本发明专利技术公开了一种用于诊断癌症的分子标志物及试剂盒，尤其是BEND4基因启动子区DNA甲基化作为分子标志物在制备诊断癌症产品中的应用。本发明专利技术首次通过MSP的方法在胰腺癌、乳腺癌和食管癌中发现BEND4启动子区频繁发生高甲基化，并发现BEND4参与DNA损伤修复的NHEJ通路，BEND4甲基化是ATM抑制剂结合顺铂等化疗药物杀伤肿瘤细胞的协同致死标志物。本发明专利技术还提供了用于检测BEND4基因启动子区甲基化状态的引物、试剂盒。应用本发明专利技术引物、试剂盒来检测BEND4基因启动子区高甲基化状态可作为胰腺癌、乳腺癌和食管癌诊断、疗效观察、预后判断、微小残留病检测等的有力手段，而且，操作简便、稳定性好，具有深远的临床意义和推广性。具有深远的临床意义和推广性。具有深远的临床意义和推广性。
【技术实现步骤摘要】
一种用于诊断癌症的分子标志物及试剂盒
[0001]本专利技术涉及生物
更具体地，涉及一种用于诊断癌症的分子标志物及试剂盒。
技术介绍
[0002]胰腺癌(pancreatic cancer,PC)是最难治的癌症之一，被认为在消化系统肿瘤中预后最差。尽管采用不同的手术治疗方案和辅助治疗以及新辅助化疗来治疗PC，但总体5年生存率仍不超过8％(Bray F,Ferlay J.Global cancer statistics2018:GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36cancers in 185countries.CA Cancer J Clin.2018Nov；68(6):394
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424.；Siegel RL,Miller KD.CA Cancer J Clin.2017Jan；67(1):7
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30.)。PC患者的高死亡率主要归因于其早期缺乏典型症状和侵袭性局部侵袭。PDAC(pancreatic ductal adenocarcinoma,PDAC)是迄今为止最常见的类型，占原发性胰腺癌的85％以上，因此“胰腺癌”的大多数属性都与这种肿瘤类型有关。PDACs在头部明显比胰腺的其余部分更常见。绝大多数是实体瘤，尽管偶尔它们表现为囊性肿块或显示一些囊性区域。PDAC倾向于非常隐蔽地浸润周围组织，而不会形成致密的肿块病变，在绝大多数情况下，其大小小于7.0厘米。PDAC的特点是显著的结缔组织增生，其中间质成分占肿瘤总体积的70％以上。PDAC的唯一治愈方法是手术切除(Masiak
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Segit W,Rawicz
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Pruszy
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ski K.Surgical treatment of pancreatic cancer.Pol PrzeglChir.2018Apr 30；90(2):45
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53.)；然而，由于就诊时出现局部晚期或转移性疾病，大约80％的患者无法接受手术。就诊时，只有10％
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20％的患者适合切除，30％
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40％是不可切除的/局部晚期，超过50％的患者在首次就诊时被发现患有转移性疾病(Shinde RS,Bhandare M.Cutting
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edge strategies for borderline resectable pancreatic cancer.Ann Gastroenterol Surg.2019Apr 25；3(4):368
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372.)。
[0003]食管癌(esophageal cancer,EC)是所有胃肠道恶性肿瘤中侵袭性最强的一种。全球5年总生存率为15％至25％，它是男性癌症相关死亡的第六大原因(Watanabe M,Otake R.Recent progress in multidisciplinary treatment for patients with esophageal cancer.Surg Today.2020Jan；50(1):12
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20.)。中国是食管癌的高危地区。2015年全国食管癌发病率居所有恶性肿瘤第五位，死亡率居第四位(Li J,Ma S.History and current situation of neoadjuvant treatment for locally advanced esophageal cancer.Thorac Cancer.2021Sep；12(17):2293
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2299.)。手术、化疗和放疗仍是食管癌的主要治疗方法，但术后症状如食欲减退、早期饱腹、吞咽困难、误吸和反流等可影响患者的生活质量(Elliott JA,Docherty NG.Weight Loss,Satiety,and the Postprandial Gut Hormone Response After Esophagectomy:A Prospective Study.Ann Surg.2017Jul；266(1):82
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90.)。食管癌的两种主要组织学亚型是鳞状细胞癌和腺癌，在中国食管鳞癌占食管癌的90％以上，而欧洲国家及南北美洲以腺癌为主。不同病理类型食管鳞癌的危险因素也不同，包括性别、种族、吸烟、饮酒、饮食、营养状况和遗传因素。通常食管癌被诊断时已处于
晚期，因此更好地了解食管癌发病机制的分子机制对于食管癌患者的临床诊断和治疗至关重要。
[0004]乳腺癌(Breast cancer,BC)是最常见的癌症，也是全球女性癌症死亡的主要原因之一。乳腺癌是一种复杂的异质性疾病，根据组织学特征分为激素受体阳性(雌激素受体ER和孕激素受体PR)、人表皮生长因子受体2过表达(HER
2+
)和三阴性乳腺癌(TNBC)(Nagini S.Breast Cancer:Current Molecular Therapeutic Targets and New Players.Anticancer Agents Med Chem.2017；17(2):152
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163.)。乳腺癌发病的确切机制尚不清楚，表达HR的BC是最普遍的BC类型，在发达国家占60
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70％的BC病例，仅为绝经前妇女。因此，激素治疗是最常用的治疗方法。三阴性乳腺癌是乳腺癌中恶性程度最高的亚型，占所有乳腺癌病例的10％
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20％(Tian T,Zhao Y.Circular RNA:A potential diagnostic,prognostic,and therapeutic biomarker for human triple
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negative breast cancer.MolTher Nucleic Acids.2021Jul 2；26:63
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80.)。遗传因素和环境因素可能会影响乳腺癌的发生和进展，乳腺癌的危险因素包括年龄增加、种族、月经初潮史、乳房特征、生殖模式、激素使用、酒精使用、烟草使用、饮食、身体活动和身体习惯(Winters S,Martin C.Breast Cancer Epidemiology,Prevention,and Screening.ProgMolBiolTransl Sci.2017；151:1
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32.)。
[0005]随着后基因组时代的到来，表观遗传学(Epigenetics)已成为生命学科的研究前沿。在肿瘤领域中，表观遗传学研究主要集中DNA甲基化及组蛋白乙酰化上。DNA甲基化修饰是基因组表观遗传调控中主要的方式，人类肿瘤的发生、发展与DNA甲基化的异常有关，基因启动子区CpG岛高甲基化可导致抑癌基因表达沉默进而导致肿瘤发生。DNA甲基化是指在甲基化转移酶的作用下，以s
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【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.BEND4基因启动子区DNA片段作为分子标志物在制备诊断癌症产品中的应用，其特征在于，所述癌症为胰腺癌、食管癌或乳腺癌。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述BEND4基因启动子区DNA片段的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，且包含至少一个甲基化位点。3.检测BEND4基因启动子区DNA片段甲基化状态的物质在制备诊断癌症产品中的应用，其特征在于，所述癌症为胰腺癌、食管癌或乳腺癌。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述BEND4基因启动子区DNA片段的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，且包含至少一个甲基化位点。5.一种诊断癌症的试剂盒，其特征在于：包括用于检测BEND4基因启动子区甲基化状态的物质，所述癌症为胰腺癌、食管癌或乳腺癌。6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述用于检测BEND4基因启动子区甲基化状态的物质针对BEND4基因启动子区核苷酸序列如SEQ ID No.1所示的DN...
【专利技术属性】
技术研发人员：郭明洲，张美英，吕红慧，苏小茉，姚远新，于咏，
申请(专利权)人：中国人民解放军总医院第一医学中心，
类型：发明
国别省市：
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