用于治疗由失调的血浆激肽释放酶介导的疾病的抗体的腺相关病毒载体递送制造技术

本公开尤其提供了一种编码抑制血浆激肽释放酶的蛋白水解活性的试剂的重组腺相关病毒(rAAV)载体。本公开还提供了一种编码抗血浆激肽释放酶抗体重链和抗血浆激肽释放酶抗体轻链的重组腺相关病毒(rAAV)载体。轻链的重组腺相关病毒(rAAV)载体。轻链的重组腺相关病毒(rAAV)载体。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于治疗由失调的血浆激肽释放酶介导的疾病的抗体的腺相关病毒载体递送
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求于2019年6月11日提交的U.S.S.N 62/860,101的权益和优先权，所述专利的内容整体并入本文。

技术介绍

[0003]失调的血浆激肽释放酶活性可能导致促炎性和血管活性肽缓激肽(bradykinin)的过量产生。这种疾病的一实例是遗传性血管性水肿(HAE)，这是一种罕见的但可能危及生命的病症，其特征是表现为皮下和粘膜下血管性水肿的不可预测和反复发作的血管扩张。在一些情况下，HAE与低血浆C1抑制剂水平(I型)有关，而在其他情况下，蛋白质以正常或升高的量循环但功能失调(II型)。C1抑制剂是血浆激肽释放酶活性的主要调控因子。HAE发作的症状包括自然发生或由轻度创伤引发的面部、口和/或气道的肿胀。影响气道的水肿发作可能是致命的。除急性炎症发作以外，过量的血浆激肽释放酶活性也与慢性疾病相关，如自身免疫性疾病，包括红斑狼疮。
[0004]已经考虑并开发了用于治疗C1
‑
INH缺乏或功能障碍的各种策略，包括例如抑制接触系统的成员。例如，拉那利尤单抗(lanadelumab)是已被批准用于治疗HAE的血浆激肽释放酶的完全人单克隆抗体抑制剂。
[0005]使用体内产生包括抗体的蛋白质的载体对于疾病的治疗是期望的，但是受到各种因素的限制，包括递送至受试者后不良的抗体产生。

技术实现思路

[0006]本专利技术提供了编码抗血浆激肽释放酶抗体的高效且稳健的重组腺相关病毒(rAAV)载体。本专利技术部分基于以下令人惊讶的发现：编码抗血浆激肽释放酶抗体重链和抗血浆激肽释放酶抗体轻链的特异性重组AAV载体导致高水平功能性抗血浆激肽释放酶抗体的体内产生。具体地讲，rAAV导致抗血浆激肽释放酶mAb在体内的稳健和持续产生，并且载体介导的抗血浆激肽释放酶抗体保留与通过传统重组表达方法(例如，CHO细胞)产生的抗体蛋白质相同的靶向活性。在本专利技术之前，通过施用携带所需有效负载的rAAV载体递送抗血浆激肽释放酶抗体导致未知量的活性抗体产生。因此，在本专利技术之前，使用编码抗血浆激肽释放酶的rAAV载体治疗C1
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INH缺乏或病症，包括例如遗传性血管性水肿是不可预测的或可行的。
[0007]在一些方面，本文提供了编码全长抗体的重组腺相关病毒(rAAV)载体，所述全长抗体包含抗血浆激肽释放酶抗体重链和抗血浆激肽释放酶抗体轻链。
[0008]在一些实施方案中，抗血浆激肽释放酶抗体重链和抗血浆激肽释放酶抗体轻链经由接头连接。
[0009]在一些实施方案中，接头包含可裂解接头。
[0010]在一些实施方案中，接头包含不可裂解接头。
sequence)。
[0037]在一些实施方案中，弗林蛋白酶可裂解序列随后为接头和2A序列。
[0038]在一些实施方案中，接头是GSG接头。
[0039]在一些实施方案中，2A序列是T2A、P2A、E2A或F2A序列。
[0040]在一些实施方案中，2A序列是P2A序列。
[0041]在一些实施方案中，载体还编码分泌信号。
[0042]在一些实施方案中，分泌信号是天然存在的信号肽。
[0043]在一些实施方案中，分泌信号是人工信号肽。
[0044]在一些实施方案中，抗血浆激肽释放酶抗体重链和抗血浆激肽释放酶抗体轻链产生能够与血浆激肽释放酶结合的功能性抗血浆激肽释放酶抗体。
[0045]在一些实施方案中，抗血浆激肽释放酶抗体抑制血浆激肽释放酶的蛋白水解活性。
[0046]在一些实施方案中，抗体结合于血浆激肽释放酶活性位点。
[0047]在一些实施方案中，结合封闭血浆激肽释放酶活性位点。
[0048]在一些实施方案中，结合抑制血浆激肽释放酶的活性。
[0049]在一些实施方案中，抗体不结合前激肽释放酶。
[0050]在一些实施方案中，抗血浆激肽释放酶抗体重链和抗血浆激肽释放酶抗体轻链由相同载体表达。
[0051]在一些实施方案中，抗血浆激肽释放酶抗体重链和抗血浆激肽释放酶抗体轻链由不同的rAAV载体表达。
[0052]在一些实施方案中，抗血浆激肽释放酶抗体重链和抗血浆激肽释放酶抗体轻链由单独的rAAV载体表达。
[0053]在一些实施方案中，载体还包含5
’
和3
’
反向末端重复序列(ITR)、一个或多个增强子元件和/或poly(A)尾。
[0054]在一些实施方案中，一个或多个增强子元件选自转录因子结合位点和/或WPRE序列的簇。
[0055]在一些方面，提供一种包含AAV8衣壳和rAAV载体的重组腺相关病毒(rAAV)，所述载体包含：(a)5
’
反向末端重复序列(ITR)；(b)顺式作用调控模块(CRM)；(c)肝特异性启动子；(d)抗血浆激肽释放酶抗体重链序列和抗血浆激肽释放酶抗体轻链序列；(e)土拨鼠肝炎病毒转录后调控元件(WPRE)；和(f)3
’
ITR。
[0056]在一些实施方案中，肝特异性启动子包含选自以下的启动子：人甲状腺素运载蛋白启动子(TTR)、经修饰的hTTR(hTTR mod.)、α
‑
抗胰蛋白酶启动子、肝启动子1(LP1)、TRM启动子、人因子IX pro/肝转录因子应答寡聚物、LSP、CMV/CBA启动子(1.1kb)、CAG启动子(1.7kb)、mTTR、经修饰的mTTR、mTTR pro、mTTR增强子或碱性白蛋白启动子。
[0057]在一些实施方案中，肝特异性启动子包含人甲状腺素运载蛋白启动子。
[0058]在一些实施方案中，CRM是肝特异性CRM。
[0059]在一些实施方案中，载体包含至少CRM。
[0060]在一些实施方案中，载体包含三个CRM8。
[0061]在一些实施方案中，WPRE是经修饰的。
[0062]在一些实施方案中，WPRE序列是WPRE mut6delATG。
[0063]在一些方面，提供一种治疗与有需要的受试者中的活化的激肽释放酶
‑
激肽途径的缺乏或失调相关的疾病或病症的方法，所述方法包括施用如本文所述的重组腺相关病毒载体(rAAV)。
[0064]在一些实施方案中，活化的激肽释放酶
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激肽途径的缺乏或失调是与C1酯酶抑制剂缺乏相关的疾病或病症。
[0065]在一些实施方案中，通过静脉内、皮下或透皮施用施用所述rAAV载体。
[0066]在一些实施方案中，透皮施用通过基因枪(gene gun)进行。
[0067]在一些实施方案中，与活化的激肽释放酶
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激肽途径的缺乏或失调或C1酯酶抑制剂的缺乏相关的病症是遗传性血管性水肿(HAE)、获得性血管性水肿(AAE)、具有正常C1抑制剂的血管性水肿、糖尿病性黄斑水肿、偏本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种编码全长抗体的重组腺相关病毒(rAAV)载体，所述全长抗体包含抗血浆激肽释放酶抗体重链和抗血浆激肽释放酶抗体轻链。2.如权利要求1所述的rAAV载体，其中所述抗血浆激肽释放酶抗体重链和所述抗血浆激肽释放酶抗体轻链经由接头连接。3.如权利要求2所述的rAAV载体，其中所述接头包含可裂解接头。4.如权利要求3所述的rAAV，其中所述接头包含不可裂解接头。5.如前述权利要求中任一项所述的rAAV载体，其中所述抗血浆激肽释放酶抗体重链和所述抗血浆激肽释放酶抗体轻链由单个启动子控制。6.如前述权利要求中任一项所述的rAAV载体，其中所述抗血浆激肽释放酶抗体重链和所述抗血浆激肽释放酶抗体轻链由单独启动子控制。7.如权利要求5或6所述的rAAV载体，其中所述单个启动子或所述单独启动子选自遍在启动子、组织特异性启动子或可调控启动子。8.如权利要求7所述的rAAV载体，其中所述组织特异性启动子是肝特异性启动子。9.如权利要求8所述的rAAV载体，其中所述肝特异性启动子包含选自以下的启动子：人甲状腺素运载蛋白启动子(TTR)、经修饰的hTTR(hTTR mod.)、α
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抗胰蛋白酶启动子、肝启动子1(LP1)、TRM启动子、人因子IX pro/肝转录因子应答寡聚物、LSP、CMV/CBA启动子(1.1kb)、CAG启动子(1.7kb)、mTTR、经修饰的mTTR、mTTR pro、mTTR增强子或碱性白蛋白启动子。10.如权利要求9所述的rAAV载体，其中所述肝特异性启动子是人人甲状腺素运载蛋白启动子(TTR)。11.如权利要求7所述的rAAV载体，其中所述可调控启动子是可诱导的或可抑制的启动子。12.如前述权利要求中任一项所述的rAAV载体，其中所述载体还包含以下中的一种或多种：5
′
和3
′
反向末端重复序列、序列上游的内含子和顺式作用调控模块(CRM)。13.如前述权利要求中任一项所述的rAAV载体，其中所述载体还包含WPRE序列。14.如权利要求13所述的rAAV载体，其中所述WPRE序列是经修饰的。15.如权利要求14所述的rAAV载体，其中所述WPRE含有mut6delATG修饰。16.如权利要求12至15中任一项所述的rAAV载体，其中所述CRM是肝特异性CRM。17.如权利要求12至16中任一项所述的rAAV载体，其中所述CRM是CRM8。18.如权利要求12至17中任一项所述的rAAV载体，其中所述载体包含至少三个CRM。19.如权利要求12至18中任一项所述的rAAV载体，其中所述载体包含三个CRM8。20.如前述权利要求中任一项所述的rAAV载体，其中所述rAAV载体包含IRES序列。21.如前述权利要求中任一项所述的rAAV载体，其中所述抗血浆激肽释放酶抗体轻链和/或重链包含增强所述抗体的半衰期和/或降低所述抗体的效应子功能的一个或多个突变。22.如权利要求21所述的rAAV载体，其中所述一个或多个突变包含LALA突变(L234A和L235A)和/或NHance突变(H433K和N434F)。23.如权利要求21或22所述的rAAV载体，其中所述一个或多个突变包含LALA突变(L234A和L235A)。
24.如前述权利要求中任一项所述的rAAV载体，其中所述AAV载体选马AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV11或AAVrh.10。25.如权利要求24所述的rAAV，其中所述rAAV载体衣壳是经工程化的。26.如权利要求25所述的rAAV，其中所述经工程化的rAAV载体包含具有经修饰的氨基酸序列的AAV衣壳序列。27.如权利要求26所述的rAAV，其中所述经修饰的氨基酸序列包括氨基酸序列的插入、缺失或取代。28.如权利要求24所述的rAAV载体，其中所述rAAV衣壳是天然衍生的。29.如权利要求28所述的rAAV载体，其中所述rAAV载体衣壳是AAV8。30.如权利要求3所述的rAAV载体，其中所述可裂解序列是弗林蛋白酶可裂解序列。31.如权利要求30所述的rAAV载体，其中所述弗林蛋白酶可裂解序列随后为接头和2A序列。32.如权利要求31所述的rAAV载体，其中所述接头是GSG接头。33.如权利要求31或32所述的rAAV载体，其中所述2A序列是T2A、P2A、E2A或F2A序列。34.如权利要求33所述的rAAV载体，其中所述2A序列是P2A序列。35.如前述权利要求中任一项所述的rAAV载体，其中所述载体还编码分泌信号。36.如权利要求35所述的rAAV载体，其中所述分泌信号是天然存在的信号肽。37.如权利要求35所述的rAAV载体，其中所述分泌信号是人工信号肽。38.如前述权利要求中任一项所述的rAAV载体，其中所述抗血浆激肽释放酶抗体重链和所述抗血浆激肽释放酶抗体轻链产生能够与血浆激肽释放酶结合的功能性抗血浆激肽释放酶抗体。39.如权利要求38所述的rAAV载体，其中所述抗血浆激肽释放酶抗体抑制血浆激肽释放酶的蛋白水...

【专利技术属性】
技术研发人员：J，
申请(专利权)人：夏尔人类遗传性治疗公司，
类型：发明
国别省市：