自动化T细胞培养制造技术

T细胞的规模缩减加工的自动化方法。所述方法包括：通过使T细胞与一种或更多种活化试剂自动接触来活化所述T细胞；通过使所述T细胞与重组病毒载体自动接触来转导所述T细胞；自动接种T细胞；自动扩增所述T细胞；任选地，使所述T细胞自动脱珠；以及自动收获所述T细胞。用于T细胞的规模缩减加工的自动化方法的系统。于T细胞的规模缩减加工的自动化方法的系统。于T细胞的规模缩减加工的自动化方法的系统。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】自动化T细胞培养
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求于2019年6月7日提交的美国临时专利申请No.62/858,736的在先申请日的优先权权益，其在此通过引用整体并入本文。
[0003]序列表的引用
[0004]本申请通过引用并入了创建于2020年5月27日，并且包含18千字节的以计算机可读形式提交的序列表。


[0005]本公开内容总体涉及细胞培养领域。具体而言，本公开内容涉及用于哺乳动物细胞(例如T细胞)的小规模自动化培养和遗传修饰的系统和方法。

技术介绍

[0006]多种细胞治疗方法可用于治疗疾病和病症。在细胞治疗方法中存在涉及用重组受体(例如嵌合抗原受体)进行遗传改造的免疫细胞(例如T细胞)的方法。需要用于制造和/或改造这样的细胞治疗的改善的方法，其包括提供更有效的测试多种条件和经遗传改造的T细胞的方法。

技术实现思路

[0007]本公开内容的一个方面是作为T细胞的规模缩减(scale
‑
down)制造的自动化方法，其中该方法包括：通过使从一个或更多个供体获得的T细胞输入组与一种或更多种活化试剂接触来活化T细胞输入组，以产生活化的T细胞组；通过使活化的T细胞与重组病毒载体在促进活化的T细胞的病毒感染的条件下接触来转导活化的T细胞组，其中所述重组病毒载体包含编码异源重组蛋白的核酸；通过将活化的T细胞组转移到接种和/或孵育培养基中来接种和/或孵育经转导的T细胞组，通过从接种和/或孵育培养基中回收经转导的T细胞组并将经转导的T细胞组转移到扩增培养基中来扩增经转导的T细胞组；从扩增培养基中回收经转导的T细胞组；以及通过冷冻保存经转导的T细胞组来收获经转导的T细胞组，以产生收获的经转导的T细胞组。
[0008]在一些实施方案中，该方法还包括设置具有实验室器具和一种或更多种活化试剂的工作台。
[0009]在以上任何实施方案中，可以自动进行一个或更多个步骤。例如，使从一个或更多个供体获得的T细胞输入组与一种或更多种活化试剂自动接触，使活化的T细胞与重组病毒载体自动接触，将活化的T细胞组自动转移到接种和/或孵育培养基中，从接种培养基中自动回收经转导的T细胞组，并将经转导的T细胞组转移到扩增培养基中，从扩增培养基中自动回收经转导的T细胞组和/或自动冷冻保存经转导的T细胞组。在一些实施方案中，本公开内容涉及T细胞的规模缩减制造的自动化方法，其中该方法包括：通过使从一个或更多个供体获得的T细胞输入组与一种或更多种活化试剂自动接触来活化T细胞输入组，以产生活化
的T细胞组；通过使活化的T细胞与重组病毒载体在促进活化的T细胞的病毒感染的条件下自动接触来转导活化的T细胞组，其中所述重组病毒载体包含编码异源重组蛋白的核酸；通过将活化的T细胞组自动转移到接种和/或孵育培养基中来接种和/或孵育经转导的T细胞组，通过从接种培养基中自动回收经转导的T细胞组并将经转导的T细胞组转移到扩增培养基中来扩增经转导的T细胞组；从扩增培养基中自动回收经转导的T细胞组；以及通过自动冷冻保存经转导的T细胞组来收获经转导的T细胞组，以产生收获的经转导的T细胞组。
[0010]在可与任何另外的实施方案结合的方法的多个实施方案中，转导包括：获得活化的T细胞组的样品以用于活细胞计数；制备活化的T细胞组用于旋转孵育(spinoculation)；通过使活化的T细胞组与重组病毒载体接触并对活化的T细胞组施加离心力来使活化的T细胞组进行旋转孵育；以及，在转导之后在哺乳动物细胞培养箱中孵育和/或接种活化的T细胞组。在一些实施方案中，可以自动进行以上步骤中的任何一个或更多个。例如：自动获得活化的T细胞组的样品以用于活细胞计数；自动制备活化的T细胞组用于旋转孵育；通过使活化的T细胞组与重组病毒载体接触并对活化的T细胞组施加离心力来使活化的T细胞组进行自动旋转孵育；以及，在转导之后在哺乳动物细胞培养箱中自动孵育和/或接种活化的T细胞组。
[0011]在一些实施方案中，方法还包括设置具有实验室器具和试剂以用于转导活化的T细胞组的工作台。
[0012]在方法的多个实施方案中，接种包括：在转导之后获得活化的T细胞组的样品以用于活细胞计数；以及通过将所述活化的T细胞组自动转移至扩增板并将含有所述活化的T细胞组的扩增板置于哺乳动物细胞培养箱中来接种所述活化的T细胞组。在一些实施方案中，可以自动进行以上步骤中的任何一个或更多个。例如，在转导之后自动获得活化的T细胞组的样品以用于活细胞计数。
[0013]在一些实施方案中，方法还包括设置具有实验室器具和试剂以用于接种活化的T细胞组的工作台。
[0014]在方法的多个实施方案中，扩增还包括：获得经转导的T细胞组的样品以用于活细胞计数；以及进行模拟灌注/细胞培养基更换。在一些实施方案中，可以自动进行以上步骤中的任何一个或更多个。例如：自动进行模拟灌注/细胞培养基更换。
[0015]在一些实施方案中，方法还包括设置具有实验室器具和试剂以用于扩增经转导的T细胞组的工作台。
[0016]在方法的多个实施方案中，脱珠包括：在脱珠步骤之前获得样品以用于活细胞计数；通过施加磁场来使经转导的T细胞组脱珠；以及任选地，在脱珠步骤之后获得样品以用于活细胞计数。在一些实施方案中，可以自动进行以上步骤中的任何一个或更多个。例如：在脱珠步骤之前自动获得样品以用于活细胞计数；通过施加磁场来使经转导的T细胞组自动脱珠；以及任选地，在脱珠步骤之后自动获得样品以用于活细胞计数。
[0017]在一些实施方案中，方法还包括设置具有实验室器具和试剂以用于脱珠的工作台。
[0018]在方法的多个实施方案中，收获包括：将经转导的T细胞组置于带有冷冻保存培养基的冷冻瓶中；以及将所述冷冻瓶置于液氮罐中。
[0019]在一些实施方案中，方法还包括设置具有实验室器具和试剂以用于冷冻保存经转
导的T细胞的工作台。
[0020]在方法的多个实施方案中，T细胞包括CD4+ T细胞。
[0021]在方法的多个实施方案中，T细胞包括CD8+ T细胞。
[0022]在方法的多个实施方案中，T细胞包括CD4+ T细胞和CD8+ T细胞。
[0023]在方法的多个实施方案中，异源重组蛋白包括重组受体。
[0024]在方法的多个实施方案中，重组受体能够与靶抗原结合，所述靶抗原与疾病、障碍或病症的细胞或组织相关、对疾病、障碍或病症的细胞或组织具有特异性和/或在疾病、障碍或病症的细胞或组织上表达。
[0025]在方法的多个实施方案中，所述疾病、障碍或病症是感染性疾病或障碍、自身免疫病、炎性疾病或者肿瘤或癌症。
[0026]在方法的多个实施方案中，靶抗原是肿瘤抗原。
[0027]在方法的多个实施方案中，重组受体是或包含功能性非T细胞受体(T cell receptor，TCR)抗原受体或TCR或其抗原结合片段。
[0028]在方法的多个实施方案中，重组受体是嵌合抗原受体(chimeric a本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.用于T细胞的规模缩减加工的自动化方法，其包括：通过使从一个或更多个供体获得的T细胞输入组与一种或更多种活化试剂自动接触来活化所述T细胞输入组，以产生活化的T细胞组；通过使所述活化的T细胞组与重组病毒载体在促进所述活化的T细胞组的病毒感染的条件下自动接触来转导所述活化的T细胞组，以产生经转导的T细胞组，其中所述重组病毒载体包含编码异源重组蛋白的核酸；扩增所述经转导的T细胞组；从扩增培养基中自动回收所述经转导的T细胞组；以及通过自动冷冻保存所述经转导的T细胞组来收获所述经转导的T细胞组，以产生收获的经转导的T细胞组。2.权利要求1所述的方法，其还包括通过将所述活化的T细胞组自动转移至接种培养基中来接种所述活化的T细胞组。3.权利要求1或权利要求2所述的方法，其中活化包括：自动洗涤所述T细胞输入组；任选地，自动获得经洗涤的T细胞输入组的测试样品以用于活细胞计数；使所述经洗涤的T细胞输入组与所述一种或更多种活化试剂自动接触；以及任选地，在与所述一种或更多种活化试剂接触之后，自动获得所述活化的T细胞组的测试样品以用于活细胞计数。4.权利要求1至3中任一项所述的方法，其中转导包括：任选地，自动获得所述活化的T细胞组的测试样品以用于活细胞计数；自动制备所述活化的T细胞组用于旋转孵育；通过使所述活化的T细胞组与所述重组病毒载体接触并对所述活化的T细胞组施加离心力来使所述活化的T细胞组进行自动旋转孵育；以及任选地，在转导之后在哺乳动物细胞培养箱中孵育或接种所述活化的T细胞组。5.权利要求1至4中任一项所述的方法，其中接种包括：任选地，在转导之后自动获得所述活化的T细胞组的测试样品以用于活细胞计数；以及通过将所述活化的T细胞组自动转移至扩增板并将含有所述活化的T细胞组的扩增板置于哺乳动物细胞培养箱中来接种所述活化的T细胞组。6.权利要求1至5中任一项所述的方法，其中扩增还包括：获得所述经转导的T细胞组的测试样品以用于活细胞计数；以及自动进行模拟灌注/细胞培养基更换。7.权利要求1至6中任一项所述的方法，该方法还加压脱珠，其中脱珠包括：通过施加磁场，使所述经转导的T细胞组和/或所述活化的T细胞组自动脱珠。8.权利要求1至7中任一项所述的方法，其中收获包括：将所述经转导的T细胞组置于带有冷冻保存培养基的冷冻瓶中；以及将所述冷冻瓶置于液氮罐中。9.权利要求1至8中任一项所述的方法，其中所述T细胞包括CD4+T细胞。10.权利要求1至8中任一项所述的方法，其中所述T细胞包括CD8+T细胞。11.权利要求1至8中任一项所述的方法，其中所述T细胞包括CD4+T细胞和CD8+T细胞。
12.权利要求1至11中任一项所述的方法，其中所述异源重组蛋白包括重组受体。13.权利要求12所述的方法，其中所述重组受体能够与靶抗原结合，所述靶抗原与疾病、障碍或病症的细胞或组织相关、对疾病、障碍或病症的细胞或组织具有特异性和/或在疾病、障碍或病症的细胞或组织上表达。14.权利要求13所述的方法，其中所述疾病、障碍或病症是感染性疾病或障碍、自身免疫病、炎性疾病或者肿瘤或癌症。15.权利要求13或14所述的方法，其中所述靶抗原是肿瘤抗原。16.权利要求12至15中任一项所述的方法，其中所述重组受体是或包含功能性非TCR抗原受体或TCR或其抗原结合片段。17.权利要求12至15中任一项所述的方法，其中所述重组受体是嵌合抗原受体(CAR)。18.权利要求1至17中任一项所述的方法，其中所述重组病毒载体包括是逆转录病毒载体。19.权利要求18所述的方法，其中所述逆转录病毒载体是慢病毒载体或γ逆转录病毒载体。20.权利要求1至19中任一项所述的方法，其中所述T细胞包括从一个或更多个供体获得的原代T细胞。21.权利要求20所述的方法，其中所述一个或更多个供体是人对象。22.用于T细胞的规模缩减加工的自动化方法，其包括：通过使从一个或更多个供体获得的T细胞输入组与一种或更多种活化试剂自动接触来活化所述T细胞输入组，以产生活化的T细胞组；通过使所述活化的T细胞与重组多核苷酸在促进所述重组多核苷酸并入到所述活化的T细胞中的条件下接触，来修饰所述活化的T细胞组以产生经修饰的T细胞组，其中所述重组多核苷酸包含编码异源重组蛋白的核酸；扩增所述经修饰的T细胞组；从扩增培养基中回收所述经修饰的T细胞组；以及通过自动冷冻保存所述经修饰的T细胞组来收获所述经修饰的T细胞组，以产生收获的经修饰的T细胞组。23.权利要求22所述的方法，其中所述修饰步骤包括转导、电穿孔、基于试剂的转染、细胞加压或挤压。24.权利要求22或权利要求23所述的方法，其中所述方法的一个或更多个步骤是自动进行的和/或没有来自操作者的干预。25.权利要求22至24中任一项所述的方法，其还包括通过将所述活化的T细胞组自动转移至接种培养基中来接种所述活化的T细胞组。26.权利要求22至25中任一项所述的方法，其中活化包括：自动洗涤所述T细胞输入组；任选地，自动获得经洗涤的T细胞输入组的测试样品以用于活细胞计数；使所述经洗涤的T细胞输入组与所述一种或更多种活化试剂自动接触；以及任选地，在与所述一种或更多种活化试剂接触之后，自动获得所述活化的T细胞组的测试样品以用于活细胞计数。
27.权利要求23至26中任一项所述的方法，其中转导包括：任选地，自动获得所述活化的T细胞组的测试样品以用于活细胞计数；自动...

【专利技术属性】
技术研发人员：伊维，
申请(专利权)人：朱诺治疗学股份有限公司，
类型：发明
国别省市：