一种负载雷公藤红素pH敏感的叶黄素-壳聚糖纳米胶束的制备方法技术

本发明专利技术涉及负载雷公藤红素pH敏感的叶黄素

【技术实现步骤摘要】
一种负载雷公藤红素pH敏感的叶黄素
‑
壳聚糖纳米胶束的制备方法


[0001]本专利技术涉及医药领域，特别是一种负载雷公藤红素pH敏感的叶黄素
‑
壳聚糖纳米胶束的制备方法。

技术介绍

[0002]急性肾损伤（Acute Kidney Injury，AKI）是一种可短期、快速发生的肾功能不全综合征。每年在全球造成 200 万人死亡，以肾功能突然恶化和肾小管细胞快速凋亡为主要特征，具有高发病率和高死亡率的特点。AKI 发生时，肾脏内活性氧（ROS）含量爆发式增长，进一步刺激细胞产生大量炎症因子，快速引起 AKI。因此，提高AKI 的治疗效果具有重要意义。
[0003]据文献报道，叶黄素（Lutein，LU）是一种类胡萝卜素，具有高效、无毒、抗氧化的特点。LU 的抗氧化效果是因为其具有多烯和自由羟基结构，可与 ROS 发生氧化还原反应，快速降低炎症环境中过量的 ROS。同时，LU 还可抑制 NF
‑
κB p65 炎症信号通路的激活，抑制 TNF
‑
α 和 IL
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6 等炎症因子的释放，同时降低组织中环氧合酶
‑
2（COX
‑
2）的含量。基于此，LU 可作为一种有效的抗氧化剂预防药物诱导的AKI。雷公藤红素（Celastrol，Cel）为五环三萜类天然化合物，是草药雷公藤根部的有效成分。因其具有优异的抗氧化和抗炎活性而备受关注。研究表明，Cel 可特异性抑制 NF
‑
κB p65 和 p38 MAPK 炎症信号通路的激活，从而抑制相关炎症因子的过量表达。然而，LU和Cel等抗氧化剂均为脂溶性药物，只溶于二氯甲烷、无水乙醇和二甲基亚砜等有机溶剂，不溶于水。因而在血液循环系统中具有较低的溶解度和生物利用度。同时，Cel 具有较窄的治疗窗，单独给予Cel单体进行治疗时，Cel 可全身分布，对心脏、肝脏和神经系统等重要器官产生毒性作用，从而限制了Cel 的广泛应用，所以需组织特异性递送 Cel 来提高药物治疗功效并降低其毒副作用。鉴于此，构建一种高效、安全pH 响应释药的纳米递送系统将药物定点“运送”到肾脏，发挥药物治疗效果并减少对正常器官损伤势在必行。

技术实现思路

[0004]针对上述情况，为解决现有技术之缺陷，本专利技术之目的就是提供一种负载雷公藤红素pH敏感的叶黄素
‑
壳聚糖纳米胶束的制备方法，可有效解决LU 和 Cel的生物利用度低，减少Cel对心脏、肝脏和神经系统等重要器官的毒性问题。
[0005]本专利技术解决的技术方案是，该纳米胶束为利用pH响应辅料共价偶联低分子量壳聚糖（CS）和叶黄素（LU），合成壳聚糖和LU的共轭物，利用透析法将药物雷公藤红素（Cel）与共轭物形成定点“运送”到肾脏发挥疗效并减少对正常组织损伤的纳米递送系统，该纳米胶束的粒径为50
‑
150nm，具体制备方法包括以下步骤：1）pH响应辅料与叶黄素共价偶联化合物的合成称取100
‑
500mg叶黄素（LU）于圆底烧瓶中，无水二氯甲烷充分溶解，然后加入1
‑
10mL pH响应辅料（PE），最后缓慢滴加0.1
‑
0.5mL有机溶剂，氮气保护下常温避光反应12
‑
48h，反应结束后用二氯甲烷进行洗涤，1
‑
5mol/L 酸性溶剂反复萃取，最后用10
‑
30mL饱和溶液萃取2
‑
8次，合并有机相，然后加入固体干燥剂，干燥过夜以吸收样品中的多余水分，过滤浓缩得到黄色浸膏状产物用于柱层析分离，浓缩样品上样，在活化的硅胶柱（300
‑
400目）中进行纯化，洗脱溶剂进行洗脱，浓缩干燥，得到纯化的叶黄素与pH响应辅料共价偶联的产物（LU
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PE）；2）pH敏感的叶黄素
‑
壳聚糖聚合物的制备精密称取20
‑
100mg LU
‑
PE，加入催化剂（摩尔比LU
‑
PE:催化剂=1:1
‑
1:3），无水 DMSO 为溶剂充分溶解样品，氮气保护下常温避光反应2
‑
8h，加入低分子量壳聚糖（CS，分子量范围：3000
‑
8000），LU
‑
PE与CS摩尔比为1:1
‑
1:3，滴加0.5
‑
2mL三乙胺将体系 pH 值调节为7.0
‑
9.0，氮气保护下常温避光反应24
‑
48h，反应结束后，用50
‑
100mL冰乙醚反复洗涤，收集沉淀于透析袋（截留分子量3500
ꢀ‑
10000）中反复透析12
‑
72小时，去除有机溶剂和未反应的中间体，冷冻干燥得到中间产物 LU
‑
PE
‑
CS；3）负载雷公藤红素的pH敏感的叶黄素
‑
壳聚糖纳米递送系统的制备将5
‑
20mg LU
‑
PE
‑
CS 溶解于2
‑
10mL超纯水溶液中，将0.5
‑
2mL溶解于无水乙醇的雷公藤红素（Cel，浓度：2
‑
4mg/mL）逐滴加入上述溶液中，室温避光反应2
‑
8h，然后将产物放入透析袋（截留分子量 3500
‑
10000），将透析袋放入装有超纯水的烧杯中，反复透析12
‑
72h，然后在10000g/min离心5
‑
15分钟，除去未包载的药物，冻干，得到负载雷公藤红素的Cel@ LU
‑
PE
‑
CS 纳米胶束。
[0006]所述的步骤1）中pH响应辅料为丙酸酐、柠康酸酐中的一种。
[0007]所述的步骤1）中有机溶剂为无水吡啶、三乙胺、甲苯、苯胺中的一种。
[0008]所述的步骤1）中酸性溶剂为冰醋酸、冰盐酸、丙酸中的一种。
[0009]所述的步骤1）中饱和溶液为饱和氯化钙溶液、饱和硫酸钠溶液、饱和氯化钠溶液中的一种。
[0010]所述的步骤1）中固定干燥剂为无水氯化钙、无水硫酸镁、固体氢氧化钠、活性氧化铝、无水硫酸钠中的一种。
[0011]所述的步骤1）中洗脱溶剂为石油醚、乙酸乙酯中的一种或者两者任意体积比的混合物。
[0012]所述的步骤2）中催化剂为1
‑
（3
‑
二甲胺丙基）
‑3‑
乙基碳二亚胺（EDC）、N
‑
羟基琥珀酰亚胺（NHS）、四甲基乙二胺(TEMED)中的一种或者两种以上任意质量比的混合物。
[0013]所述的纳米胶束的叶黄素接枝率为30%
‑
60%，雷公藤红素的包封率为70%
‑...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种负载雷公藤红素pH敏感的叶黄素
‑
壳聚糖纳米胶束的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1）pH响应辅料与叶黄素共价偶联化合物的合成称取100
‑
500mg叶黄素于圆底烧瓶中，无水二氯甲烷充分溶解，然后加入1
‑
10mL pH响应辅料，最后缓慢滴加0.1
‑
0.5mL有机溶剂，氮气保护下常温避光反应12
‑
48h，反应结束后用二氯甲烷进行洗涤，1
‑
5mol/L 酸性溶剂反复萃取，最后用10
‑
30mL饱和溶液萃取2
‑
8次，合并有机相，然后加入固体干燥剂，干燥过夜以吸收样品中的多余水分，过滤浓缩得到黄色浸膏状产物用于柱层析分离，浓缩样品上样，在活化的硅胶柱中进行纯化，洗脱溶剂进行洗脱，浓缩干燥，得到纯化的叶黄素与pH响应辅料共价偶联的产物；2）pH敏感的叶黄素
‑
壳聚糖聚合物的制备精密称取20
‑
100mg LU
‑
PE，加入催化剂，LU
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PE与催化剂的摩尔比为1:1
‑
1:3，无水 DMSO 为溶剂充分溶解样品，氮气保护下常温避光反应2
‑
8h，加入3000
‑
8000分子量壳聚糖，LU
‑
PE与CS摩尔比为1:1
‑
1:3，滴加0.5
‑
2mL三乙胺将体系 pH 值调节为7.0
‑
9.0，氮气保护下常温避光反应24
‑
48h，反应结束后，用50
‑
100mL冰乙醚反复洗涤，收集沉淀于透析袋中反复透析12
‑
72小时，去除有机溶剂和未反应的中间体，冷冻干燥得到中间产物 LU
‑
PE
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CS；3）负载雷公藤红素的pH敏感的叶黄素
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壳聚糖纳米传送系统的制备将5
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20mg LU
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PE
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CS 溶解于...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵娅，杜斌，于利利，唐进法，段松超，杨亚蕾，
申请(专利权)人：河南中医药大学第一附属医院，
类型：发明
国别省市：