一种红藻硫酸低聚糖及其制备方法与应用技术

本发明专利技术公开了一种红藻硫酸低聚糖及其制备方法与应用，其包括：将红藻粉末、超纯水与果葡糖浆混合，获得预发酵物料；将预发酵物料灭菌后，接入乳杆菌发酵培养6～36h，获得发酵料；将发酵料灭菌后，离心，收集上清液；向上清液加入2～5倍体积的无水乙醇，过程中不断搅拌，静置过夜，离心，收集沉淀；将沉淀冻干后，复溶，上样于DEAE

【技术实现步骤摘要】
一种红藻硫酸低聚糖及其制备方法与应用


[0001]本专利技术涉及生物医药
，具体涉及一种红藻硫酸低聚糖及其制备方法与应用。

技术介绍

[0002]肥大细胞在如食物过敏等机体炎症反应的效应阶段起着至关重要的作用，肥大细胞因表面存在大量FcεRI受体，可以与IgE特异性结合，当肥大细胞受抗原刺激激活后能够迅速释放大量β
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氨基己糖苷酶等颗粒物质和组胺等炎症因子，可以在组织内引起速发型过敏反应或炎症。根据肥大细胞脱颗粒特性建立的Anti
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DNP
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IgE/BSA大鼠嗜碱性粒细胞经典脱颗粒模型被广泛应用于肥大细胞稳定剂的筛选及抗组胺药物活性评价等。被动皮肤过敏反应，也称PCA反应(PCA reaction)，是利用如DNP
‑
BSA/HSA等半抗原刺激IgE敏化小鼠，并利用肥大细胞特异性染料甲苯胺蓝进行现象扩大，通过小鼠耳廓蓝斑反应小鼠被动皮肤过敏症状严重程度，以此来评价天然活性物质在体内对肥大细胞激活的抑制作用。
[0003]研究表明硫酸酯基是酸性多糖的主要活性基团，ι
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卡拉胶构型多糖的生物活性也明显高于单硫酸基团的κ
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卡拉胶构型多糖，因此刺麒麟菜多糖在生物医药领域也有着很大的发展前景。但植物纤维多糖往往存在分子量较大、黏度高、溶解性差等特征，导致加工利用困难，生物利用度低，活性不能达到预期效果。
[0004]随着科技的不断进步，目前也开发出了一系列改性多糖的方法，但大多依靠高温高压、强酸强碱、酶解、超声等处理方式。高温高压和超声处理对于多糖的碳环结构以及活性基团尤其是硫酸根具有破坏作用；强酸强碱是制备卡拉胶材料常用的方式，但会造成环境污染和水资源的浪费；酶法反应安全温和，但特异性较强，往往容易过度降解反而降低多糖的溶液稳定性；上述方式对于天然多糖的物理性质均有不同程度的改善但容易对生物活性造成负影响，破坏营养结构。
[0005]因此开发一种温和的改性制备方式并以此得到溶解性好、生物利用度高的具有肥大细胞稳定活性的红藻硫酸低聚糖十分有意义。

技术实现思路

[0006]为了解决上述问题，本专利技术提出一种红藻硫酸低聚糖及其制备方法与应用，该方法制得的红藻硫酸低聚糖可以通过稳定肥大细胞形态抑制Ca
2+
内流，影响肥大细胞的激活并进一步缓解小鼠被动皮肤过敏症状。
[0007]为了实现上述目的，本专利技术的实施例在一方面提出了一种红藻硫酸低聚糖的制备方法，其包括：
[0008]将红藻粉末、超纯水与果葡糖浆混合，获得预发酵物料；
[0009]将所述预发酵物料灭菌后，接入乳杆菌发酵培养6～36h，获得发酵料；
[0010]将所述发酵料灭菌后，离心，收集上清液；
[0011]向所述上清液加入2～5倍体积的无水乙醇，过程中不断搅拌，静置过夜，离心，收
集沉淀；
[0012]将所述沉淀冻干后，复溶，上样于DEAE
‑
52纤维素柱，利用不同浓度NaCl溶液阶段洗脱，收集630nm下吸光度大于0.5的部分，得到红藻硫酸低聚糖。
[0013]根据本专利技术实施例的一种红藻硫酸低聚糖的制备方法，该方法利用生物改性制备的红藻硫酸低聚糖分子量在2～50kDa，硫酸根含量在10％～30％，表观粘度在0.6～1.2mPa.s，溶解度在80％～95％；并可以通过稳定肥大细胞形态抑制Ca
2+
内流，影响肥大细胞的激活并进一步缓解小鼠被动皮肤过敏症状；该方法反应温和、操作简便、绿色安全无污染，可以满足食品加工安全要求。
[0014]另外，根据本专利技术上述实施例提出的一种红藻硫酸低聚糖的制备方法，还可以具有如下附加的技术特征：
[0015]可选地，所述乳杆菌为清酒乳杆菌Lactobacillus sakei subsp.Sakei。
[0016]可选地，所述乳杆菌的接菌量为0.5％～8.0％的OD
600
值为1.5～2.2的活化菌液。
[0017]可选地，第一次灭菌条件为100～134℃，5～30min；第二次灭菌条件为80～100℃，1～30min。
[0018]可选地，离心条件为6000～8000r/min，离心5～10min。
[0019]可选地，NaCl溶液的洗脱浓度为0、0.5mol/mL、1mol/mL、2mol/mL。
[0020]可选地，红藻粉末与超纯水按照1:50～1:70混合，加入1～5％果葡糖浆。
[0021]本专利技术的实施例在另一方面提出了一种红藻硫酸低聚糖，其采用上述的制备方法制得。
[0022]本专利技术的实施例在又一方面提出了上述红藻硫酸低聚糖在制备肥大细胞稳定剂中的应用。
[0023]本专利技术的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本专利技术的实践了解到。
附图说明
[0024]图1为根据本专利技术实施例1的采用DEAE
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52纤维素柱进行不同浓度NaCl溶液洗脱的纯化曲线；
[0025]图2为根据本专利技术对比例1的采用DEAE
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52纤维素柱进行不同浓度NaCl溶液洗脱的纯化曲线；
[0026]图3为根据本专利技术实施例的F
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ESO
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3与L
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ESP
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3的单糖组成测定结果；
[0027]图4为根据本专利技术实施例的L
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ESP
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3与F
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ESO
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3的高效凝胶渗透色谱图；
[0028]图5为根据本专利技术实施例的L
‑
ESP
‑
3与F
‑
ESO
‑
3的流变学表观粘度分析结果；
[0029]图6为根据本专利技术实施例的L
‑
ESP
‑
3与F
‑
ESO
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3的傅里叶红外光谱图；
[0030]图7为根据本专利技术实施例的L
‑
ESP
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3与F
‑
ESO
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3对肥大细胞激活抑制作用的脱颗粒效率；
[0031]图8为根据本专利技术实施例的L
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ESP
‑
3与F
‑
ESO
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3对肥大细胞激活抑制作用的组胺水平；
[0032]图9为根据本专利技术实施例的L
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ESP
‑
3与F
‑
ESO
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3对胞内Ca
2+
含量的测定结果；
[0033]图10为根据本专利技术实施例的L
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ESP
‑
3与F
‑
ESO
‑
3对小鼠被动皮肤过敏症状本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种红藻硫酸低聚糖的制备方法，其特征在于，包括：将红藻粉末、超纯水与果葡糖浆混合，获得预发酵物料；将所述预发酵物料灭菌后，接入乳杆菌发酵培养6～36h，获得发酵料；将所述发酵料灭菌后，离心，收集上清液；向所述上清液加入2～5倍体积的无水乙醇，过程中不断搅拌，静置过夜，离心，收集沉淀；将所述沉淀冻干后，复溶，上样于DEAE
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52纤维素柱，利用不同浓度NaCl溶液阶段洗脱，收集630nm下吸光度大于0.5的部分，得到红藻硫酸低聚糖。2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述乳杆菌为清酒乳杆菌Lactobacillus sakei subsp.Sakei。3.如权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，所述乳杆菌的接菌量为0.5％～8.0％的OD
600
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【专利技术属性】
技术研发人员：刘光明，张军，刘庆梅，刘艳，谷福蝶，唐金稳，
申请(专利权)人：集美大学，
类型：发明
国别省市：