一种痰液保存裂解液及其试剂盒以及应用制造技术

本发明专利技术提供一种痰液保存裂解液及其试剂盒以及应用，痰液保存裂解液包括：0.5～1.5M强碱液，选自：NaOH、KOH中的任意一种；5～12％表面活性剂，选自：Triton X

【技术实现步骤摘要】
一种痰液保存裂解液及其试剂盒以及应用


[0001]本专利技术涉及生物检测
，更具体地涉及一种痰液保存裂解液及其试剂盒以及应用。

技术介绍

[0002]大多数呼吸道病原体的检测都需要对其核酸进行提取。针对不同的样本类型以及病原体特性，需要建立不同的提取方法和流程。这些病原体中，结核分枝杆菌的提取一直是困扰临床的难题之一。
[0003]结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)，俗称结核杆菌或结核菌，是专性需氧的一类细菌，抗酸染色阳性。该菌是引起人和动物结核病的病原菌，可侵犯全身各器官，但是由于嗜氧的原因主要以肺结核为最多见，结核病是一种古老的疾病，呈全球分布态势，在细菌感染性疾病中占致死原因的首位。因此，对结核分枝杆菌的及时、高效、准确的检测，对预防、治疗结核分枝杆菌引起病症起着重要作用。
[0004]但是，无论是萋
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尼(Ziehl
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Neelsen)抗酸染色法，还是其他传统诊断方法，结核分支杆菌需要4
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5周的体外培养，不仅用时较长，操作复杂，容易污染，而且易出现假阴性结果而出现大量的漏检。而分子生物学诊断技术，每毫升中只需含几个细菌即可获得阳性结果，操作简单，特异性高，用时较短，可对结核分枝杆菌进行快速诊断，因而颇受临床医院结核诊断的推崇。但是该技术对检测样本的DNA纯度和浓度有一定要求，而结核分枝杆菌的细胞壁中含有大量脂质，一般常用的溶菌酶、蛋白酶甚至裂解剂无法完全破裂结核分支杆菌的细胞膜而释出核酸。
[0005]有国内文献报导了一种痰液保存方法和痰液中结核分枝杆菌的DNA提取方法，该方法包括：(1)痰液液化：将含有结核分枝杆菌的痰液在1N NaOH液化后转移至TE缓冲液中，(2)结合分支杆菌灭活：在75～85℃的条件下，处理30～60分钟达到细菌灭活的目的，(3)破菌裂解：随后通过涡旋振荡和超声分散处理达到细菌破碎的目的，然后加入溶菌酶并在37℃的条件下水浴消化2～24小时才能得到破壁产物，用时较长且操作繁琐，而且更加容易增加实验室污染以及操作人员感染的机率。
[0006]显然，现有痰液保存液的液化和灭活以及核酸提取方法存在以下缺陷：
[0007]1)灭活耗时长。跟一般细菌用高温灭活5
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10分钟不同，结核分枝杆菌由于细胞壁内蜡质结构占60％左右导致其对物理和化学因素的作用具有非常强的抵抗力，需要采取75～85℃处理30～60分钟的方法进行灭活。
[0008]2)样本需要液化。由于痰液样本的特殊性，样本需要先加入1N NaOH中进行液化后方可转移至保存液75～85℃处理30～60分钟进行灭活后，震荡液化，有些更加复杂的核酸提取试剂还要加入专门的试剂后进行震荡液化。
[0009]3)裂解困难。常用的溶菌酶或者蛋白酶无法完全破裂细胞膜从而释放出核酸，以致PCR假阴性造成漏检，而且破壁和灭活时间长且操作繁琐，因而不适合临床大规模推广和应用。
[0010]因而，建立一种解决现有技术中呼吸道病原体尤其是针对结核分支杆菌检测方法耗时长、操作复杂、容易污染、假阴性高造成漏检、现有痰液保存液无法兼具保存液和核酸提取裂解液功能的适宜结核杆菌检测的痰液保存裂解液成为临床亟待解决的主要问题之一。

技术实现思路

[0011]本专利技术的目的是提供一种痰液保存裂解液及其试剂盒以及应用，从而解决现有技术中结核杆菌检测方法耗时长、操作复杂、容易污染、假阴性高造成漏检、现有痰液保存液无法兼具保存液和核酸提取裂解液功能的问题。
[0012]为了解决上述技术问题，本专利技术采用以下技术方案：
[0013]根据本专利技术的第一方面，提供一种痰液保存裂解液，包括：0.5～1.5M强碱液，所述强碱液选自：NaOH、KOH中的任意一种；5～12％(g/100mL)表面活性剂，所述表面活性剂选自：Triton X
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100、SDS、N
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月桂酰肌氨酸钠、Tween
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80、CTAB中的至少一种或其组合；4～8M蛋白变性剂，所述蛋白变性剂选自：盐酸胍、TCEP盐酸盐、尿素中的任意一种或其组合；0.05～0.15M金属离子螯合剂；适量防腐剂；以及12～20％v/v溶蜡剂，所述溶蜡剂选自：石油醚、戊烷、己烷、氯仿中的任意一种或其组合。
[0014]所述溶蜡剂的含量为16～18％v/v。
[0015]所述防腐剂选自：硫酸链霉素、苯甲酸钾、山梨酸钾中的任意一种或者组合。
[0016]所述金属离子螯合剂包括但不限于EDTA。
[0017]所述防腐剂的含量为0.2～0.8％(g/100mL)。
[0018]根据本专利技术的一个优选方案，提供一种痰液保存裂解液，包括如下含量的如下成分：KOH 0.8～1.2M，盐酸胍4～8M，TCEP盐酸盐1～3％，Triton X
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100 2～3％，N
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月桂酰肌氨酸钠3～4％，Tween
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80 1～2％，EDTA 0.05～0.15M，CTAB 1～3％，石油醚14～18％，硫酸链霉素40～60mg/L，苯甲酸钾0.4～0.6％。
[0019]根据本专利技术的另一优选方案，提供一种痰液保存裂解液，包括如下含量的如下成分：NaOH 0.8～1.2M，盐酸胍4～8M，TCEP盐酸盐1～3％，Triton X
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100 2～4％，N
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月桂酰肌氨酸钠3～5％，EDTA0.05～0.15M，CTAB 1～3％，石油醚14～18％，硫酸链霉素40～60mg/L，山梨酸钾0.4～0.6％。
[0020]根据本专利技术的又一优选方案，提供一种痰液保存裂解液，包括如下含量的如下成分：NaOH 1.0～1.2M，盐酸胍6～8M，TCEP盐酸盐2～3％，Triton X
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100 2～3％，N
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月桂酰肌氨酸钠3～4％，EDTA 0.1～0.15M，CTAB 2～3％，石油醚16～18％，硫酸链霉素50～60mg/L，山梨酸钾0.5～0.6％。
[0021]根据本专利技术的再一优选方案，提供一种痰液保存裂解液，包括如下含量的如下成分：NaOH 1M，盐酸胍6M，TCEP盐酸盐2％，Triton X
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100 3％，N
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月桂酰肌氨酸钠4％，EDTA 0.1M，CTAB 2％，石油醚16％，硫酸链霉素50mg/L，山梨酸钾0.5％。
[0022]应当理解的是，在本专利技术的说明书中，除了溶蜡剂的含量单位“％”为v/v，其他成分的含量“％”是指g/100mL。
[0023]根据本专利技术的第二方面，提供一种包括上述痰液保存裂解液的试剂盒。
[0024]根据本专利技术的第三方面，提供一种上述痰液保存裂解液的应用，所述应用包括：痰
液的保存和裂解、口咽拭子、鼻咽拭子、胸水以及肺泡灌洗液等类型样本的保存和裂解，除了结核杆菌的检测，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种痰液保存裂解液，其特征在于，包括：0.5～1.5M强碱液，所述强碱液选自：NaOH、KOH中的任意一种；5～12％表面活性剂，所述表面活性剂选自：Triton X
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100、SDS、N
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月桂酰肌氨酸钠、Tween
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80、CTAB中的至少一种或其组合；4～8M蛋白变性剂，所述蛋白变性剂选自：盐酸胍、TCEP盐酸盐、尿素中的任意一种或其组合；0.05～0.15M金属离子螯合剂；适量防腐剂；以及12～20％v/v溶蜡剂，所述溶蜡剂选自：石油醚、戊烷、己烷、氯仿中的任意一种或其组合。2.根据权利要求1所述的痰液保存裂解液，其特征在于，所述溶蜡剂的含量为16～18％。3.根据权利要求1所述的痰液保存裂解液，其特征在于，所述防腐剂选自：硫酸链霉素、苯甲酸钾、山梨酸钾中的任意一种或者组合。4.根据权利要求1所述的痰液保存裂解液，其特征在于，所述防腐剂的含量为0.2～0.8％。5.根据权利要求1所述的痰液保存裂解液，其特征在于，包括如下含量的如下成分：KOH 0.8～1.2M，盐酸胍4～8M，TCEP盐酸盐1～3％，Triton X
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1002～3％，N
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月桂酰肌氨酸钠3～4％，Tween
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80 1～2％，EDTA 0.05～0.15M，CTAB 1～3％，石油醚14～18％v/v，硫酸链霉素40～60mg/L，苯甲酸钾0.4～0.6％。6.根据权利要求1所述的痰液保...

【专利技术属性】
技术研发人员：何熲，何小明，张辉，包海波，韦鑫，疏翠，
申请(专利权)人：上海康黎医学检验所有限公司，
类型：发明
国别省市：