一种快速检测人类免疫缺陷病毒的试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术涉及一种快速检测人类免疫缺陷病毒的试剂盒及其应用。本发明专利技术公开了一种抗HIV p24抗原的抗体及其在制备用于快速检测HIV病毒的试纸条中的应用，及快速检测试纸条的制备方法。本发明专利技术的检测试纸具有高荧光亮度、高稳定性、高灵敏性的特点，能够进一步提高检测的准确性，利于HIV早期感染的检测、HIV感染预后或治疗的监测，适于大规模推广使用。适于大规模推广使用。

【技术实现步骤摘要】
一种快速检测人类免疫缺陷病毒的试剂盒及其应用


[0001]本专利技术涉及病毒诊断领域,并且更具体地涉及一种快速检测人类免疫缺陷病毒的试剂盒及其应用。

技术介绍

[0002]人类获得性免疫缺陷综合征(Acquired ImmunodeficiencySyndrome)简称艾滋病(AIDS),是由人免疫缺陷病毒(HIV)感染所引起的一种严重的传染性疾病。HIV病毒属逆转录病毒科慢病毒属, 其分为1型，2型以及O型。HIV属于逆转录病毒科慢病毒属，分为两个亚型:1型和2型。其中HIV
‑
2主要流行在西欧，北美和非洲西部地区，该病毒株毒性较弱。而HIV
‑
1则在世界各地广泛存在，是世界上艾滋病流行的主要病毒株，该病毒株毒性强，严重威胁到人体健康。
[0003]HIV的核心包含两条RNA链、核心蛋白p24、p17和参与病毒复制的酶类，外侧是病毒的外膜结构，gp120和gp41两种蛋白镶嵌其中。P24蛋白是HIV
‑
1结构基因gag的表达产物，gag基因翻译时首先生成55kDa的gag蛋白，之后在蛋白酶的作用下分解为p17、p24 和p15三种蛋白，p17构成病毒颗粒的内膜，p24则构成牢固的锥形外壳包围着病毒的核心，p15继续分解成能与RNA相结合的核壳蛋白 p9和p7。由于gag基因序列的保守性，其产物之一p24蛋白的氨基酸序列也在HIV
‑
1各毒株之间高度保守。
[0004]由于HIV抗体的检测存在一个窗口期(平均为2个月)，因此对尚未产生抗体的早期感染者往往造成漏检。而在HIV
‑
1病毒感染早期，病毒在人体内复制时会产生p24蛋白。通过检测血液中p24蛋白，可达到早期诊断的目的，以便更加有效地控制HIV的传播。P24 抗原的检测也可以用来监测疾病进程和评价抗逆转录病毒药物的治疗效果。此外，HIV
‑
1阳性孕妇所产婴儿，由于慕青血液中的IgG抗体可以通过胎盘转入婴儿体内，因此婴儿可能出现抗体阳性而干扰对婴儿是否存在病毒感染状况的判断。
[0005]目前检测HIV的主要检测方法有酶联免疫检测、化学发光法检测、免疫复合物裂解检测等。但现有的检测方法存在敏感性差、假阳性或假阴性高等问题，从而影响检出率，不利于患者早期诊断与治疗、 HIV感染预后或治疗的监测、以及AIDS的传播与控制，因此需要开发性能更优的HIV检测试剂盒。

技术实现思路

[0006]为了更好规避以上缺陷,为患者提供尽早、准确的检测结果，提供了一种量子点标记荧光免疫层析试纸条，其制备简单，使用方便，且能够快速、准确的得出检测结果，有助于HIV患者及早治疗以及控制HIV传播。
[0007]本专利技术提供以下技术方案：
[0008]一方面，本专利技术提供一种特异性结合HIV p24抗原的单克隆抗体 m7D5，其包含重链可变区(V
H
)，所述V
H
包含：含有氨基酸序列SEQ IDNO：1的重链互补决定区(HC
‑
CDR)1、含有氨基酸序列SEQ ID NO： 2的HC
‑
CDR2和含有氨基酸序列SEQ ID NO：3的HC
‑
CDR3；以及轻
链可变区(V
L
)，所述V
L
包含：含有氨基酸序列SEQ ID NO：4的轻链互补决定区(LC
‑
CDR)1、含有氨基酸序列SEQ ID NO：5的LC
‑
CDR 和含有氨基酸序列SEQ ID NO：6的LC
‑
CDR。
[0009]另一方面，本专利技术提供一种特异性结合HIV p24抗原的单克隆抗体m7D5，其包含重链可变区(V
H
)，所述V
H
包含如SEQ ID NO：7所示的氨基酸序列，以及轻链可变区(V
L
)，所述V
L
包含如SEQ ID NO： 8所示的氨基酸序列。
[0010]在一些实施方案中，本专利技术所述的抗HIV p24抗体包含两条重链和两条轻链，或由两条重链和两条轻链构成，其中各重链包含上述的重链恒定区序列、重链可变区序列或CDR序列，且各轻链包含上述的轻链恒定区序列、轻链可变区序列或CDR序列。本专利技术的抗体可以是全长抗体，所述全长抗体包含恒定区，所述全长抗体轻链恒定区进一步包含鼠源κ、λ链序列。所述全长抗体重链恒定区进一步包含鼠源 IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3、IgA或IgM序列。
[0011]在一些实施方式中，本专利技术的抗HIV p24抗体是由上述的抗HIVp24抗体或抗体片段形成的Fab片段、Fab'片段、F(ab')2片段、Fv 片段、双抗体、线性抗体、单链抗体分子或多特异性抗体。
[0012]在一些实施例中，本专利技术提供一种分离的核酸分子，所述核酸分子编码如上所述的抗HIV p24抗体。在一些实施例中，涉及一种载体，所述载体包含如上所述的核酸分子。在一些实施例中，涉及一种宿主细胞，所述宿主细胞包含如上所述的抗HIV p24抗体、如上所述的核酸分子或如上所述的载体。
[0013]在一些实施方式中，本专利技术提供一种人类免疫缺陷病毒量子点荧光免疫层析试纸条，所述人类免疫缺陷病毒量子点荧光免疫层析试纸条由样本垫、玻璃纤维膜、NC膜、吸水纸组成。在一些实施方式中，上试纸条中固定着量子点标记的抗HIV p24单克隆抗体。在一些实施方式中，上试量子点标记的抗HIV p24单克隆抗体包含重链可变区 (V
H
)，所述V
H
包含：含有氨基酸序列SEQ ID NO：1的重链互补决定区(HC
‑
CDR)1、含有氨基酸序列SEQ ID NO：2的HC
‑
CDR2和含有氨基酸序列SEQ ID NO：3的HC
‑
CDR3；以及轻链可变区(V
L
)，所述 V
L
包含：含有氨基酸序列SEQ ID NO：4的轻链互补决定区(LC
‑
CDR) 1、含有氨基酸序列SEQ ID NO：5的LC
‑
CDR和含有氨基酸序列SEQ IDNO：6的LC
‑
CDR。在一些实施方式中，上试量子点标记的抗HIV p24 单克隆抗体包含重链可变区(V
H
)，所述V
H
包含如SEQ ID NO：7所示的氨基酸序列，以及轻链可变区(V
L
)，所述V
L
包含如SEQ ID NO： 8所示的氨基酸序列。在一些实施方式中，如上所述试剂盒用于HIV 早期感染的检测、HIV感染预后或治疗的监测。在一些实施方式中，上述试纸条中量子点标记的抗HIV p24抗体特异性结合来自患者的生物样品中的p24蛋白。在一些实施方式中，本专利技术所述的生物样品为血液、血清、唾液、尿、痰、细胞拭子样品或组织活检物。
[0014]有本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种特异性结合HIV p24蛋白的抗体，其包含：重链可变区(V
H
)，所述重链可变区的CDR1
‑
3的序列分别如：SEQ ID NO：1
‑
3所示；以及轻链可变区(V
L
)，所述轻链可变区的CDR1
‑
3的序列分别如：SEQ ID NO：4
‑
6所示。2.一种特异性结合HIV p24蛋白的抗体，其包含：重链可变区(V
H
)，所述重链可变区的序列如SEQ ID NO：7所示，以及轻链可变区(V
L
)，所...

【专利技术属性】
技术研发人员：马红妙，张玲，
申请(专利权)人：北京保图生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：