Sdccag3过表达载体在制备调控骨组织成脂药物中的应用制造技术

本发明专利技术属于分子生物学和生物技术领域，具体提供了Sdccag3过表达载体在制备调控骨组织成脂药物中的应用，通过建立Sdccag3过表达载体，验证了其可以调控大鼠骨组织的成脂代谢，可以将该过表达载体作为调控骨组织成脂的药物，在相关领域推广应用。在相关领域推广应用。在相关领域推广应用。

【技术实现步骤摘要】
Sdccag3过表达载体在制备调控骨组织成脂药物中的应用


[0001]本专利技术属于分子生物学和生物
，具体涉及Sdccag3过表达载体在制备调控骨组织成脂药物中的应用。

技术介绍

[0002]随着人们生活水平的不断改善，不良生活方式及不健康饮食结构导致的血脂异常成为越来越多人的健康问题，高脂血症已成为人类常见的病理疾病之一。高脂血症表明由于异常的脂肪代谢或功能，血液中脂质或脂蛋白的含量异常升高，其特征是血液循环中的高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein cholesterol，HDL
‑
C)浓度降低，总胆固醇(total cholesterol，TC)，甘油三酸酯(triglyceride，TG)和低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterol，LDL
‑
C)水平升高，它是由饮食失调、肥胖症、遗传性疾病(如家族性高胆固醇血症)或其他疾病(如糖尿病)引起的。由于高脂血症作为与动脉粥样硬化有关的最危险要素，因此其同时作为中风、冠心病、心肌梗塞和心源性猝死的潜在危险因素。
[0003]骨髓作为造血的连续来源，其复杂的信号传导机制是调节正常体内定向多谱系平衡的重要关键，经常出现在代谢疾病的稳态不平衡，例如糖尿病。而骨髓间充质干细胞(bone marrow stem cell，BMSC)是非造血细胞，可作为脂肪形成祖母细胞。BMSCs是脂肪细胞以及其他类型细胞的常见前体，在高血糖或应激信号的诱导下，更倾向于脂肪细胞，从而导致骨脂肪形成的表型，骨髓中分化途径之间的相互平衡被改变，以其他细胞形成为代价，促进了骨髓中的脂肪积聚。许多关键信号通路在BMSCs的成脂分化中发挥一定作用。然而，在代谢应激期间的脂肪形成过程机制仍不清楚。
[0004]Sdccag3(serologically defined colon cancer antigen
‑
3，人类结肠癌血清抗原3)是一种定位于早期和可回收内体的内体蛋白，最初被鉴定为为血清学定义结肠癌抗原3。现有技术已发现，其在高脂环境抑制BMSCs向成骨细胞的分化，这与Wnt信号通路中的蓬乱蛋白2(Dishevelled 2，Dvl2)下调相关；同时，在高脂环境下Wnt通路上细胞膜卷曲受体蛋白Fzd9也受到抑制。此外，研究还发现Sdccag3在这一骨代谢过程中发挥重要的作用，并可调节血脂异常下的骨形成功能，这是首次发现Sdccag3在骨骼方面的功能作用。但Sdccag3对于骨髓间充质干细胞成骨、成脂代谢稳态的影响尚无研究，其脂代谢的影响机制需要进一步研究。

技术实现思路

[0005]针对现有技术中的上述情况，本专利技术的专利技术人提供了一种Sdccag3过表达载体在制备调控骨组织成脂药物中的应用，通过建立Sdccag3过表达载体，验证了其可以调控大鼠骨组织的成脂代谢，可以将该过表达载体作为调控骨组织成脂的药物，在相关领域推广应用。
[0006]本专利技术所述的Sdccag3过表达载体为Sdccag3过表达慢病毒载体，具体为重组表达
质粒与包装系统共同转染宿主细胞后，得到慢病毒载体；
[0007]所述的重组表达质粒为在EF
‑
1a/Luciferase17&Puro载体中多克隆位点NotI/BamHI中插入Sdccag3基因的核苷酸序列所得，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
[0008]除此之外，所述Sdccag3过表达载体可调控高脂环境下骨髓间充质干细胞的成脂分化及高脂血症大鼠骨组织的成脂代谢。
[0009]利用上述Sdccag3过表达慢病毒载体，专利技术人验证了其可以抑制高脂血症大鼠骨组织脂肪形成合，证明了其可以作为调控骨组织成脂的药物，并应用于相应疾病的治疗过程，填补了本领域的空白。
附图说明
[0010]图1为利用大鼠骨髓间充质干细胞进行高脂或普通成骨诱导7天后，使用实时定量PCR检测两组BMSCs中Sdccag3、PPAR
‑
γ和FABP4 mRNA水平结果示意图，结果表明高脂组成脂相关因子PPAR
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γ和FABP4的表达增多，同时Sdccag3的表达量减少；
[0011]图2为利用大鼠骨髓间充质干细胞进行高脂或普通成骨诱导14天后，使用实时定量PCR检测两组BMSCs中Sdccag3、PPAR
‑
γ和FABP4 mRNA水平结果示意图，结果表明高脂组成脂相关因子PPAR
‑
γ和FABP4的表达增多，同时Sdccag3的表达量减少；
[0012]图3为利用大鼠骨髓间充质干细胞进行高脂或普通成骨诱导7天后，Western Blot实验结果示意图；
[0013]图4为利用形态学检测油红O染色，评价高脂环境下BMSCs成脂分化能力结果示意灰度图，结果证实高脂环境明显促进了BMSCs早期的成脂分化能力，影响了BMSCs向成脂细胞的分化过程；
[0014]图5为Sdccag3过表达及抑制表达后RT
‑
PCR检测结果示意图，其中overexpression
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nc：Sdccag3过表达阴性对照组；Sdccag3
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overexpression：Sdccag3过表达组；knockdown
‑
nc：Sdccag3抑制表达阴性对照组；Sdccag3
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knockdown：Sdccag3抑制表达组；
[0015]图6为Sdccag3过表达及抑制表达后Western Blot检测结果示意图；
[0016]图7为Sdccag3过表达及抑制表达后油红O染色结果示意灰度图；
[0017]图8为大鼠高脂组与普通组的相关分子表达RT
‑
PCR结果示意图；
[0018]图9为大鼠高脂组与普通组股骨硬组织切片油红O染色结果示意灰度图；结果显示，高脂血症大鼠较普通组大鼠骨组织中脂肪增多；
[0019]图10为利用慢病毒载体过表达及抑制表达Sdccag3后，大鼠相关分子表达RT
‑
PCR结果示意图；
[0020]图11为利用慢病毒载体过表达及抑制表达Sdccag3后，大鼠股骨硬组织切片油红O染色结果示意灰度图。
具体实施方式
[0021]以下结合附图对本专利技术的上述
技术实现思路
作进一步的详细描述。应理解，这些实施例仅为了说明本专利技术而不是为了限制本专利技术的保护范围。实施例中所采用的具体技术均为本领域的常规技术，所采用的生物材料均为专利技术人在研究过程中从正规途径和合法渠道获
得的已知生物材料，专利技术人列举相关技术如下：但是其他未被列入的具体技术也均为已知技术，专利技术人不再赘述。
[0022]实施例1骨髓间充质干细胞(BMSCs)的培养与诱导
[0023](1)BMSCs的获取、培养
[0024]骨髓间充质干细胞本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.Sdccag3过表达载体在制备调控骨组织成脂药物中的应用，所述的Sdccag3过表达慢病毒载体为重组表达质粒与包装系统共同转染宿主细胞后，得到的慢病毒载体；所述的重组表达质粒为在EF
‑
1a/Luciferase17&Puro载体中多克隆位点NotI/B...

【专利技术属性】
技术研发人员：蓝菁，任会萍，霍凤蕾，李传花，朱丽娜，
申请(专利权)人：山东大学，
类型：发明
国别省市：