荧光检测试纸的制备方法、检测系统及检测方法技术方案

本发明专利技术提供了一种荧光检测试纸的制备方法、检测系统及检测方法，包括样品垫、荧光垫、PVC板以及NC膜以及吸水纸；NC膜粘贴在PVC板上，NC膜上结合有C线和T线；吸水纸、荧光垫以及样品垫三者依次贴合在PVC板上。通过将荧光微球和免疫层析技术结合生产制备试纸条，利用荧光微球的特性使得试纸条对产品的检测灵敏度下限更低，相比于传统的胶体金平台，至少有五倍的性能优势，并搭配检测卡壳、预分装试剂承载装置、检测仪器以及具有检测APP的智能终端，实现了检测试纸完全封闭式的检测，有助于提高检测的准确性，且有助于减少对环境的生物源性的污染，使用便捷，适用于家庭等特殊环境。适用于家庭等特殊环境。适用于家庭等特殊环境。

【技术实现步骤摘要】
荧光检测试纸的制备方法、检测系统及检测方法


[0001]本专利技术涉及医疗诊断
，具体地，涉及一种荧光检测试纸的制备方法、检测系统及检测方法。

技术介绍

[0002]由于儿童的免疫系统尚未发育完善，老年人免疫力衰减，前期因诊疗不及时、不得当，亦会引发并发症，重则并发其他器官系统损伤。此外各病原体的用药不同，细菌性和支原体感染需使用抗生素药物。因此快速和准确的诊断以及适当的治疗，是减少住院和不必要的抗菌药物滥用而造成耐药菌株产生的重要前提。
[0003]目前，病原体检测一般是需要在医院检验室进行，但去医院就诊就会有一系列问题，具体如：(1)病人多，排队挂号、候诊、检查、取药、治疗等手续多，等待时间长且操作复杂；(2)医院众多患者的接触，也存在患者之间交叉感染的可能；(3)经济负担相对高一点。
[0004]现有公开号为CN104977409A的中国专利，其公开了一种荧光微球免疫层析试纸条的制备方法及定量检测方法。以无皂乳液聚合法制备的发光纳米粒子为标记，采用免疫层析技术，制备荧光微球免疫层析试纸条，然后制成构成包括样本垫、玻璃纤维膜、硝酸纤维素膜和吸水纸的检测卡，其中硝酸纤维素膜上固定有检测线和质控线。在检测过程中，采用荧光微球最佳激发光源进行激发，发射出的荧光经过滤光片后，用CCD扫描技术或光纤技术，将发射光谱收集、聚集和倍增后，转换成数值信号，再将测定的检测线荧光强度乘以校正系数，把校正后的荧光强度代入预先设置在荧光分析仪中的标准曲线，即可通过荧光分析仪自动计算获得样本中待测物的浓度。
[0005]专利技术人认为，针对现有技术中的检测系统，目前市场上急需一种能够实现零加样，零污染，且配合仪器和APP，可以进行既往数据回顾的用于检测试纸的检测系统

技术实现思路

[0006]针对现有技术中的缺陷，本专利技术的目的是提供一种荧光检测试纸的制备方法、检测系统及检测方法。
[0007]根据本专利技术提供的一种荧光检测试纸的制备方法，包括：包被NC膜、制备荧光垫、制备样品垫以及试纸条组装；包被NC膜包括如下步骤：S1.1、制备包被缓冲液、C线溶液以及T线溶液，备用；S1.2、调试微量蛋白点膜系统各参数、将C管线放入C线溶液中、将T管线放入T线溶液中，并将NC膜粘贴到PVC板上，将C线和T线分别结合到NC膜上；S1.3、将调试好的微量蛋白点膜放入温度在37度
‑
60度的干燥箱干燥，保持12小时以上，备用；制备荧光垫包括如下步骤：S2.1、选择标记物：选择比本底物质荧光寿命高5
‑
6个数量级的稀土离子作为荧光标记物；S2.2、微球活化：将标记物与荧光微球原液混合，再在混合液中加入MES 6.0缓冲液混匀，再加入NHS和EDC混匀，然后再离心去上清，之后再加入MES 6.4缓冲液重悬；S2.3、抗体偶联：加入单克隆抗体，超声分散后混匀；S2.4、微球封闭：加入微球封闭液，超声分散后混匀；S2.5、清洗保存：将封闭后的微球溶液离心，去上清，再向去上清后的微球溶液中加
入微球保存液混匀，然后再进行超声分散，并在2
‑
8摄氏度的环境温度下保存；S2.6、紫外分光光度计检测：取标记好的荧光微球加入超纯水混匀，紫外分光光度计检测320nm处吸光度值，并推算出荧光标记物原始OD值；S2.7、配制缓冲液：0.05M Tris pH 8.5
±
0.1、含不超过3％蔗糖、2％海藻糖；S2.8、稀释荧光标记物：用配制好的缓冲液稀释荧光标记物的浓度至0.2
‑
0.60D/mL，超声铺垫；S2.9、形成荧光垫：用制备好的荧光标记物工作液浸泡玻璃纤维素纸，将浸泡好的玻璃纤维素纸放入真空腔内干燥六小时，真空腔内的真空压在1.0bar以下；制备样品垫包括如下步骤：S3.1、制备样品垫处理液：50mM Tris pH8.5、含不超过0.3％酪蛋白钠；S3.2、形成样品垫：用制备好的样品垫处理液浸泡玻璃纤维素纸，将浸泡好的玻璃纤维素纸取出，置于干燥箱干燥十二个小时；试纸条组装包括如下步骤：S4.1、将吸水纸进行切割，再将切割后的吸水纸贴于PVC板上并使其边缘与NC膜覆盖1
‑
2mm；S4.2、将荧光垫进行切割，再将切割后的荧光垫贴于PVC板上并使其边缘与NC膜覆盖1
‑
2mm；S4.3、将样品垫进行切割，再将切割后的样品垫贴于PVC板上并使其边缘与荧光垫覆盖1
‑
2mm；S4.4、将贴好的PVC板进行切割，形成试纸条。
[0008]优选地，针对步骤S1.2、调试微量蛋白点膜系统各参数包括：调整微量蛋白点膜系统的划膜长度在0
‑
300mm；调整微量蛋白点膜系统的划膜喷量为0.8
‑
1.2μl/cm。
[0009]优选地，针对步骤S2.6标记好的荧光微球溶液与超纯水的体积比为1比199或1比399。
[0010]根据本专利技术提供的一种荧光检测试纸，采用权利要求1所述的检测试纸制备方法，包括样品垫、荧光垫、PVC板以及NC膜以及吸水纸；所述NC膜粘贴在PVC板上，且所述NC膜上结合有C线和T线；所述吸水纸、荧光垫以及样品垫三者依次贴合在PVC板上，且所述吸水纸的边缘覆盖NC膜1
‑
2mm，所述荧光垫的边缘覆盖NC膜1
‑
2mm，所述样品垫的边缘覆盖荧光垫1
‑
2mm。
[0011]根据本专利技术提供的一种荧光检测系统，采用权利要求4所述的检测试纸，还包括检测仪器、具有检测APP的智能终端以及检测卡壳；所述检测APP的智能终端与检测仪器信号连接；所述检测试纸设置在检测卡壳内，且所述检测试纸的一端伸出检测卡壳；所述检测卡壳伸入检测仪器的检测口，且所述检测仪器能够读取到检测试纸的反应区。
[0012]优选地，还包括预分装试剂承载装置，所述预分装试剂承载装置与检测卡壳具有检测试纸伸出端的一端卡接配合，且所述检测卡壳远离预分装试剂承载装置的一端伸入检测仪器的检测口内。
[0013]根据本专利技术提供的一种荧光检测系统的检测方法，采用权利要求5所述的荧光检测试纸的检测系统，检测方法包括如下步骤：S1、所述智能终端上的检测APP启动，所述检测APP按照预设的步骤引导使用者进行操作，录入相应信息；S2、撕开所述预分装试剂承载装置的封口膜，将采集的样本在所述预分装试剂承载装置中进行洗脱处理得到待测样本；S3、取出具有所述检测试纸的检测卡壳，按照检测APP和/或所述检测仪器的提示将具有检测试纸的检测卡壳插入检测仪器的检测口内，待用；S4、将所述检测卡壳位于检测仪器外的一端与具有检测样本的分装试剂承载装置插接，并使所述检测试纸伸出检测卡壳的一端浸润在待测样本中，开始计时；S5、通过所述检测仪器内的pd传感器检测C线的干条背景值，再对C线进行定时检测，之后再对C线的干条背景值和C线的定时检测值进行对比；若C线的定时检测值与C线的干条背景值相同，则检测失败，检测结束；若C线的定时检测值与C线的干条背
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种荧光检测试纸的制备方法，其特征在于，包括：包被NC膜、制备荧光垫、制备样品垫以及试纸条组装；包被NC膜包括如下步骤：S1.1、制备包被缓冲液、C线溶液以及T线溶液，备用；S1.2、调试微量蛋白点膜系统各参数、将C管线放入C线溶液中、将T管线放入T线溶液中，并将NC膜粘贴到PVC板上，将C线和T线分别结合到NC膜上；S1.3、将调试好的微量蛋白点膜放入温度在37度
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60度的干燥箱干燥，保持12小时以上，备用；制备荧光垫包括如下步骤：S2.1、选择标记物：选择比本底物质荧光寿命高5
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6个数量级的稀土离子作为荧光标记物；S2.2、微球活化：将标记物与荧光微球原液混合，再在混合液中加入MES 6.0缓冲液混匀，再加入NHS和EDC混匀，然后再离心去上清，之后再加入MES 6.4缓冲液重悬；S2.3、抗体偶联：加入单克隆抗体，超声分散后混匀；S2.4、微球封闭：加入微球封闭液，超声分散后混匀；S2.5、清洗保存：将封闭后的微球溶液离心，去上清，再向去上清后的微球溶液中加入微球保存液混匀，然后再进行超声分散，并在2
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8摄氏度的环境温度下保存；S2.6、紫外分光光度计检测：取标记好的荧光微球加入超纯水混匀，紫外分光光度计检测320nm处吸光度值，并推算出荧光标记物原始OD值；S2.7、配制缓冲液：0.05M Tris pH 8.5
±
0.1、含不超过3％蔗糖、2％海藻糖；S2.8、稀释荧光标记物：用配制好的缓冲液稀释荧光标记物的浓度至0.2
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0.60D/mL，超声铺垫；S2.9、形成荧光垫：用制备好的荧光标记物工作液浸泡玻璃纤维素纸，将浸泡好的玻璃纤维素纸放入真空腔内干燥六小时，真空腔内的真空压在1.0bar以下；制备样品垫包括如下步骤：S3.1、制备样品垫处理液：50mM Tris pH8.5、含不超过0.3％酪蛋白钠；S3.2、形成样品垫：用制备好的样品垫处理液浸泡玻璃纤维素纸，将浸泡好的玻璃纤维素纸取出，置于干燥箱干燥十二个小时；试纸条组装包括如下步骤：S4.1、将吸水纸进行切割，再将切割后的吸水纸贴于PVC板上并使其边缘与NC膜覆盖1
‑
2mm；S4.2、将荧光垫进行切割，再将切割后的荧光垫贴于PVC板上并使其边缘与NC膜覆盖1
‑
2mm；S4.3、将样品垫进行切割，再将切割后的样品垫贴于PVC板上并使其边缘与荧光垫覆盖1
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2mm；S4.4、将贴好的PVC板进行切割，形成试纸条。2.如权利要求1所述的荧光检测试纸的制备方法，其特征在于，针对步骤S1.2、调试微量蛋白点膜系统各参数包括：调整微量蛋白点膜系统的划膜长度在0
‑
300mm；
调整微量蛋白点膜系统的划膜喷量为0.8
‑
1.2μl/cm。3.如权利要求1所述的荧光检测试纸的制备方法，其特征在于，针对步骤S2.6标记好的荧光微球溶液与超纯水的体积比为1比199或1比399。4.一种荧光检测试纸，其特征在于，采用权利要求1...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡淳淳，尚倩倩，贾倩倩，刘文各，徐宏涛，王馨，金巍，刘中华，王国强，
申请(专利权)人：江苏硕世生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：