐解液体菌肥的制备方法，其特征在于，包括如下步骤 ：步骤1，菌种活化按无菌操作从斜面保种培养基上取适量纯培养物，将寡养单胞菌、无色杆菌接种至LB固体平板；接种后的平板倒置平放于培养箱26~30
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C温度下培养，待细菌长出单个菌落、真菌产孢子稳定且大小均匀；步骤2，种子培养在无菌条件下，将步骤1活化后的寡养单胞菌、无色杆菌用接种环挑取单个菌落，分别接种于LB液体培养基；各株菌接种后26~30
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C、150r/min摇床振荡培养，培养时间根据各菌的生长曲线确定，获得对数生长中后期的菌株种子液；步骤3，扩大培养通过步骤2获得的种子液按10~20%（V/V）接种量转接于对应类型的...

【专利技术属性】
技术研发人员：苏瑶，杨艳华，贾生强，沈阿林，
申请(专利权)人：浙江省农业科学院，
类型：发明
国别省市：