【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】突变的PGLB寡糖基转移酶
专利
[0001]本专利技术涉及改进的PglB寡糖基转移酶及其在蛋白质的糖基化和/或与糖链缀合的载体蛋白的产生中的用途。本专利技术还包括编码改进的PglB寡糖基转移酶的多核苷酸和包含所述多核苷酸的宿主细胞。
[0002]专利技术背景
[0003]糖结合疫苗因其预防许多危及生命的细菌感染的能力而得到广泛认可。糖结合疫苗通常被认为是有效和安全的,并且已经在人类中使用了30多年。常规的糖疫苗生产通常涉及用病原菌的多糖抗原对免疫原性载体蛋白进行化学修饰。然而,最近,出现了用于生产糖结合疫苗的生物技术方法,这有望降低生产成本并进一步提高糖结合疫苗制剂的均质性以及可能的效力和安全性。
[0004]在真核细胞中,N
‑
连接糖基化是涉及多种酶的关键翻译后蛋白质修饰机制。在原核细胞中,N
‑
连接糖基化由某些细菌N
‑
寡糖基转移酶(N
‑
OST)催化。空肠弯曲杆菌(C.jejuni)的蛋白质糖基化基因簇包括PglB基因,该基因编码膜结合的N
‑
OST(PglB
Cj
)。PglB可以在标准细菌宿主,例如,大肠杆菌(E.coli)中表达,并且可以糖基化共表达的周质蛋白,这些蛋白携带至少一个表面暴露的D/E
‑
Z1‑
N
‑
Z2‑
S/T(Z1和Z2≠P)糖基化基序。PglB可以将细菌多糖抗原转移到某些空肠弯曲杆菌蛋白以及其他含有工程化的糖基化位点的生 ...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种包含与SEQ ID NO:1或2所示氨基酸序列具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的氨基酸序列的PglB寡糖基转移酶(OST)多肽或其功能片段,其中所述PglB寡糖基转移酶多肽氨基酸序列包括以下特征:至少一个选自于氨基酸X57、X63、X94、X101、X172、X176、X191、X193、X233、X234、X255、X286、X295、X301、X319、X397、X402、X425、X435、X446、X462、X479、X523、X532、X601、X605、X606、X610、X645、X676和X695的残基被置换为与在SEQ ID NO:1中该位置处发现的氨基酸不同的氨基酸。2.如权利要求1所述的PglB寡糖基转移酶多肽或其功能片段,其中对应于SEQ ID NO:1的氨基酸57的残基被突变为R或K或T,优选为R或T,更优选为R。3.如权利要求1
‑
2中任一项所述的PglB寡糖基转移酶多肽或其功能片段,其中所述PglB寡糖基转移酶多肽氨基酸序列包括以下特征:至少一个选自于氨基酸X78、X84、A155、X293、X300、X301、X306、X308、X462、X464、X479、X523和X570的残基被置换为与在SEQ ID NO:1中该位置处发现的氨基酸不同的氨基酸。4.如权利要求3所述的PglB OST多肽或其功能片段,其中所述氨基酸序列包括至少一个选自于以下的特征:X78突变为T;X84突变为W;X155突变为Q;X293突变为C;X300突变为L;X301突变为P或G;X306突变为H;X308突变为W;X462突变为W、N或T;X464突变为L;X479突变为M;X523突变为R;X570突变为R或V。5.如权利要求3
‑
4中任一项所述的PglB OST,其中所述氨基酸序列包括至少一个选自于以下的特征:对应于SEQ ID NO:1的氨基酸X301的残基突变为P;对应于SEQ ID NO:1的氨基酸X462的残基突变为N或W,以及对应于SEQ ID NO:1的氨基酸X479的残基突变为M。6.如权利要求3
‑
5中任一项所述的PglB OST,其包含至少2、3、4、5或6个以下特征:对应于SEQ ID NO:1的X300的氨基酸突变为L;对应于SEQ ID NO:1的X301的氨基酸突变为P,对应于SEQ ID NO:1的X308的氨基酸突变为W,对应于SEQ ID NO:1的X462的氨...
【专利技术属性】
技术研发人员:L,
申请(专利权)人:葛兰素史克生物有限公司,
类型:发明
国别省市:
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