一种脐带间充质干细胞在制备修复海马神经元缺氧损伤的药物中的用途制造技术

本公开涉及一种脐带间充质干细胞在制备修复海马神经元缺氧损伤的药物中的用途，所述脐带间充质干细胞具有如下标志物特征：高表达CD73、CD90和CD105，不表达CD14、CD34和HLA

【技术实现步骤摘要】
一种脐带间充质干细胞在制备修复海马神经元缺氧损伤的药物中的用途


[0001]本公开涉及生物
，具体地，涉及一种脐带间充质干细胞在制备修复海马神经元缺氧损伤的药物中的用途。

技术介绍

[0002]缺氧缺血性脑病(Hypoxic ischemic encephalopathy，HIE)是严重影响人类健康和生命的常见病、多发病，其中围生期窒息缺氧导致的新生儿缺氧缺血性脑病(hypoxic
‑
ischemic brain damage,HIBD)，致残率及死亡率极高，不仅威胁着新生儿的生命，而且存活者可能会表现运动发育障碍、脑瘫、癫痫、智力发育低下等中枢神经系统疾病，其发病机制主要是脑血流量改变和脑组织代谢异常，可引起大脑任何部位的损伤，而海马作为主要负责记忆和学习的功能区域，位于大脑的缺血易感区，在缺血早期海马神经元活性即可受到影响，目前仍缺乏有效的保护和治疗手段。
[0003]近年来，干细胞研究的蓬勃发展为难治性疾病治疗带来了新思路和希望。研究表明间充质干细胞是来源于发育早期中胚层的具有高度自我更新能力和多向分化潜能的多能干细胞，广泛存在于全身多种组织中，可在体外培养扩增，在细胞替代治疗及组织工程方面有极大的应用价值。脐带间充质干细胞作为一种多潜能干细胞，具有来源丰富、免疫源性低、无伦理问题等诸多优势，已成为干细胞领域的研究热点。但脐带间充质干细胞(UCMSCs)对缺氧损伤的海马神经元是否有保护作用，尚不可知。

技术实现思路

[0004]本公开的目的是提供一种脐带间充质干细胞在制备修复海马神经元缺氧损伤的药物中的用途，其中，脐带间充质干细胞能够有效修复缺氧损伤的海马神经元体系。
[0005]为了实现上述目的，本公开提供一种脐带间充质干细胞在制备修复海马神经元缺氧损伤的药物中的用途，所述脐带间充质干细胞具有如下标志物特征：高表达CD73、CD90和CD105，不表达CD14、CD34和HLA
‑
DR。
[0006]可选地，所述高表达CD73、CD90和CD105是指流式细胞检测显示CD73、CD90和CD105的表达率均高于95％，所述不表达CD14、CD34和HLA
‑
DR是指流式细胞检测显示CD14、CD34和HLA
‑
DR的表达均低于2％。
[0007]可选地，所述脐带间充质干细胞通过包括如下步骤的方法制备得到：
[0008]S1、将离体的脐带华通氏胶剪碎并进行酶解消化，得到细胞悬液；
[0009]S2、将所述细胞悬液进行密度梯度离心，分离得到单核细胞；
[0010]S3、将所述单核细胞用无血清培养基进行贴壁培养3
‑
5代，得到所述脐带间充质干细胞。
[0011]可选地，所述酶解消化的条件包括：脐带华通氏胶与酶溶液的体积比为1：1
‑
5；所述酶溶液含有Ⅰ型胶原酶和DNA酶I；所述Ⅰ型胶原酶的浓度为100
‑
500IU/mL，所述DNA酶I的
浓度为20
‑
50IU/mL；
[0012]所述消化温度为36
‑
38℃，所述消化时间为0.5
‑
2h。
[0013]可选地，所述密度梯度离心的条件包括：密度梯度介质为1.077g/ml的Ficoll，离心力为600
‑
800g，离心时间为15
‑
30min。
[0014]可选地，所述贴壁培养条件包括：培养时间为7
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21天，培养温度为37℃，培养湿度为饱和湿度；贴壁培养1
‑
3天后，除去未贴壁细胞，完全更换培养瓶内的培养基；贴壁培养第4
‑
7天，每隔2
‑
3天完全更换培养瓶内的培养基。
[0015]可选地，所述无血清培养基为商品化完全培养基。
[0016]可选地，所述海马神经元缺氧损伤为缺氧缺血性脑病。
[0017]可选地，所述缺氧缺血性脑病为新生儿缺氧缺血性脑病。
[0018]可选地，所述新生儿缺氧缺血性脑病为运动发育障碍、脑瘫、癫痫和智力发育低下。
[0019]通过上述技术方案，本公开提供的脐带间充质干细胞在制备修复海马神经元缺氧损伤的药物中的用途，其中，脐带间充质干细胞能够有效修复缺氧损伤的海马神经元体系，且修复过程无需直接接触神经元，表现出远距离修复效果。
[0020]本公开的其他特征和优点将在随后的具体实施方式部分予以详细说明。
附图说明
[0021]附图是用来提供对本公开的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与下面的具体实施方式一起用于解释本公开，但并不构成对本公开的限制。在附图中：
[0022]图1是hUCMSCs表型检测图。
[0023]图2是hUCMSCs共培养示意图。
[0024]图3是海马神经元形态检测。
[0025]图4是免疫荧光检测hUCMSCs共培养有助于缺氧损伤神经元标记物恢复图。
具体实施方式
[0026]以下结合附图对本公开的具体实施方式进行详细说明。应当理解的是，此处所描述的具体实施方式仅用于说明和解释本公开，并不用于限制本公开。
[0027]本公开提供一种脐带间充质干细胞在制备修复海马神经元缺氧损伤的药物中的用途，所述脐带间充质干细胞具有如下标志物特征：高表达CD73、CD90和CD105，不表达CD14、CD34和HLA
‑
DR。
[0028]本公开中，构建了脐带间充质干细胞与海马神经元缺氧损伤的共培养体系，所述共培养体系在transwell装置中进行，将hUCMSCs细胞接种在上室，将经过缺氧处理海马神经元接种于下室，共培养一段时间后检测海马神经元缺氧损伤修复指标。该共培养体系工艺简单、效果显著，为缺氧神经元的保护和修复提供了一种有效的培养方法。
[0029]根据本公开，所述高表达CD73、CD90和CD105是指流式细胞检测显示CD73、CD90和CD105的表达率均高于95％，所述不表达CD14、CD34和HLA
‑
DR是指流式细胞检测显示CD14、CD34和HLA
‑
DR的表达均低于2％。
[0030]根据本公开，所述脐带间充质干细胞通过包括如下步骤的方法制备得到：
[0031]S1、将离体的脐带华通氏胶剪碎并进行酶解消化，得到细胞悬液；
[0032]S2、将所述细胞悬液进行密度梯度离心，分离得到单核细胞；
[0033]S3、将所述单核细胞用无血清培养基进行贴壁培养3
‑
5代，得到所述脐带间充质干细胞。
[0034]根据本公开，所述酶解消化的条件包括：脐带华通氏胶与酶溶液的体积比为1：1
‑
5；所述酶溶液含有Ⅰ型胶原酶和DNA酶I；所述Ⅰ型胶原酶的浓度为100
‑
500IU/mL，所述本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种脐带间充质干细胞在制备修复海马神经元缺氧损伤的药物中的用途，其特征在于，所述脐带间充质干细胞具有如下标志物特征：高表达CD73、CD90和CD105，不表达CD14、CD34和HLA
‑
DR。2.根据权利要求1所述的用途，其中，所述高表达CD73、CD90和CD105是指流式细胞检测显示CD73、CD90和CD105的表达率均高于95％，所述不表达CD14、CD34和HLA
‑
DR是指流式细胞检测显示CD14、CD34和HLA
‑
DR的表达均低于2％。3.根据权利要求1所述的用途，其中，所述脐带间充质干细胞通过包括如下步骤的方法制备得到：S1、将离体的脐带华通氏胶剪碎并进行酶解消化，得到细胞悬液；S2、将所述细胞悬液进行密度梯度离心，分离得到单核细胞；S3、将所述单核细胞用无血清培养基进行贴壁培养3
‑
5代，得到所述脐带间充质干细胞。4.根据权利要求3所述的用途，其中，所述酶解消化的条件包括：脐带华通氏胶与酶溶液的体积比为1：1
‑
5；所述酶溶液含有Ⅰ型胶原酶和DNA酶I；所述Ⅰ型胶原酶的浓度为100
‑
500IU/mL，...

【专利技术属性】
技术研发人员：潘若浪，巫飞飞，郝玉梅，戴玲华，
申请(专利权)人：杭州易文赛生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：