cPLA2e诱导剂及其用途制造技术

本发明专利技术涉及cPLA2e诱导剂和cPLA2e诱导剂作为药物的用途，特别是用于治疗认知障碍和/或与认知障碍相关的疾病，例如痴呆，更具体地与年龄相关的痴呆和/或阿尔茨海默病。与年龄相关的痴呆和/或阿尔茨海默病。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】cPLA2e诱导剂及其用途


[0001]本专利技术涉及cPLA2e诱导剂以及cPLA2e诱导剂的以下用途：用作药物，更特别地用于治疗认知障碍和/或与认知障碍相关的疾病，例如痴呆，更具体地年龄相关的痴呆和/或阿尔茨海默病。

技术介绍

[0002]轻度认知障碍的特征是在记忆、语言和/或其他不干扰个人日常生活的基本认知功能上有缺陷。这种病症通常会向痴呆发展，痴呆的特征是认知能力整体恶化到确实会干扰日常生活的程度。
[0003]阿尔茨海默病(Alzheimer
’
s diease，AD)是现在老年痴呆的主要形式，全世界约5000万人受到影响。AD中发生的进行性和不可逆的认知障碍和记忆丧失，加上Aβ肽聚集体和神经原纤维缠结(Nerofibrillary tangle，NFT)的存在，构成了该疾病的主要标志。
[0004]到目前为止，大多数针对AD尝试的疗法都集中于将这两种组织病理学特征之一、尤其是Aβ水平作为目标。然而，AD试验的高失败率(超过99％)以及与该疾病相关的高成本使得研究AD以寻找新疗法为目标至关重要。
[0005]研究AD变得越来越复杂，因为有时经典AD标志物的出现与痴呆的症状之间不一致。在几项纵向研究中，已在认知正常的老年对象的大脑中观察到明显的AD病变。这些发现表明，经典的AD标志不足以产生痴呆，并为研究这种AD能复原的患者以寻找可能的AD治疗新目标开辟了可能性。
[0006]认知障碍是一种与大量脑部疾病相关的病症。脑部疾病可能有多种原因，例如退行性病症、遗传、外伤、感染、营养不良等。例如，认知障碍可能与衰老和/或神经退行性疾病相关，例如阿尔茨海默病、帕金森病、亨廷顿病、肌萎缩侧索硬化症(Amyotrophic Lateral Sclerosis，ALS)、精神病、帕金森病精神病、阿尔茨海默病精神病、路易体痴呆(Lewy
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body dementia)、朊病毒神经退行性疾病如克罗伊茨费尔德
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雅各布病(Creutzfeld
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Jacob disease)和库鲁病(kuru disease)、皮质基底节变性、额颞叶变性、多发性硬化、正常颅压脑积水、器质性慢性脑综合征、皮克病(Pick's disease)、进行性核上性麻痹、或老年性痴呆。认知障碍也可能具有先天基础，例如普拉德
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威利综合征(Prader
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Willi syndrome)、唐氏综合征、脆性X综合征、安格曼综合征(Angelman syndrome)和自闭症谱系疾病。认知障碍也可能与脑外伤相关，例如慢性硬膜下血肿、脑震荡、中风、脑出血，或与其他脑损伤相关，例如感染(如脑炎、脑膜炎和败血症)或药物中毒或滥用引起的脑损伤。认知障碍也可能与损害或以其他方式影响中枢神经系统正常功能的其他病症有关，包括睡眠剥夺、精神障碍如焦虑症、解离性障碍、情绪障碍、精神分裂症、精神病药物治疗、多巴胺激动剂治疗以及躯体形式和人为障碍；它也可能与周围神经系统的病症(如慢性疼痛)相关。在某些情况下，认知障碍的原因可能未知或不确定。
[0007]认知障碍可以通过多种方式表现出来，例如学习和/或记忆方面的缺陷，包括但不限于注意力、信息获取、信息处理、工作记忆、短期记忆、长期记忆、顺行记忆、逆行记忆、记
忆检索、辨别学习、决策、语言检索、抑制反应控制、注意定势转移、延迟强化学习、逆转学习、自愿行为的时间整合，以及表达对其周围环境和自我照顾的兴趣。认知障碍的特征可能是记忆、认知、推理、执行功能、计划、判断和情绪稳定性的进行性丧失。
[0008]尽管已经取得了许多进展，但与脑部疾病相关的认知障碍的治疗仍然在很大程度上不足。对于诸如亨廷顿病、帕金森病、肌萎缩侧索硬化症、阿尔茨海默病、普拉德
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威利综合征、路易体痴呆等疾病，治疗可能有限或不可用。需要有另外的治疗选择来治疗与脑部疾病相关的认知障碍。

技术实现思路

[0009]现在，专利技术人惊奇地公开了用AAV2/9
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mPLA2G4E(一种编码cPLA2e的病毒载体)治疗介导海马PLA2G4E(也称为胞质磷脂酶A2ε(cPLA2e)的过表达，在立体定向注射治疗后两个月显著挽救了老龄APP/PS1小鼠的空间记忆障碍；并且它还改善了立体定向注射治疗后三个月时老龄C57BL/6/SJL WT小鼠的记忆力。
[0010]因此，在第一方面，本专利技术涉及包含编码胞质磷脂酶A2ε(cPLA2e)的核苷酸序列的核酸构建体。
[0011]在所述核酸构建体的具体实施方案中，cPLA2e是人cPLA2e；通常是SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：3的人cPLA2e，或相对于人cPLA2e SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：3具有至少70％序列同一性的人变体cPLA2e。
[0012]在所述核酸构建体的更具体的实施方案中，编码cPLA2e的核苷酸序列是SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：4。
[0013]在具体实施方案中，所述核酸构建体还包含与编码cPLA2e的核苷酸序列可操作地连接的启动子。
[0014]在所述核酸构建体的更具体的实施方案中，与编码cPLA2e的核苷酸序列可操作地连接的启动子是神经元特异性启动子，特别地，所述启动子是SYN1启动子或杂合SYN1启动子。
[0015]在具体实施方案中，所述核酸构建体还包含聚腺苷酸化信号序列；特别是牛生长激素基因的聚腺苷酸化信号序列。
[0016]在具体实施方案中，所述核酸构建体包含5
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ITR和3
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ITR序列；优选腺相关病毒的5
’
ITR和3
’
ITR序列，更优选来自AAV2血清型的5
’
ITR和3
’
ITR序列。
[0017]在其他实施方案中，本专利技术的核酸构建体是RNA，特别是mRNA。
[0018]在一个方面，本专利技术涉及包含本专利技术的核酸构建体的载体；优选地，所述载体是病毒载体；更优选AAV载体。
[0019]在一个方面，本专利技术涉及包括本专利技术的核酸构建体的病毒颗粒。
[0020]在具体实施方案中，所述病毒颗粒选自AAV颗粒，优选包括选自由AAV2、AAV5、AAV9和AAV TT血清型组成的组中的衣壳蛋白。
[0021]在一方面，本专利技术还涉及包含本专利技术的核酸构建体或表达载体的宿主细胞。
[0022]在另一方面，本专利技术涉及生产病毒颗粒的方法，所述方法包括：
[0023]a)在培养基中培养包含本专利技术的核酸构建体或载体的包装细胞；和
[0024]b)从细胞培养物上清液和/或细胞内部收获病毒颗粒。
[0025]在另一方面，本专利技术涉及药物组合物，其包含：本专利技术的核酸构建体、载体或病毒颗粒或宿主细胞；和药学上可接受的载体或赋形剂。
[0026]在另一方面，本专利技术涉及本专利技术的核酸构建体、载本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.核酸构建体，所述核酸构建体包括编码胞质磷脂酶A2ε(cPLA2e)的核苷酸序列。2.权利要求1所述的核酸构建体，其中cPLA2e是人cPLA2e；通常是SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：3的人cPLA2e，或相对于人cPLA2e SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：3具有至少70％序列同一性的人变体cPLA2e。3.权利要求2所述的核酸构建体，其中编码cPLA2e的核苷酸序列是SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：4。4.权利要求1
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3中任一项所述的核酸构建体，其中所述核酸构建体还包括启动子，所述启动子与编码cPLA2e的核苷酸序列可操作地连接。5.权利要求4所述的核酸构建体，其中所述启动子是神经元特异性启动子；优选地，所述启动子是SYN1启动子或杂合SYN1启动子。6.权利要求1
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5中任一项所述的核酸构建体，其中所述核酸构建体还包括聚腺苷酸化信号序列；优选牛生长激素基因的聚腺苷酸化信号序列。7.权利要求1
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6中任一项所述的核酸构建体，其中所述核酸构建体还包括5'ITR和3'ITR序列；优选腺相关病毒的5
’
ITR和3
’
ITR序列，更优选来自AAV2血清型的5
’
ITR和3
’
ITR序列。8.包含权利要求1
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7中任一项所述的核酸构建体的载体。9.权利要求8所述的载体，其中，所述载体是病毒载体。10.权利要求9所述的载体，其中，所述载体是AAV载体。11.权利要求10所述的载体，其中所述载体包括权利要求2所述的核酸构建体。12.病毒颗粒，所述病毒颗粒包括权利要求1
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7中任一项所述的核酸构建体或权利要求8
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11所述的载体。13.权利要求12所述的病毒颗粒，其中所述病毒颗粒选自AAV颗粒；优选包括选自由AAV2、AAV5、AAV9和AAV TT血清型组成的组中的衣壳蛋白。14.宿主细胞，所述宿主细胞包括权利要求1
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7中任一项所述的核酸构建体或权利要求8
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11所述的载体。15.生产病毒颗粒的方法，所述方法包括：a)在培养基中培养包括权利要求1
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7中任一项所述的核酸构建体或权利要求8
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【专利技术属性】
技术研发人员：A，
申请(专利权)人：纳瓦拉大学，
类型：发明
国别省市：