用于治疗CMV感染相关疾病的融合毒素蛋白制造技术

本发明专利技术涉及用于治疗与CMV感染相关的疾病的免疫毒素。本发明专利技术还涉及免疫毒素和包含免疫毒素的药物组合物作为药物的用途，以及包含免疫毒素的用于治疗或预防CMV感染的药盒。疫毒素的用于治疗或预防CMV感染的药盒。疫毒素的用于治疗或预防CMV感染的药盒。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于治疗CMV感染相关疾病的融合毒素蛋白


[0001]本专利技术涉及用于治疗CMV感染相关疾病的免疫毒素。本专利技术还涉及所述免疫毒素和包含所述免疫毒素的药物组合物作为药物的用途，以及包含所述免疫毒素的用于治疗或预防CMV感染的试剂盒。

技术介绍

[0002]巨细胞病毒
[0003]巨细胞病毒(CMV)是一种重要的人类病原体和主要的机会主义者，它会在免疫不足的主体中引起疾病，例如艾滋病(AIDS)患者、新生儿和接受过免疫抑制药物(例如作为移植方案的一部分)的个体。在这些个体中，CMV在重现的和/或急性的感染中的后果可能是极其严重的，包括视网膜炎、脑炎和肺囊虫病及其他病理。此外，在有免疫能力的宿主中，CMV建立了一种持续的终生感染，它通过这种感染与各种炎症状况相联系，包括心脏移植和斑块旋切术后的冠状动脉闭塞和血管成型术后的再狭窄。CMV在宿主的急性感染期间以及在终生潜伏期间与白细胞相互作用。因此，白细胞是CMV诱导的疾病的重要参与者，已经作为病毒传播的载体参与感染的急性期并作为驻留位点参与终生潜伏期。
[0004]目前尚无法治愈CMV感染。病毒抑制剂已被用于抑制CMV复制，但它们具有强烈的副作用并且仅用于抑制感染。用于治疗移植患者和HIV/AIDS患者中的CMV感染的最常见药物是仿制药更昔洛韦(Ganciclovir)和阿昔洛韦(Acyclovir)，它们最初是为单纯疱疹病毒(HSV)开发的。更昔洛韦和阿昔洛韦对CMV和HSV具有抑制作用。膦甲酸钠(Foscavir)也被用于抑制CMV感染，但已被证明会引起无法忍受的恶心。Prevymis，一种小分子终止酶抑制剂，也能抑制病毒复制。莱特莫韦(Letermovir)抑制CMV DNA终止酶复合物(pUL51、pUL56和pUL89)，这是病毒DNA加工和包装所必需的。
[0005]总之，现有的药物都不能根除感染，而只能阻止免疫不足或免疫抑制患者的CMV疾病进展。因此，在功效和毒性水平上都有改进的余地。
[0006]免疫毒素
[0007]免疫毒素是与毒素结合的配体，可用于杀死表达该配体的受体的细胞。免疫毒素治疗也称为配体靶向疗法。因此，免疫毒素包括用于递送的靶向部分(配体)和用于细胞毒性的毒性部分。目前使用的配体是单克隆抗体、细胞因子/生长因子和可溶性受体。免疫毒素相比传统化疗药物等的优势在于，细胞不需要分裂就可以被杀死。此外，如果免疫毒素被有效且选择性地内化，则抗原阴性细胞中将不会出现副作用。
[0008]然而，一般而言，免疫毒素并未显示出令人印象深刻的功效水平。一个常见的问题是它们对患病细胞的特异性不够，而且往往不能有效地进入患病细胞以发挥其细胞毒作用。免疫毒素还导致比其他疗法更高水平的全身毒性，可能是因为免疫毒素的非特异性摄取。
[0009]目前，正在探索免疫毒素的新方法，以克服抗原表达的毒性、免疫原性和异质性问题。这些方法包括使用基因工程将毒素的易位和催化结构域与人单链抗体融合，并使用噬
菌体展示来选择高亲和力、肿瘤选择性配体。二价构建体的使用还可以增加亲和力和效力。其他方法主要围绕选择靶向肿瘤血管内皮的配体和靶向癌基因产物或分化抗原。尽管在过去的三十年中一直在进行对免疫毒素的研究，但市场上还没有针对病毒相关疾病的免疫毒素。
[0010]免疫毒素内化
[0011]大多数免疫毒素是针对已发生恶性转化并且作为这种转化的一部分因此过表达某种抗原或某组抗原的细胞而开发的。尽管这些抗原在转化细胞上过度表达，但它们很少对转化细胞具有特异性，而是通常也在正常细胞上表达。因此，只有少数细胞抗原在转化细胞上过表达。因此，为了通过杀死表达靶抗原的正常细胞来避免不希望的毒性，药物开发人员仅限于靶向极少数候选疾病抗原，因此药物开发人员传统上仅限于根据细胞类型分布来选择靶抗原。因此，许多免疫毒素即使以高亲和力结合靶抗原，也无法有效进入靶细胞，导致效力不足。
[0012]用于治疗CMV感染相关疾病的免疫毒素
[0013]之前使用免疫毒素策略治疗CMV感染相关疾病的尝试尚未成功。
[0014]与多克隆和单克隆抗体相关的两种毒素均已用于靶向CMV感染的细胞。然而，针对GPCR的抗体并不容易开发，它们通常无法识别出具有识别位点可变性的GPCR。因此，抗体结合将对与受体功能无关的受体变异高度敏感，从而增加逃逸变异(产生抗性)的风险。因此，基于抗体的策略没有产生令人信服的体内数据，可能是由于免疫毒素的(选择性)靶向和/或内化不足。
[0015]或者，免疫毒素的靶向部分可以是肽而不是抗体。在WO2008/003327中，使用包含肽的免疫毒素靶向CMV感染的细胞，所述肽设计用于靶向组成型内化CMV编码的受体。选择的受体之一是名为US28的CMV特异性受体，它是一种G蛋白偶联受体，由人类巨细胞病毒开放阅读框US28编码。设计靶向US28受体的有效免疫毒素的一个挑战是存在名为CX3CR1的人同源受体。因此，对US28的选择性优于CX3CR1是获得具有最小脱靶问题的安全免疫毒素的关键特征。在WO2008/003327中，将趋化因子CX3CL1的突变版本(fractalkine)，即CX3CR1的天然配体，用作靶向部分。使用此策略，实现了对US28的选择性优于CX3CR1。
[0016]由于存在脱靶的人同源受体CX3CR1，开发对表达US28的细胞具有高亲和力和效力的免疫毒素是不够的。相反，免疫毒素应该具有(i)高特异性，即在竞争性结合环境中，与表达CX3CR1的细胞相比，对表达US28的细胞具有高亲和力，和(ii)高杀伤特异性，即与表达CX3CR1的细胞相比，对表达US28的细胞具有高效力。为了将免疫毒素推向临床，重要的是提高US28选择性和杀伤特异性，以限制不良副作用并降低生产成本。
[0017]因此，改进的免疫毒素将是有益的，特别是与表达CX3CR1的细胞相比，对表达US28的细胞具有高选择性和杀伤特异性的安全免疫毒素将是有益的。

技术实现思路

[0018]通过设计对组成型内化CMV编码受体具有高亲和力的免疫毒素，免疫毒素被感染细胞有效吸收，从而实现了感染细胞的死亡。由于免疫毒素的内化被认为是免疫毒素介导的细胞毒性中的限速步骤，靶向组成型内化受体将解决基于免疫毒素的药物利用中的核心问题。此外，本文提出的免疫毒素旨在区分健康细胞和感染细胞。
[0019]因此，本专利技术的一个目的涉及靶向组成型内化受体的免疫毒素，确保免疫毒素将被转运到靶细胞中，在那里它可以发挥其功能，即杀死该细胞。此外，本专利技术的免疫毒素仅以高准确度靶向CMV感染的细胞，并可用于治疗或预防CMV感染或CMV相关疾病。
[0020]特别地，本专利技术的一个目的是提供一种具有改进的选择性和杀伤特异性的免疫毒素，其可用作具有高效能的安全药物。
[0021]因此，本专利技术的一个方面涉及一种免疫毒素，包括：
[0022]i)靶向部分，包括选自以下的氨基酸序列：
[0023]a)SEQ ID NO:1，或
[0024]本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种免疫毒素，包括：i)靶向部分，包括选自以下的氨基酸序列：a)SEQ ID NO:1，或b)与SEQ ID NO:1具有至少80％序列同一性的氨基酸序列，和ii)毒素，其中第49位的氨基酸残基被丙氨酸(A)残基代替，在N末端第1
‑
6位的氨基酸残基被氨基酸序列ILDNGVS代替。2.根据权利要求1所述的免疫毒素，其中(b)的氨基酸序列与SEQ ID NO:1具有至少90％的序列同一性，例如与SEQ ID NO:1有至少95％，例如至少96％，例如至少97％，例如至少98％，例如至少99％的序列同一性。3.根据权利要求1或2任一项所述的免疫毒素，其中所述靶向部分与US28受体结合。4.根据权利要求3所述的免疫毒素，其中所述US28受体包括选自以下的氨基酸序列：i)SEQ ID NO:3，或ii)与SEQ ID NO:3具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。5.根据前述权利要求任一项所述的免疫毒素，其中与CX3CL1(SEQ ID NO:1)对CX3CR1的亲和力相比，所述免疫毒素对人同源受体CX3CR1的亲和力降低，例如降低到至少1/100，例如至少1/150，例如1/200，或例如至少1/250。6.根据前述权利要求任一项所述的免疫毒素，其中与对CX3CR1的亲和力相比，所述免疫毒素对US28的亲和力增加，例如亲和力增加到至少75倍，例如至少100倍，例如至少150倍，例如200倍，或例如至少250倍。7.根据权利要求5或6任一项所述的免疫毒素，其中所...

【专利技术属性】
技术研发人员：托马斯，
申请(专利权)人：丹麦技术大学，
类型：发明
国别省市：