包含针对ZIP6和/或ZIP10的抗体的抗有丝分裂组合物制造技术

本发明专利技术涉及一种抗有丝分裂剂，包含至少一种抗体或其表位，其选择性结合至少一种ZIP(Zrt、Irt样蛋白)转运蛋白的胞外结构域以抑制其功能，特别是有丝分裂；包含其的组合物；以及所述抗有丝分裂剂或组合物用于治疗包括癌症在内的过度增殖性疾病的用途。在内的过度增殖性疾病的用途。在内的过度增殖性疾病的用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】包含针对ZIP6和/或ZIP10的抗体的抗有丝分裂组合物


[0001]本专利技术涉及包含至少一种抗体或其片段的抗有丝分裂剂，所述抗体或其片段选择性结合至少一种ZIP(Zrt、Irt样蛋白)转运蛋白的胞外结构域以抑制其功能，特别是有丝分裂；包含其的组合物；以及所述抗有丝分裂剂或组合物治疗过度增殖性疾病的用途。

技术介绍

[0002]细胞增殖是任何多细胞生命形式的先决条件。细胞增殖，即从有限数量的细胞开始的细胞数量的增加，因此与任何多细胞生物相关。细胞增殖是一个高度调控的过程。除了多细胞生物的生物量的纯粹增加外，多细胞生物还必须控制细胞增殖以维持其高度有组织的细胞间相互作用。细胞增殖的任何失调都代表或导致病理状况。
[0003]多种疾病，包括病理性病症以及更良性的病症，其特征在于不希望的细胞增殖，特别是细胞的增殖增加或过度。这些疾病中的许多疾病会缩短寿命，而其他的则会大大降低生活质量。
[0004]例如，癌症是过度增殖性疾病最著名的示例之一。癌症是一大类异质疾病，其中一组细胞表现出不受控制的生长，导致对邻近组织的侵袭和破坏。癌细胞经常转移，其中肿瘤细胞经由淋巴系统或通过血流扩散到身体的其他部位。
[0005]还存在其他形式的过度增殖性疾病，诸如但不限于多囊肾病(PKD)和相关的囊性肾病、增生、化生和发育不良及其各种形式、免疫系统的增生性疾病(例如骨髓和淋巴增生性疾病)、前列腺肥大、子宫内膜异位症、银屑病、组织修复和伤口愈合以及纤维化。
[0006]纤维化涉及在器官或组织中形成过多的纤维结缔组织，并且如果它变得广泛和具有侵袭性，可以导致组织或器官退化和/或功能丧失。此外，纤维化在哺乳动物的多种疾病状态中起作用，所述疾病状态包括但不限于肺纤维化、特发性肺纤维化、肝硬化、心内膜纤维化、血管或椎管狭窄、纵隔纤维化、骨髓纤维化、腹膜后纤维化、进行性大块纤维化、肾源性系统性纤维化、克罗恩病、瘢痕疙瘩或陈旧性心肌梗塞、硬皮病/系统性硬化症、关节纤维化和粘连性关节囊炎。
[0007]此类过度增殖性疾病已为人所知几十年了；然而，有效的治疗仍然难以捉摸。在过去十年中报道了多种抗增殖剂。研究了许多抗增殖剂，但很少取得了显著的临床进展。
[0008]如本文所述的细胞增殖性疾病可以因各种原因而发生，但通常涉及异常有丝分裂和/或不希望的有丝分裂。
[0009]锌是细胞中必不可少的离子；没有它，细胞就无法维持生命。锌是300多种酶(代表50多种不同的酶类别)的辅因子，并且对细胞生长至关重要。锌参与蛋白质、核酸、碳水化合物和脂质代谢，以及参与对基因转录、分化和发育的控制。锌缺乏可以是有害的，导致生长发育迟缓和严重的代谢紊乱，而过量的锌则可对细胞有毒。
[0010]用于研究锌生物学的新分子工具的开发通过证明锌的信号调节多样性而揭示了其在细胞中的多种生物学功能，将锌指定为“21世纪的钙”。锌的细胞水平由特定的锌转运蛋白严格调控，其中有两个已知的家族。这两个家族对锌的转运具有相反的作用。锌转运蛋
白的ZnT家族(SLC30A)(以前称为用于阳离子扩散促进子的CDF)将锌从细胞中转运出或从细胞质转运到细胞内隔室中，而锌转运蛋白的ZIP家族(Zrt
‑
、Irt样蛋白)(SLC39A)将锌从细胞外或细胞内隔室转运到细胞质中，其中两种转运蛋白ZIP6(SLC39A6/LIV
‑
1)和ZIP10(SLC39A10)是密切的直系同源物。越来越多的证据表明ZIP转运蛋白SLC39A家族的各种成员涉及疾病状态。
[0011]本文公开了由上述两种直系同源物ZIP6:ZIP10形成的异二聚体在启动有丝分裂中具有关键作用。通过靶向特定的胞外ZIP6/ZIP10结构域，我们已经证明抑制该异二聚体ZIP6:ZIP10可以完全阻止有丝分裂，从而阻止细胞增殖和生长。甚至在增加有丝分裂的试剂的存在下也观察到了这种抑制，并且进一步地，该抑制以剂量依赖方式发生。
[0012]最有利的是，还发现ZIP6和ZIP10转运蛋白仅在有丝分裂开始前立即转移至细胞膜形成多聚体复合物并开始细胞分裂，因此仅在细胞分裂或快要(rounding)转移时存在，从而优雅地提供了选择性治疗靶点。
[0013]因此，我们的工作通过揭示该过程中的关键蛋白质ZIP6和ZIP10以及它们异二聚化并因此介导触发有丝分裂所必需的锌流入的能力，为锌在增殖中长期发挥的作用提供了分子见解。通过抑制这些蛋白质，我们提供了一种在以细胞过度增殖为特征的疾病(诸如癌症)中阻止细胞分裂的新方法。
[0014]专利技术概述
[0015]根据本专利技术的第一方面，提供了包含至少一种抗体或其片段的抗有丝分裂组合物，所述抗体或其片段结合至少一种ZIP(Zrt
‑
、Irt
‑
样蛋白)转运蛋白的胞外结构域，其中所述ZIP转运蛋白是ZIP6或ZIP10或包含两者的异二聚体，以通过阻止有丝分裂抑制其功能，从而用于治疗过度增殖性疾病。
[0016]本文提及的抗体或其片段是指结合所述锌转运蛋白的胞外结构域，并且最理想地阻止异二聚体的形成和因此/或抑制锌转运到细胞质中的抗体的部分。
[0017]更具体地，所述片段是抗体或其重要部分的互补决定区(CDR)或针对异二聚体的一部分，特别是表位的适体。
[0018]在本专利技术的优选实施方案中，所述组合物包含多于一种抗体，每种抗体靶向ZIP6:ZIP10异二聚体的不同部分。理想地，使用抗体的组合，其中至少一种结合异二聚体的ZIP6转运蛋白部分并且其中至少一种结合异二聚体的ZIP10转运蛋白部分。此外，或可选地，使用至少一种结合所述异二聚体的所述ZIP6转运蛋白和所述ZIP10转运蛋白邻近部分的抗体。
[0019]如本领域技术人员将理解的，抗体可以是多克隆抗体，或更理想地，单克隆抗体，并且能够结合所述转运蛋白的胞外结构域的全部或部分。
[0020]理想地，抗体或片段包括指代至少所述抗体的互补决定区。
[0021]本文提及的ZIP转运蛋白是指锌转运蛋白的SLC39A家族，其将锌从细胞外或从细胞内隔室运到细胞质中。如本领域技术人员所知，ZIP家族包含14条人类序列，其中9条属于LIV
‑
1亚家族，LIV
‑
1亚家族是一个高度保守的群体，具有8个主要位于质膜上并将锌转运到细胞中的跨膜结构域蛋白。具体地，LIV
‑
1亚家族的人类成员包括ZIP4、ZIP5、ZIP6、ZIP7、ZIP8、ZIP10、ZIP12、ZIP13、ZIP14。
[0022]在本专利技术第一方面的优选实施方案中，所述抗体理想地结合所述ZIP6和/或ZIP10
转运蛋白的胞外结构域(ECD)，理想地在以下参考坐标(其相对于转运蛋白的整个N端即切割事件之前进行编号)之间结合：
[0023]ZIP6的N端第1
‑
325位或第1
‑
350位和ZIP10的第1
‑
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种抗有丝分裂组合物，所述抗有丝分裂组合物包含至少一种抗体或其片段，所述抗体或其片段选择性地结合至少一种ZIP(Zrt
‑
、Irt
‑
样蛋白)转运蛋白的胞外结构域，以通过阻止有丝分裂抑制其功能而用于过度增殖性疾病的治疗，其中所述ZIP转运蛋白是ZIP6或ZIP10或包含两者的异二聚体。2.根据权利要求1所述的抗有丝分裂组合物，其中所述片段至少包含所述抗体的互补决定区。3.根据权利要求1所述的抗有丝分裂组合物，其中所述片段是适体。4.根据权利要求1至3中任一项所述的抗有丝分裂组合物，其中所述抗体结合所述ZIP6和/或ZIP10转运蛋白的胞外结构域，所述胞外结构域在：ZIP6的N端第1
‑
325位或第1
‑
350位和ZIP10的N端第1
‑
407位之间；或ZIP6的N端第31
‑
325位或第31
‑
350位和ZIP10的第31
‑
407位之间。5.根据权利要求1至4中任一项所述的抗有丝分裂组合物，其中所述抗体在ZIP6的N端第93
‑
350位氨基酸和ZIP10的第46
‑
395位氨基酸之间结合。6.根据权利要求1至5中任一项所述的抗有丝分裂组合物，其中所述抗体在ZIP6的N端第220
‑
350位氨基酸和ZIP10的第46
‑
395位氨基酸之间结合。7.根据权利要求1至5中任一项所述的抗有丝分裂组合物，其中所述抗体在ZIP6的以下ECD的一者内结合：N端表位(SEQ ID NO:1 93
‑
HHDHDHHSDHEHHSD
‑
107)；N端表位(SEQ ID NO:2 246
‑
EPRKGFMYSRNTNE
‑
259)；N端并且包括跨膜结构域1(SEQ ID NO:3 301
‑
RSCLIHTSEK KAEIPPKTYS LQIAWVGGFI AISIISFLSL LGVILVPLMN
‑
350)；N端(SEQ ID NO:4 303
‑
CLIHTSEKKAEIP
‑
315)；N端，(SEQ ID NO:5129
‑
HSHHNHAASGKNKRKALCPDHDSDSSGKDPRNSQGKGAHRPEHASGRRNVKDSVSASEVTSTVYNTVSEGTHFLETIETPRPGKLFPKDVSSSTPPSVTSKSRVSRLAGRKTNESVSEPRKGFMYSRNTNENPQE
‑
263)；N端，(SEQ ID NO:6288
‑
NYLCPAIINQIDARSCLIHTSEKKAEIPPKTYSLQIAWVGGFIAISIISF
‑
337)；或在ZIP10的以下ECD中的一者内结合：N端，(SEQ ID NO:11 46
‑
LEPSKFSKQAAENE
‑
59)；N端(SEQ ID NO:12 164
‑
EKETVEVSVKSDDKHMHDHNHRLRHHHRLHHHLDHNTHHFHNDSITPSERGEPSNEPSTETNKTQEQSDVKLPKGKRKKKGRKSNENSEVITPGFP
‑
253)；N端，(SEQ ID NO:13295
‑
QDLDPDNEGELRHTRKREAPHVKNNAIISLR
‑
395)；N端，(SEQ ID NO:14 36
‑
LHRQHRGMTELEPSKFSKQAAENEKKYYIEKLFERYGENGRLSFFGLEKL
‑
85)。8.根据权利要求1至7中任一项所述的抗有丝分裂组合物，其中所述抗体选自包含以下的组：ZIP6M、ZIP6Y、ZIP6AM、ZIP6X、ZIP6R、抗
‑
SLC39A6
a
、抗
‑
SLC39A6
b
、抗
‑
SLC39A6
c
、抗
‑
SLC39A6
d
、LIV
‑
1/ZIP6抗体、抗
‑
SLC39A6
...

【专利技术属性】
技术研发人员：K，
申请(专利权)人：加的夫大学学院咨询有限公司，
类型：发明
国别省市：