一种产角蛋白酶的嗜麦芽窄食单胞菌及其应用制造技术

本发明专利技术提供一种产角蛋白酶的嗜麦芽窄食单胞菌Stenotrophomonas maltophilia Wu2，于2021年5月24日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号CCTCC NO：M2021606。本发明专利技术提供的产角蛋白酶的嗜麦芽窄食单胞菌及其应用，增加角蛋白酶的获取途径，更好地利用角蛋白进行工业生产。业生产。业生产。

【技术实现步骤摘要】
Wu2，与洗涤剂混合在去污洗涤剂中的应用。
[0013]可选的，所述的产角蛋白酶的嗜麦芽窄食单胞菌Stenotrophomonasmaltophilia Wu2，在动物皮脱毛中的应用。
[0014]可选的，所述的产角蛋白酶的嗜麦芽窄食单胞菌Stenotrophomonasmaltophilia Wu2，在羊皮脱毛中的应用。
[0015]本专利技术提供的产角蛋白酶的嗜麦芽窄食单胞菌及其应用，本专利技术提供的嗜麦芽窄食单胞菌所产的角蛋白酶对羽毛具有较好的降解效果，能够在72～148h 内对羽毛降解率超过80％，延长降解时间后能够羽毛降解率可达88％以上；可用于羽毛生物降解工艺。
[0016]本专利技术提供的嗜麦芽窄食单胞菌产的角蛋白酶在降解羽毛的应用中，获得的羽毛角蛋白的富含水解液。经过120～148h的酶法水解，鸡毛水解液中的总氨基酸含量超过1100mg/L，其中动物的必需氨基酸多达7种，且含量丰富；这些具有良好的营养价值，可以应用在动物饲料中。
[0017]本专利技术提供的嗜麦芽窄食单胞菌所产的角蛋白酶可以对棉布血污进行去除，在18min内独立去除血污，与洗涤剂混合在13min内去除血污。
[0018]本专利技术提供的嗜麦芽窄食单胞菌所产的角蛋白酶，在室温条件下，利用嗜麦芽窄食单胞菌所产的生物酶对羊皮进行去毛，去毛羊皮皮质细腻柔软，显微镜下显示无羊毛残留。
附图说明
[0019]图1温度对本专利技术嗜麦芽窄食单胞菌角蛋白酶的影响曲线图；
[0020]图2pH对本专利技术嗜麦芽窄食单胞菌角蛋白酶的影响曲线图；
[0021]图3本专利技术嗜麦芽窄食单胞菌角蛋白酶对洗涤剂的耐受性结果图；
[0022]图4本专利技术嗜麦芽窄食单胞菌角蛋白酶降解羽毛对照图；
[0023]其中图4中A.在水加入完整的羽毛；B.嗜麦芽窄食单胞菌角蛋白酶对羽毛的降解；
[0024]图5本专利技术嗜麦芽窄食单胞菌角蛋白酶的去污实验对照图；
[0025]图5A.棉布的血污；B.血污经洗涤剂处理；C.血污经嗜麦芽窄食单胞菌角蛋白酶处理；D.血污经嗜麦芽窄食单胞菌角蛋白酶和洗涤剂共同处理；
[0026]图6本专利技术嗜麦芽窄食单胞菌角蛋白酶的脱羊毛效果对照图；
[0027]其中图6中A.羊皮经水处理；B.化学法脱毛；C.酶法脱毛效果；D.体式显微镜下观察的化学法脱毛的羊皮；E.体式显微镜下观察的酶法脱毛的羊皮。
具体实施方式
[0028]为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下实施例，对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。
[0029]如下一、二、三描述本专利技术提供的嗜麦芽窄食单胞菌的筛选方法、发酵得到角蛋白酶的过程，以及发酵获得角蛋白酶的各项性能的测试
[0030]一本专利技术提供的嗜麦芽窄食单胞菌Stenotrophomonas maltophilia Wu2的筛选方法
[0031]本专利技术提供的产角蛋白酶的嗜麦芽窄食单胞菌Stenotrophomonas maltophilia Wu2的筛选方法如下：
[0032]土样采集：在河南新乡辉县养鸡场内采集富含羽毛角蛋白的土壤样品。
[0033]样品处理：取1g土壤样品，装于盛有30mL无菌生理盐水的锥形瓶中，剧烈震荡15～20min，静置30min，
[0034]富集培养：取上述上清液，转入富集培养基中，37℃，220rpm震荡培养24 h，得富集培养物。富集培养基为：10g/L羽毛粉，0.5g/L氯化铵，0.5g/L氯化钠，0.3g/L磷酸氢二钾，0.4g/L磷酸二氢钾，0.1g/L氯化镁和1g/L酵母膏，在121℃下灭菌20min使用。
[0035]初筛：取富集培养物，经适当梯度稀释后，涂布于脱脂牛奶固体培养基， 37℃培养24h，挑取有透明圈的单菌落作为初筛单菌落。脱脂牛奶固体培养基： 10g/L脱脂奶和20g/L琼脂粉，灭菌备用。
[0036]复筛：将初筛单菌落涂布于复筛培养基中，37℃下培养48～72h，挑取单菌落。复筛培养基：10g/L羽毛粉，1.4g/L磷酸氢二钾，0.7g/L磷酸二氢钾，0.5 g/L氯化钠，pH7.0。
[0037]复筛得到的单菌经生理生化鉴定和分子生物学鉴定，该菌株16S rRNA序列在NCBI数据库中编号为：MW282849.1，鉴定该菌株为嗜麦芽窄食单胞菌，将其命名为Stenotrophomonas maltophiliaWu2，于2021年5月24日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号CCTCC NO：M2021606。
[0038]复筛得到的单菌接种至复筛培养基中，37℃、220rpm条件下摇床培养48h，检测复筛培养的发酵上清液中的角蛋白酶活性为286U/ml。
[0039]酶活测定方法：以1％可溶性角蛋白为底物，采用福林酚显色法测定。取适当稀释倍数的复筛培养的发酵上清液350μL，加入相同体积底物，40℃反应20 min，加入700μL 0.4M三氯乙酸终止反应，15000rpm离心5min后，取第二次发酵上清液200μL，依次加入200μL福林酚和1mL的0.4M Na2CO3，充分混匀后在40℃保温20min，测定显色体系在660nm波长下的吸光值。相对于实验组，对照组加入三氯乙酸和底物的顺序相反，其余操作相同。酶活定义：在上述反应体系中，吸光度每增加0.01为1个酶活力单位(U)。每个样品测定3 个平行。
[0040]二本专利技术提供的嗜麦芽窄食单胞菌Stenotrophomonas maltophilia Wu2发酵产生角蛋白酶过程
[0041]种子活化与培养：取甘油管嗜麦芽窄食单胞菌Stenotrophomonas maltophiliaWu2种子在LB斜面培养基划线后37℃下培养48h，然后挑取一环菌接种于灭菌过的25mL LB液体培养基中，37℃、200rpm培养12～24h，得到新培养的种子培养液。LB培养基：5g/L酵母粉，10g/L蛋白胨和10g/L氯化钠；若是固体培养基中则需要再加入1.5～2％的琼脂粉。
[0042]本专利技术对提供的嗜麦芽窄食单胞菌的发酵培养基和发酵条件进行了初步的优化，获取了该菌的最佳发酵培养条件为：将复筛培养的种子培养液按照体积比为2
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10％接种量接种于发酵培养基中，25～35℃160～120rpm下培养24～120 h，获得含角蛋白酶的发酵液，即发酵培养的发酵上清液。发酵培养基配方为： 15.0g/L羽毛粉，乳糖5g/L，玉米面20g/L，牛肉膏10g/L，硫酸镁1.0g/L，磷酸氢二钾1.4g/L和磷酸二氢钾0.7g/L，pH为7.0。
[0043]测定发酵培养的发酵上清液中的酶活性，方法如一中记载的“酶活测定方法”。不同的是：测定对Ⅰ型胶原蛋白的活性使用的底物是Ⅰ型胶原蛋白为底物，其他步骤相同。测试结果显示发酵培养的发酵上清液中的酶对角蛋白底物的活性较大，为862U/mL，对Ⅰ型胶本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种产角蛋白酶的嗜麦芽窄食单胞菌Stenotrophomonas maltophilia Wu2，于2021年5月24日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号CCTCC NO：M2021606。2.权利要求1中所述的产角蛋白酶的嗜麦芽窄食单胞菌Stenotrophomonas maltophilia Wu2，在降解羽毛中的应用。3.权利要求2中所述的产角蛋白酶的嗜麦芽窄食单胞菌Stenotrophomonas maltophilia Wu2，在所述降解羽毛的应用中，羽毛角蛋白的富含水解液在动物饲料中的应用。4.权利要求1中所述的产角蛋白酶的嗜麦芽窄食单胞菌Stenotrophomonas maltophili...

【专利技术属性】
技术研发人员：张荣先，付成果，华承伟，李志刚，李兰，常景玲，
申请(专利权)人：河南科技学院，
类型：发明
国别省市：