本发明专利技术涉及农业生物技术领域，具体涉及苍术茎叶提取物的HPLC指纹图谱质量评价方法。本申请采用高效液相色谱法建立苍术茎叶的质量控制方法，通过考察波长、流动相、改性剂、柱温、流速和分析时间等对苍术茎叶化学成分数量和分离度的影响，确定苍术茎叶的高效液相色谱分析方法，进一步对建立的液相分析方法进行精密度、稳定性和重复性验证，采用相似度分析和化学计量学方法来评价HPLC指纹图谱与抑菌活性之间的谱效关系，最终确定苍术茎叶批间质控点，为苍术茎叶的应用奠定质量基础。为苍术茎叶的应用奠定质量基础。为苍术茎叶的应用奠定质量基础。
【技术实现步骤摘要】
苍术茎叶HPLC指纹图谱质量评价方法
[0001]本专利技术涉及农业生物
，具体涉及苍术茎叶HPLC指纹图谱质量评价方法。
技术介绍
[0002]中药不仅对人且对动物都具有强身健体、防病治病的功效，因此其市场需求量迅速增长。此外，随着中药成分复杂性带来巨大变化的同时，促进了中药质量控制和谱效评价技术和方法的发展。指纹图谱分析是一种公认的、有效的中药质量控制方法。中药指纹图谱分析在中药材标准化生产过程中得到广泛应用。《中国药典》制定的中药质量标准不仅符合中药的特点，而且采用中药指纹图谱的方法控制中药质量已得到国际公认。同时，高效液相色谱法以其高效、高灵敏度、高速、高压等优点，在中草药活性成分的定性定量测定中发挥着至关重要的作用。
[0003]苍术系菊科植物茅苍术茎叶AtractylodesLancea(Thunb.)DC.或北苍术茎叶A.chinensis(DC.)Koidz.的根茎部分。现代药理学研究表明，苍术作为一种药用材料，具有独特的化学成分和显著的药理活性，具有抗溃疡、抗心律失常、消炎、抗菌、保肝、降血压等作用，被广泛应用。苍术茎叶作为苍术的非药用部位被作为垃圾丢弃，造成资源的严重浪费。研究表明，苍术茎叶具有抗炎、抑菌和抗氧化作用。要推动苍术茎叶的应用，标准制定亟须先行一步。因此，制定苍术茎叶的标准尤为重要。
[0004]HPLC色谱图中色谱峰受许多因素的影响，如检测波长、流动相流速、混合流动相各组分比例、柱温等都会影响苍术茎叶茎叶HPLC指纹图谱，尤其是混合流动相各组分比例影响更大，具有不确定性，色谱条件的任何改变，都意味着整体色谱图形变异，给HPLC指纹图谱的建立工作造成困难。
技术实现思路
[0005]本专利技术的目的是提供苍术茎叶HPLC指纹图谱质量评价方法。
[0006]根据本专利技术的苍术茎叶HPLC指纹图谱质量评价方法，包括以下步骤：
[0007]制备待测苍术茎叶样品的茎叶提取物溶液和苍术茎叶标准品的茎叶提取物溶液；
[0008]将上述得到的提取物溶液分别进行HPLC色谱分析，其中，HPLC色谱分析的条件为：
[0009]流动相为甲醇
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0.1vol％三氟乙酸系统，流速为1mL/min、柱温30℃、检测波长260nm、分析时间为40min
[0010]在检测波长260nm、柱温30℃、流速0.8mL/min，以甲醇
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0.1vol％三氟乙酸溶液为流动相，进行梯度洗脱，进样体积为10μL，梯度洗脱程序为：洗脱梯度0～15min，5％甲醇～35％的0.1％三氟乙酸
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水，15～25min，35％甲醇～45％的0.1％三氟乙酸
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水，25～30min，45％甲醇～60％的0.1％三氟乙酸
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水；30～40min，60％甲醇～95％的0.1％三氟乙酸
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水；
[0011]对比待测苍术茎叶样品的茎叶提取物溶液和苍术茎叶标准品的茎叶提取物溶液的HPLC色谱图，待测苍术茎叶样品的茎叶提取物溶液的HPLC色谱峰图与苍术茎叶标准品的茎叶提取物溶液的HPLC色谱峰图的相似度≥0.998，则判断待测苍术茎叶样品为合格产品。
[0012]根据本专利技术的苍术茎叶提取物的HPLC指纹图谱质量评价方法，其中，通过以下步骤制备苍术茎叶的提取物溶液：
[0013]将苍术茎叶研磨成粉，过40目筛网；
[0014]向过筛的粉末中加入乙醇
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水溶液；
[0015]然后超声提取，离心收集上清液，然后蒸发浓缩，冷冻干燥成粉末；
[0016]以水溶解粉末。
[0017]根据本专利技术的苍术茎叶提取物的HPLC指纹图谱质量评价方法，其中，过筛的粉末中与乙醇
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水溶液的料液比为1:40。
[0018]根据本专利技术的苍术茎叶提取物的HPLC指纹图谱质量评价方法，其中，在500W下超声提取30min。
[0019]根据本专利技术的苍术茎叶提取物的HPLC指纹图谱质量评价方法，其中，上清液在45℃旋转蒸发浓缩，经真空冷冻干燥成粉末，4℃保存备用。
[0020]本申请采用高效液相色谱法建立苍术茎叶的质量控制方法，通过考察波长、流动相、改性剂、柱温、流速和分析时间等对苍术茎叶化学成分数量和分离度的影响，确定苍术茎叶的高效液相色谱分析方法，进一步对建立的液相分析方法进行精密度、稳定性和重复性验证，采用相似度分析和化学计量学方法来评价HPLC指纹图谱与抑菌活性之间的谱效关系，最终确定苍术茎叶批间质控点，为苍术茎叶的应用奠定质量基础。
附图说明
[0021]图1显示260nm波长下苍术茎叶提取物分离效果；
[0022]图2显示340nm波长下苍术茎叶提取物分离效果；
[0023]图3显示苍术茎叶提取物全波长扫描结果；
[0024]图4显示甲醇
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水体系对苍术茎叶提取物的分离效果；
[0025]图5显示乙腈
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水体系对苍术茎叶提取物的分离效果；
[0026]图6显示甲醇
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水
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甲酸改性剂对苍术茎叶提取物分离效果；
[0027]图7显示甲醇
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水
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乙酸改性剂对苍术茎叶提取物分离效果；
[0028]图8显示甲醇
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水
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磷酸改性剂对苍术茎叶提取物分离效果；
[0029]图9显示甲醇
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水
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三氟乙酸改性剂对苍术茎叶提取物分离效果；
[0030]图10洗脱程序1对苍术茎叶提取物分离效果的影响；
[0031]图11显示洗脱程序2对苍术茎叶提取物分离效果的影响；
[0032]图12显示洗脱程序3对苍术茎叶提取物分离效果的影响；
[0033]图13显示洗脱程序4对苍术茎叶提取物分离效果的影响；
[0034]图14显示柱温25℃对苍术茎叶提取物分离效果的影响；
[0035]图15显示柱温30℃对苍术茎叶提取物分离效果的影响；
[0036]图16显示柱温35℃对苍术茎叶提取物分离效果的影响；
[0037]图17显示流速0.8mL/min对苍术茎叶提取物分离效果的影响；
[0038]图18显示流速1.0mL/min对苍术茎叶叶提取物分离效果的影响；
[0039]图19显示流速1.2mL/min对苍术茎叶提取物分离效果的影响；
[0040]图20显示苍术茎叶提取物特征指纹图谱；
[0041]图21为HPLC指纹图谱中10批次苍术茎叶提取物样品叠加图；
[0042]图22为10批苍术茎叶提取物聚类图；
[0043]图23显示主成分分析；
[0044]图24显示苍术茎叶提取物抑菌活性回归系数(PLS)；
[0045]图25显示苍术茎叶提取物抑菌活性VIP值(PL本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种苍术茎叶HPLC指纹图谱质量评价方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤(1)制备待测苍术茎叶样品的茎叶提取物溶液和苍术茎叶标准品的茎叶提取物溶液；(2)将上述得到的提取物溶液分别进行HPLC色谱分析，其中，HPLC色谱分析的条件为：流动相为甲醇
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0.1vol％三氟乙酸系统，流速为1mL/min、柱温30℃、检测波长260nm、分析时间为40min在检测波长260nm、柱温30℃、流速0.8mL/min，以甲醇
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0.1vol％三氟乙酸溶液为流动相，进行梯度洗脱，进样体积为10μL，梯度洗脱程序为：洗脱梯度0～15min，5％甲醇～35％的0.1％三氟乙酸
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水，15～25min，35％甲醇～45％的0.1％三氟乙酸
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水，25～30min，45％甲醇～60％的0.1％三氟乙酸
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水；30～40min，60％甲醇～95％的0.1％三氟乙酸
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...
【专利技术属性】
技术研发人员：李秀梅，戴小枫，杨娟，石冬冬，田薇，
申请(专利权)人：中国农业科学院饲料研究所，
类型：发明
国别省市：
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