TP重组抗原及其制备方法和应用技术

本发明专利技术属于免疫检测技术领域，涉及一种TP重组抗原及其制备方法和应用，TP重组抗原包含至少1个TP17抗原，至少1个TP15抗原和至少1个TP47抗原；TP17抗原的氨基酸序列如SEQ ID NO：1

【技术实现步骤摘要】
TP重组抗原及其制备方法和应用


[0001]本专利技术属于基因工程及免疫检测
，具体涉及一种TP重组抗原及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]梅毒(Syphilis)是由梅毒螺旋体引起的慢性、系统性传播疾病，在显性和隐性梅毒患者皮肤、分泌物及其血液中都能发现梅毒螺旋体。梅毒螺旋体亦称苍白螺旋体(Treponemiapallidum，TP)，是性病——梅毒的病原体，TP基因是由1138006bp组成的环状DNA，有1041个开放读码框，55％的读码框翻译蛋白有生物学功能。梅毒螺旋体外膜不含脂多糖，但含有丰富的脂蛋白，推测TP具有22种脂蛋白，含量较多的有Tp47、Tp44.5、Tp36、Tp35、Tp17、Tp15等。其中外膜脂蛋白Tp47、Tp17、Tp15、Tp44.5等具有高度免疫原性，在梅毒免疫诊断中具有重要意义。
[0003]编码TP17(17kDa蛋白)基因为Tpp17，基因长度468bp，编码156个氨基酸，蛋白N端有脂肪酸修饰的半胱氨酸残基，疏水性实验表明，脂质修饰结构与TP17疏水性有关，进一步研究证明，脂质修饰结构能刺激小鼠巨噬细胞表达肿瘤坏死因子，与致病性有关，可能在梅毒致病中起重要作用，同时TP17具有多抗原决定簇，具有强免疫原性，几乎所有TP感染者都会产生高滴度特异性的抗TP17抗体。编码TP15(15KDa蛋白)基因为Tpp15，基因长度426bp，TP15脂蛋白是一种天然TP感染和实验TP感染的主要免疫原，在兔免疫模型中，能导致强烈的体液免疫，细胞免疫和抵抗感染后期的TP再感染，因此认为其在保护性免疫中起重要作用。编码TP47(47kDa蛋白)的基因为Tpp47，基因长度为1302bp。TP47蛋白为整合性膜蛋白，是TP外膜蛋白中含量最高成分之一；TP47具有多种生物学功能，具有青霉素结合活性，同时是一种依赖于锌离子的羧肽酶，同时具有较强免疫原性。由于以上三种蛋白基因序列的高度保守性及较高免疫原性使其在诊断及疫苗研究中较广泛。
[0004]随着基因工程技术的发展，对TP基因的分子生物学研究日趋成熟，并且应用于诊断试剂。在梅毒病程的各个阶段可检测到针对TP15、TP17和TP47等的抗体，在潜伏感染晚期的病人血清中此类抗体占绝对优势，因此TP诊断试剂在不同检测平台上主要使用TP17、TP15、TP47等基因片段，但在诊断试剂中TP诊断原料多以单独TP17、单独TP47、TP17+TP15嵌合、TP17+TP47嵌合、TP15+TP47嵌合等模式。由于临床样本的多样性，以及不同区段抗体产生的时间以及量的不同，单一片段或者某两个片段的嵌合容易造成临床检测的漏检，同时蛋白不同片段的选择也会导致交叉反应从而导致假阳结果。
[0005]因此，本领域仍然需要能够避免临床检测的漏检和以高灵敏度和高特异性检测TP的产品，以进行快速、准确、全面的筛查和诊断。
[0006]以梅毒螺旋体为抗原的特异性检测方法有梅毒螺旋体荧光抗体吸附试验(FTA
‑
ABS)和梅毒螺旋体血凝试验(TPHA)，其特异性和灵敏度均较高。但由于梅毒螺旋体培养困难，试剂的成本较高而且由于梅毒螺旋体抗原较复杂，与其他病原体，尤其是类似的螺旋体病(如雅司病)仍可有一定的非特异性反应。
[0007]鉴于以上情况，科学家们开始用重组蛋白质作抗原的特异性检测方法。随着基因克隆技术的发展，用梅毒重组蛋白质为抗原的免疫测定方法也己被陆续应用，目前梅毒螺旋体血清免疫学检验方法主要有利用双抗原夹心法原理的酶联免疫法、化学发光法、金标层析法等。
[0008]TP双抗原夹心法原理是：在固相支持物上面包被第一抗原(即包被抗原)，加入待检标本，以合适的方式引入标记有特殊标记物的第二抗原(即标记抗原)，假如标本中存在TP抗体，则TP抗体跟上述二种抗原，形成“包被抗原
‑
TP抗体
‑
标记抗原”的三明治结构，然后通过标记抗原上的标记物将信号放大，得出最终的判定结果。从方法学上讲，目前梅毒ELISA和胶体金检测用的都是标记物和标记抗原直接标记的双抗原夹心法，但是双抗原夹心法存在以下缺陷：当标记物为酶，发光物质等小标记物时，为提高灵敏度，需提高标记比例，但比例过高会使标记抗原被标记物包裹，使得抗原表位包埋而导致抗原活性降低，最终导致灵敏度低，漏检现象出现；当标记物为较大纳米颗粒如胶体金、乳胶或其他纳米颗粒类标记物时，标记抗原过低容易发生沉淀，从而导致灵敏度偏低，标记抗原过高会导致特异性降低，同时由于标记物过大，也会导致标记抗原表位被包埋而降低抗原活性，因此目前急需在现有梅毒双抗原夹心法试剂盒上做出进一步改进，提高试剂盒灵敏度的同时改善特异性。

技术实现思路

[0009]本专利技术的目的在于解决现有技术中存在的上述问题，提出了一种TP重组抗原及其制备方法和应用，还包括编码TP重组抗原及其突变体的核酸以及相关的载体、宿主细胞、免疫测定法和检测试剂盒等。本专利技术提供的TP重组抗原及其产品可以应用于检测来自受试者的样品中的TP抗体的存在，相对于现有检测方法，本专利技术检测的灵敏度及特异性具有明显的提高。
[0010]本专利技术的技术方案是：
[0011]一种TP重组抗原，包含至少1个TP17抗原，至少1个TP15抗原，和至少1个TP47抗原；
[0012]其中，TP17抗原氨基酸序列选自GeneBank：WP_010881883.1序列多肽，所选多肽长度可以为23
‑
156aa，可以为23
‑
145aa，其中第42位半光氨酸，第58位半光氨酸突变为丙氨酸，即C42A，C58A；所述TP17抗原的氨基酸序列为：
[0013]VSCTTVCPHAGKAKAEKVEAALKGGIFRGTLPAADAPGIDTTVTFNADGTAQKVELALEKKSAPSPLTYRGTWMVREDGIVELSLVSSEQSKAPHEKELYELIDSNSVRYMGAPGAGKPSKEMAPFYVLKKTKK(SEQ ID NO：1)
[0014]或，VSCTTVCPHAGKAKAEKVEAALKGGIFRGTLPAADAPGIDTTVTFNADGTAQKVELALEKKSAPSPLTYRGTWMVREDGIVELSLVSSEQSKAPHEKELYELIDSNSVRYMGAPGAGKPSKEM(SEQ ID NO：2)
[0015]其中，TP15抗原氨基酸序列选自GeneBank：AAC65160.1序列多肽，所选多肽长度为22
‑
141aa；所述TP15抗原的氨基酸序列为：
[0016]SSIPNGTYRATYQDFDENGWKDFLEVTFDGGKMVQVVYDYQHKEGRFKSQDADYHRVMYASSGIGPEKAFRELADALLEKGNPEMVDVVTGATVSSQSFRRLGAALLQSARRGEKEAIISR(SEQ ID NO：3)
[0017]其中，TP47抗原氨基酸序列选自GeneBank本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种TP重组抗原，其特征在于，包含至少1个TP17抗原，至少1个TP15抗原，和至少1个TP47抗原；其中，所述TP17抗原的氨基酸序列为：SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列；或SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列；所述TP15抗原的氨基酸序列为：SEQ ID NO：3所示的氨基酸序列；所述TP47抗原的氨基酸序列为：SEQ ID NO：4所示的氨基酸序列；或SEQ ID NO：5所示的氨基酸序列；或SEQ ID NO：6所示的氨基酸序列。2.根据权利要求1所述的TP重组抗原，其特征在于，所述TP重组抗原包含1个TP17抗原，1个TP15抗原和1个TP47抗原。3.根据权利要求1所述的TP重组抗原，其特征在于，所述TP重组抗原包含2个TP17抗原，1个TP15抗原和1个TP47抗原；其中，2个所述TP17抗原的氨基酸序列均为如SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列，或2个所述TP17抗原的氨基酸序列均为如SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列，或2个所述TP17抗原的氨基酸序列分别为如SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列。4.根据权利要求1所述的TP重组抗原，其特征在于，所述TP17抗原、TP15抗原和TP47抗原之间直接连接或任选地通过一个或多个接头连接，所述接头包括(G)n，(GS)n、(SG)...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨帆，李林，刘万建，刘洋，李文，王婷，田永帅，宋金玲，高文晓，
申请(专利权)人：青岛硕景生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：