一种乳仓鼠肾细胞BHK-21-E-200及作为病毒疫苗生产细胞株的应用制造技术

本发明专利技术属于病毒疫苗生产技术领域，具体涉及一种乳仓鼠肾细胞BHK

【技术实现步骤摘要】
一种乳仓鼠肾细胞BHK
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21
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E
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200及作为病毒疫苗生产细胞株的应用


[0001]本专利技术属于病毒疫苗生产
，具体涉及一种乳仓鼠肾细胞BHK
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21
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E
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200及作为病毒疫苗生产细胞株的应用。

技术介绍

[0002]口蹄疫是一种具有高度传染性的偶蹄类动物疫病，由口蹄疫病毒(含多种血清型：O、A、C、SAT1、SAT2、SAT3和Asia1)引起。猪、牛、羊等养殖畜类及水牛等野生动物对口蹄疫病毒易感，感染发病率100％，其爆发会对畜牧业造成严重的损失。目前最为有效的防控手段是口蹄疫疫苗的接种。然而随着畜牧业的发展、种群密度的加大等，都增加了防疫的难度，也进一步提高了对疫苗的需求。
[0003]近年来，各类新型疫苗不断涌现，大量文献介绍了这些新型疫苗所能解决的口蹄疫疫病防控问题以及现有疫苗存在的问题。但是，目前被广泛使用的疫苗仍以灭活病毒疫苗为主，考虑到灭活疫苗价格昂贵、疫苗146S含量不高、生产成本高昂等问题，因此提高现有工艺的疫苗生产能力，加大产能，降低生产成本，无疑是解决当前疫苗需求困境的最佳策略。
[0004]目前利用BHK
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21悬浮细胞生产口蹄疫病毒疫苗使用的接毒细胞密度通常在3
×
106～5
×
106cells/mL，根据病毒血清型不同，收获病毒完整颗粒在1
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10μg/mL不等。“细胞密度效应”是指基于动物细胞培养技术的病毒生产工艺中发生的病毒收获量不能随接毒时细胞密度增高而增高，甚至出现下降的现象，是生产工艺在扩大规模和提高产能时的主要瓶颈。这一现象最有可能的原因是高密度细胞培养导致体系内重要营养物质缺乏(如葡萄糖、氨基酸)、有毒代谢副产物积累(如乳酸、氨)以及培养环境参数改变(如温度、转速等)，进而影响了细胞的生理状态以及后续的细胞产毒过程，因此对悬浮细胞改造提升细胞自身的产毒能力和生长适应能力是生产口蹄疫病毒疫苗的一项关键技术。
[0005]辐射生物物理学是研究辐射对生物器官和组织的效应中所涉及的基本物理、物理化学过程的规律及原理，Stoker M在《nature》杂志中报道X射线能够提高腺病毒在BHK细胞的转染率，我国从1986年开始用离子束法改良微生物、细胞性状，通过辐照诱变获得微生物、农作物、细胞的新基因、新性状，最终得到高产、稳定、低耗、抗菌等理想的新品种。尤其是重离子束在生物学领域应用，使得辐照育种在植物、微生物、细胞生物学上有了快速的发展。由于重离子束辐照优越性明显，目前已经在食品、药品、农业、能源等多个方面有了重要进展。中、高能离子束有其特殊的物理性质，如高激发性、传能线密度(LET)高和相对生物学效应(Relative biological effectiveness，RBE)大、尖锐的能量损失峰(Bragg峰)及氧增强比(Oxygen enhancement ratio，OER)较小等，并可精确控制入射深度和部位，同时注入离子的质量也可以选择，特别是兰州重离子加速器冷却储存环(HIRFL
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CSR)建成出束后，使得可供选择的离子质量范围更广。
12
C
6+
重离子辐照育种的优越性为可获得的微生物、植物、细胞种类繁多、代谢多样、可塑性强。
[0006]本专利技术通过兰州重离子加速器冷却储存环(HIRFL
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CSR)采用不同剂量的
12
C
6+
重离子辐照生产口蹄疫疫苗用的BHK
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21细胞，筛选获得了一株高产口蹄疫疫苗病毒的细胞株，从而达到提高口蹄疫疫苗质量，降低口蹄疫疫苗生产成本的问题。

技术实现思路

[0007]针对上述问题，本专利技术的目的在于提供一种高产口蹄疫疫苗病毒的细胞株，从而达到提高口蹄疫疫苗质量，降低口蹄疫疫苗生产成本的问题。具体包括以下内容：
[0008]第一方面，本专利技术提供了一种乳仓鼠肾细胞BHK
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200，所述乳仓鼠肾细胞BHK
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200于2021年8月8日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号：CCTCC NO：C2021224；保藏地址为中国武汉，武汉大学，联系电话：(027)68752319。
[0009]第一方面，本专利技术提供了一种上述第一方面所述的乳仓鼠肾细胞BHK
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200作为病毒疫苗生产细胞株的应用。
[0010]优选地，所述病毒疫苗为口蹄疫病毒疫苗。
[0011]优选地，所述口蹄疫病毒疫苗包括RO
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A/WH/09口蹄疫病毒疫苗、O/MY/A98口蹄疫病毒疫苗。
[0012]优选地，所述口蹄疫病毒疫苗包括口蹄疫病毒灭活疫苗、口蹄疫病毒减毒疫苗。
[0013]第三方面，本专利技术提供了一种含有上述第一方面所述乳仓鼠肾细胞BHK
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200的产品。
[0014]第四方面，本专利技术提供了上述第一方面所述乳仓鼠肾细胞BHK
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200或第三方面所述产品在生产病毒疫苗中的应用。
[0015]优选地，所述病毒疫苗为口蹄疫病毒疫苗。
[0016]优选地，所述口蹄疫病毒疫苗包括RO
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A/WH/09口蹄疫病毒疫苗、O/MY/A98口蹄疫病毒疫苗。
[0017]优选地，所述口蹄疫病毒疫苗包括口蹄疫病毒灭活疫苗、口蹄疫病毒减毒疫苗。
[0018]本专利技术的有益效果是：
[0019](1)本专利技术提供了一种能够稳定传代且高产口蹄疫病毒疫苗的细胞株BHK
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200；相较原始BHK
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21细胞，所述的细胞株BHK
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200的146s含量提升90％，且无外源性污染；
[0020](2)所述的细胞株BHK
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200的单位细胞产毒量较原始BHK
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21细胞升高90％以上，且生长速率较原始BHK
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21细胞提升，能够用于口蹄疫病毒疫苗的高效生产。
附图说明
[0021]图1辐照后BHK
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21的致死率；
[0022]图2BHK
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200细胞的生长曲线；
[0023]图3BHK
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21细胞接种O/MY/A98FMDV后收本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种乳仓鼠肾细胞BHK
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E
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200，所述乳仓鼠肾细胞BHK
‑
21
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E
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200于2020年8月8日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号：CCTCC NO：C2021224；保藏地址：中国武汉，武汉大学；联系电话027
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68752319。2.如权利要求1所述的乳仓鼠肾细胞BHK
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200作为病毒疫苗生产细胞株的应用。3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述病毒疫苗为口蹄疫病毒疫苗。4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述口蹄疫病毒疫苗包括RO
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A/WH/09口蹄疫病毒疫苗、O/MY/...

【专利技术属性】
技术研发人员：宋向东，杜荣胜，安芳兰，刘学荣，李小明，陶世宇，董金杰，郑海学，李江华，
申请(专利权)人：中农威特生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：