一种粪菌冷冻保护剂及其在粪菌保藏中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种粪菌冷冻保护剂及其在粪菌保藏中的应用，粪菌冷冻保护剂是按质量百分比由以下组分组成：海藻糖20％

【技术实现步骤摘要】
一种粪菌冷冻保护剂及其在粪菌保藏中的应用


[0001]本专利技术涉及生物
，更具体的说是涉及一种粪菌冷冻保护剂及其在粪菌保藏中的应用。

技术介绍

[0002]人类肠道是一个极其复杂的生态系统，约有1000万亿的厌氧微生物寄居。肠道中的菌群便于人们吸收食物中的营养成分，增强机体免疫力，维持肠道稳态。目前与人类肠道微生物区系有关的主要研究方向有两个，一是建立准确、高效的方法来鉴定微生物群落的组成及肠道菌群蛋白质组学和代谢组学分析，二是肠道微生物群稳态变化与人类疾病之间的关系。粪便样本中的微生物区系能够较好的代表肠道菌群组成，因此常通过对粪便样本进行分析研究肠道菌群。无论是哪个研究方向，在研究之前都需要对粪便样本进行很好的保存，因此良好的粪菌保藏条件是研究的关键。
[0003]低温冷冻保存是公认的菌株长期保存的安全有效的方法，目前常用的粪菌冷冻保护剂是体积分数为10％甘油水溶液，研究表明体积分数为10％的甘油水溶液对粪菌体系有一定的保护作用，但仍有部分细菌不能受到很好保护，经甘油水溶液冷冻保存后的粪便样本不能较好的反应真实肠道区系情况，对科研人员准确了解人肠道菌群组成、深入研究肠道微生物造成一定影响，因此，亟需能够更好地保护粪菌中的微生物多样性，减少冷冻过程中细菌的损伤，更好地保护粪便样本的完整性，使粪便样本更真实的反映肠道区系组成的粪菌冷冻保护剂。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的是克服现有技术的不足，提供一种在低温冷冻保藏中能够有效保护粪菌菌群初始组成比例、菌群多样性和菌存活率的粪菌冷冻保护剂。
[0005]本专利技术的第二个目的是提供一种粪菌冷冻保护剂在粪菌保藏中的应用。
[0006]本专利技术的技术方案概述如下：
[0007]一种粪菌冷冻保护剂，按质量百分比由以下组分组成：海藻糖20％
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36％，蔗糖14％
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22％，脱脂乳粉4％
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8％，甜菜碱4％
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8％，L
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半胱氨酸盐酸盐0.02％
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0.06％，D
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异抗环血酸钠0.3％
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0.7％，谷胱甘肽0.1％
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0.2％，余量为无菌水。
[0008]按质量百分比由以下组分组成：海藻糖28％，蔗糖18％，脱脂乳粉6％，甜菜碱6％，L
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半胱氨酸盐酸盐0.04％，D
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异抗环血酸钠0.5％，谷胱甘肽0.1％，余量为无菌水。
[0009]上述的一种粪菌冷冻保护剂在粪菌保藏中的应用。
[0010]上述应用，包括如下步骤：将粪菌菌液与粪菌冷冻保护剂按照体积比1:1的比例混合均匀获得菌悬液，在
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80℃冷冻保藏。
[0011]所述粪菌菌液用下述方法制成：收集健康志愿者新鲜粪便样本100
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200g，加入相当于所述样本质量5倍的无菌生理盐水，在厌氧环境下进行匀质化处理，用无菌纱布过滤残渣，得到粪菌菌液。
[0012]本专利技术的优点：
[0013]本专利技术的一种粪菌冷冻保护剂在低温冷冻条件下能有效保护粪菌菌悬液初始组成比例、菌群多样性和菌存活率。本专利技术的粪菌冷冻保护剂能使冷冻后的菌悬液菌群组成与冷冻前菌悬液菌群组成更为接近，对科研人员准确研究肠道菌群组成有重要意义。
附图说明
[0014]图1为粪菌悬液冷冻前和冷冻后门水平的菌群相对丰度的分布图。
具体实施方式
[0015]下面结合具体实施例对本专利技术作进一步的说明。
[0016]实施例1
[0017]一种粪菌冷冻保护剂，按质量百分比由以下组分组成：海藻糖28％，蔗糖18％，脱脂乳粉6％,甜菜碱6％，L
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半胱氨酸盐酸盐0.04％，D
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异抗环血酸钠0.5％，谷胱甘肽0.1％，余量为无菌水。
[0018]实施例2
[0019]一种粪菌冷冻保护剂，按质量百分比由以下组分组成：海藻糖20％，蔗糖22％，脱脂乳粉4％,甜菜碱8％，L
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半胱氨酸盐酸盐0.02％，D
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异抗环血酸钠0.7％，谷胱甘肽0.1％，余量为无菌水。
[0020]实施例3
[0021]一种粪菌冷冻保护剂，按质量百分比由以下组分组成：海藻糖36％，蔗糖14％，脱脂乳粉8％,甜菜碱4％，L
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半胱氨酸盐酸盐0.06％，D
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异抗环血酸钠0.3％，谷胱甘肽0.2％，余量为无菌水。
[0022]实施例4
[0023]粪菌冷冻保护剂在粪菌保藏中的应用
[0024]收集健康志愿者新鲜粪便样本150g，加入相当于所述样本质量5倍的无菌生理盐水，在厌氧环境下进行匀质化处理，用无菌纱布过滤残渣，得到粪菌菌液。
[0025]将粪菌菌液与实施例1的粪菌冷冻保护剂按照体积比1:1的比例混合均匀获得菌悬液。
[0026]取1mL菌悬液利用稀释涂布法检测活菌数并进行微生物多样性分析，微生物多样性分析方法：对1mL菌悬液进行总DNA提取及16s rRNA扩增子测序，测序后得到的序列在各个分类学水平上进行菌种种类数统计。剩余菌悬液放置于
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80℃冰箱进行冷冻保藏。保藏3个月后，取出菌悬液在37℃环境解冻后，取1mL菌悬液利用稀释涂布法检测活菌数并进行微生物多样性分析，方法同上。
[0027]实施例5
[0028]粪菌冷冻保护剂在粪菌保藏中的应用：
[0029]收集健康志愿者新鲜粪便样本100g，加入相当于所述样本质量5倍的无菌生理盐水，在厌氧环境下进行匀质化处理，用无菌纱布过滤残渣，得到粪菌菌液。
[0030]将粪菌菌液与实施例2的粪菌冷冻保护剂按照体积比1:1的比例混合均匀获得菌悬液，在
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80℃冷冻保藏。保藏3个月后，取出菌悬液在37℃环境解冻，进行稀释涂布法活菌
数检测及微生物多样性分析，分析方法同实施例4。
[0031]实施例6
[0032]粪菌冷冻保护剂在粪菌保藏中的应用：
[0033]收集健康志愿者新鲜粪便样本200g，加入相当于所述样本质量5倍的无菌生理盐水，在厌氧环境下进行匀质化处理，用无菌纱布过滤残渣，得到粪菌菌液。
[0034]将粪菌菌液与实施例3的粪菌冷冻保护剂按照体积比1:1的比例混合均匀获得菌悬液，在
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80℃冷冻保藏。保藏3个月后，取出菌悬液在37℃环境解冻，进行稀释涂布法活菌数检测及微生物多样性分析，分析方法同实施例4。
[0035]对照例1
[0036]收集健康志愿者新鲜粪便样本150g，加入相当于所述样本质量5倍的无菌生理盐水，在厌氧环境下进行匀质化处理，用无菌纱布过滤残渣，得到粪菌菌液。
[0037]将粪菌菌液与体积浓度为10％甘油水溶液按照体积比1:1的比例混合均匀获得菌悬液，在
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种粪菌冷冻保护剂，其特征在于按质量百分比由以下组分组成：海藻糖20%
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36%，蔗糖14%
‑
22%，脱脂乳粉4%
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8%，甜菜碱4%
‑
8%，L
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半胱氨酸盐酸盐0.02%
‑
0.06%，D
‑
异抗环血酸钠0.3%
‑
0.7%，谷胱甘肽0.1%
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0.2%，余量为无菌水。2.根据权利要求1所述的一种粪菌冷冻保护剂，其特征在于按质量百分比由以下组分组成：海藻糖28%，蔗糖18%，脱脂乳粉6%，甜...

【专利技术属性】
技术研发人员：乔建军，寇佳祥，吴昊，朱宏吉，张悦，
申请(专利权)人：天津大学浙江绍兴研究院，
类型：发明
国别省市：