花鲈FGF6A、FGF6B以及FGF18重组蛋白及其制备方法和应用技术

本发明专利技术提供了一种花鲈FGF6A、FGF6B以及FGF18重组蛋白及其制备方法和应用，花鲈FGF6A、FGF6B以及FGF18重组蛋白，包含：FGF6A、FGF6B以及FGF18成熟肽氨基酸序列，以及连接到FGF6A、FGF6B、FGF18成熟肽氨基酸序列的N端的标签肽段，标签肽段包含组氨基酸标签序列和促溶标签序列。本发明专利技术还提供了编码该重组蛋白的基因、表达该重组蛋白的载体和重组工程菌。本发明专利技术还进一步提供了重组蛋白的制备方法，以及该重组蛋白在花鲈育种的应用。本发明专利技术的重组蛋白可通过原核细菌大量诱导表达获取可溶性FGF6A、FGF6B、FGF18重组蛋白，且具有活性，有利于后续工业化提取和纯化。于后续工业化提取和纯化。于后续工业化提取和纯化。

【技术实现步骤摘要】
花鲈FGF6A、FGF6B以及FGF18重组蛋白及其制备方法和应用


[0001]本专利技术属于基因工程
，具体涉及一种大肠杆菌表达系统生产可溶的、有生物活性的花鲈FGF(FGF6A、FGF6B以及FGF18)重组蛋白、制备方法及其在花鲈育种中的应用。

技术介绍

[0002]花鲈(Lateolabrax maculatus)，俗称海鲈，隶属鲈形目(Perciforms)、鮨科(Serranidae)、花鲈属(Lateolabrax)，其肉质细嫩、味道鲜美、营养价值高，广受消费者喜爱。花鲈为典型的广温、广盐性鱼类，抗逆、抗病能力强，能很好的利用人工配合饲料，在池塘、工厂化、网箱等水体中均可良好生长，具有非常广阔的养殖前景。近年来，我国花鲈养殖年产量均超过15万吨，位居海水养殖鱼类产量前三位，已成为海水养殖支柱产业。然而，花鲈的遗传育种工作起步较晚，目前养殖用亲鱼来源单一且未进行科学选育，累代繁殖后种质退化现象已经显现，良种的缺乏将对花鲈产业的健康可持续发展产生严重的不利影响。急需开展花鲈遗传改良的研究工作，为优质高产的花鲈良种培育提供理论和技术支撑。
[0003]生长性状是鱼类遗传改良最有价值的经济性状之一。作为鱼类最大的组织，骨骼肌的生长对鱼类躯体的生长起到了决定性的作用。骨骼肌由多核肌纤维组成，肌纤维的增生取决于卫星细胞，卫星细胞作为动物骨骼肌中的干细胞，被激活后可以进行增殖并分化成肌纤维。因此，骨骼肌细胞的发育分化进程显著影响鱼类的生长表现。成纤维细胞生长因子(Fibroblast growth factors,FGFs)是一类重要的细胞信号蛋白，人体细胞中存在22个该家族成员，其功能主要包括参与细胞增殖、分化、迁移、凋亡等多种生物学过程。研究表明，在哺乳动物中，FGFs作为一种促分裂原素参与骨骼肌细胞的发育调控。在信号传导过程中，FGFs结合并激活跨膜的受体蛋白—成纤维细胞生长因子受体(Fibroblast growth factor receptors,FGFRs)，进而将信号传递到细胞内发挥作用。据报道，在哺乳动物中FGF6及FGF18能与FGFR4结合，参与骨骼肌细胞增殖、分化过程。FGFs
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FGFR通路调控骨骼肌细胞增殖、分化的分子机制研究仍处于探索阶段，在鱼类中的相关研究仍属空白。

技术实现思路

[0004]针对现有技术中的不足，本专利技术的目的是提供一种花鲈FGF6A、FGF6B以及FGF18重组蛋白及其制备方法和应用。
[0005]为达到上述目的，本专利技术的解决方案是：
[0006]一种花鲈FGF6A、FGF6B以及FGF18重组蛋白，其包括：FGF6A、FGF6B以及FGF18成熟肽氨基酸序列，以及连接到FGF6A、FGF6B以及FGF18成熟肽氨基酸序列的N端的标签肽段。
[0007]其中，标签肽段包括组氨基酸标签序列和促溶标签序列。
[0008]作为本专利技术的优选实施例，FGF6A、FGF6B以及FGF18成熟肽氨基酸序列分别为SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3。
[0009]作为本专利技术的优选实施例，促溶标签序列为小泛素相关修饰蛋白(SUMO)序列。
[0010]作为本专利技术的优选实施例，SUMO氨基酸序列为SEQ ID NO.4。
[0011]作为本专利技术的优选实施例，组氨基酸标签序列为六聚组氨酸(His6)。
[0012]作为本专利技术的优选实施例，花鲈FGF6A、FGF6B以及FGF18重组蛋白的氨基酸序列分别为SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.6和SEQ ID NO.7。
[0013]编码上述的花鲈FGF6A、FGF6B以及FGF18重组蛋白的基因，其包括：编码FGF6A、FGF6B以及FGF18成熟肽氨基酸的基因序列，以及连接到FGF6A、FGF6B以及FGF18成熟肽氨基酸基因序列的5'端的标签肽段的编码基因序列，标签肽段的编码基因序列包括组氨基酸标签编码基因序列和促溶标签编码基因序列。
[0014]作为本专利技术的优选实施例，编码FGF6A、FGF6B以及FGF18成熟肽氨基酸对应的核苷酸序列分别为SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9和SEQ ID NO.10。
[0015]作为本专利技术的优选实施例，编码FGF6A、FGF6B以及FGF18重组蛋白对应的核苷酸序列分别为SEQ ID NO.11、SEQ ID NO.12和SEQ ID NO.13。
[0016]一种用于表达上述的花鲈FGF6A、FGF6B以及FGF18重组蛋白的表达载体，其包含花鲈FGF6A、FGF6B以及FGF18重组蛋白的编码基因和骨架质粒，骨架质粒为pET
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28a(+)。
[0017]一种用于表达上述的花鲈FGF6A、FGF6B以及FGF18重组蛋白的重组工程菌，其包括上述的表达载体。
[0018]作为本专利技术的优选实施例，重组工程菌的宿主菌选自BL21(DE3)。
[0019]一种花鲈FGF6A、FGF6B以及FGF18重组蛋白的制备方法，其包括如下步骤：
[0020]1)构建上述的FGF6A、FGF6B以及FGF18重组蛋白编码基因，然后连到到骨架质粒上构建得到FGF6A、FGF6B以及FGF18重组蛋白的表达载体；
[0021]2)将表达载体转化到宿主菌中，诱导表达FGF6A、FGF6B以及FGF18重组蛋白；
[0022]3)基于FGF6A、FGF6B以及FGF18重组蛋白中的组氨酸标签亲和层析分离得到FGF6A、FGF6B以及FGF18重组蛋白。
[0023]作为本专利技术的优选实施例，步骤1)中，编码FGF6A、FGF6B以及FGF18成熟肽氨基酸对应的核苷酸序列分别为SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9和SEQ ID NO.10。
[0024]作为本专利技术的优选实施例，步骤1)中，骨架质粒为pET
‑
28a(+)。
[0025]作为本专利技术的优选实施例，步骤2)中，宿主菌选自BL21(DE3)。
[0026]一种上述的花鲈FGF6A、FGF6B以及FGF18重组蛋白在花鲈育种中的应用。
[0027]由于采用上述方案，本专利技术的有益效果是：
[0028]本专利技术首次构建了花鲈FGF6A、FGF6B以及FGF18的原核表达载体，并且将该载体转染BL21(DE3)大肠杆菌，得到的pET
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28a(+)
‑
SUMO
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FGF
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BL21(DE3)表达菌株，能大量诱导表达获取可溶的重组蛋白。通过蛋白质标签亲和纯化后，可得到重组蛋白。本专利技术的方法能够得到氨基酸序列与FGF6A、FGF6B以及FGF18成熟肽一致的花鲈FGF6A、FGF6B以及FGF18重组蛋白，该花鲈FGF6A、FGF6B以及FGF18重组蛋白能够用于花鲈生长相关研究。另外，本专利技术的重组蛋白可通过原核本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种花鲈FGF6A、FGF6B以及FGF18重组蛋白，其特征在于：包括：FGF6A、FGF6B以及FGF18成熟肽氨基酸序列，以及连接到所述FGF6A、FGF6B以及FGF18成熟肽氨基酸序列的N端的标签肽段；所述标签肽段包括组氨基酸标签序列和促溶标签序列。2.根据权利要求1所述的花鲈FGF6A、FGF6B以及FGF18重组蛋白，其特征在于：所述FGF6A、FGF6B以及FGF18成熟肽氨基酸序列分别为SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3。3.根据权利要求1所述的花鲈FGF6A、FGF6B以及FGF18重组蛋白，其特征在于：所述促溶标签序列为小泛素相关修饰蛋白序列；优选地，所述小泛素相关修饰蛋白氨基酸序列为SEQ ID NO.4；优选地，所述组氨基酸标签序列为六聚组氨酸。4.根据权利要求1所述的花鲈FGF6A、FGF6B以及FGF18重组蛋白，其特征在于：所述花鲈FGF6A、FGF6B以及FGF18重组蛋白的氨基酸序列分别为SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.6和SEQ ID NO.7。5.编码如权利要求1
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4任一项所述的花鲈FGF6A、FGF6B以及FGF18重组蛋白的基因，其特征在于：包括：编码FGF6A、FGF6B以及FGF18成熟肽氨基酸的基因序列，以及连接到所述FGF6A、FGF6B以及FGF18成熟肽氨基酸基因序列的5'端的标签肽段的编码基因序列，所述标签肽段的编码基因序列包括组氨基酸标签编码基因序列和促溶标签编码基因序列；优选地，所述编码FGF6A、FGF6B以及FGF18成熟肽氨基酸对应的核苷酸序列分别为SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9和SEQ ID NO.10；优选地，所述编码FGF6A、FGF6B以及FGF18重组蛋白对应的核苷酸序列分别为SEQ ID ...

【专利技术属性】
技术研发人员：李昀，齐鑫，温海深，张凯强，董夕梦，张静茹，王孝杰，陈基伟，
申请(专利权)人：中国海洋大学，
类型：发明
国别省市：