一种长链非编码RNA及其应用制造技术

本发明专利技术提出一种长链非编码RNA及其应用，属于风湿病分子生物学领域。lncRNA MAPKAPK5

【技术实现步骤摘要】
一种长链非编码RNA及其应用


[0001]本专利技术属于风湿病分子生物学领域，涉及一种长链非编码RNA及其应用。

技术介绍

[0002]长链非编码RNA(Long noncoding RNA,lncNA)是一种长度＞200nt的调节性非编码RNA，过去被认为是一种转“噪声”、“暗物质”，没有编码蛋白质能力。近年来许多研究表明，lncRNA可以在表观遗传、转录、转录后水平，也可以发挥海绵样作用，竞争性结合微小RNA(microRNA,miRNA)，影响靶基因的表达，调节下游通路，参与多种疾病的进展。
[0003]成纤维样滑膜细胞(fibroblast
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like synovial cells,FLS)是一种炎性细胞，是滑膜细胞的主要组成部分，分泌大量炎性细胞因子，长期的炎症刺激会导致关节肿痛、畸形、功能丧失等。炎性信号的刺激可以使FLS异常增殖、凋亡不足，从而产生多种炎性细胞因子，产生的炎性因子又不断地激活FLS，两者相互促进，形成恶性循环。免疫炎症反应和细胞凋亡不足与多种风湿病发病有关，例如类风湿关节炎、骨关节炎、强直性脊柱炎和痛风性关节炎等。因此，研究发现与细胞炎症和凋亡相关的lncRNA具有很大的临床应用价值。

技术实现思路

[0004]本专利技术利用全转录高通量测序技术分析RA患者lncRNAs，获得一种与细胞炎症反应和凋亡不足有关的lncRNA MAPKAPK5
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AS1，有潜力成为抑制风湿病患者滑膜炎症反应和促进滑膜细胞凋亡的新靶点。
[0005]本专利技术的所采用的具体技术方案为：一种长链非编码RNA，为lncRNA MAPKAPK5
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AS1，其cDNA序列如SEQ ID No：1所示。
[0006]本专利技术另一目的在于提供上述长链非编码RNA以及miR
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146a
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3p作为分子干预靶点在调控细胞炎症反应和凋亡不足中的应用，miR
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146a
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3p序列如SEQ ID No：2所示。
[0007]本专利技术所述长链非编码RNA作为miRNA分子海绵特异性结合miR
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3p，从而抑制miRNA的功能；miR
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146a
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3p功能受到抑制后能够促进SIRT1基因的表达，从而对细胞炎症反应和凋亡不足进行调节。
[0008]本专利技术另一目的在于提供所述长链非编码RNA以及miR
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146a
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3p作为分子干预靶点在制备治疗与细胞炎症反应和凋亡不足有关风湿病的药物中的应用。
[0009]所述与细胞炎症反应和凋亡不足有关的风湿病包括类风湿关节炎、强直性脊柱炎、骨关节炎或痛风性关节炎。
[0010]本专利技术一项具体的研究应用，长链非编码RNA作为分子干预靶点在抑制成纤维样滑膜细胞炎症反应、促进成纤维样滑膜细胞凋亡的药物中的应用。
[0011]本专利技术利用利用全转录高通量测序技术分析RA患者中得到30个差异表达的lncRNAs，其中本专利技术所述lncRNA MAPKAPK5
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AS1在RA患者中表达下调。RT
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qPCR证明lncRNA MAPKAPK5
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AS1表达变化与高通量测序结果一致，在成纤维样滑膜细胞(FLS)的表达趋势与PBMCs中一致。RACE反应得到lncRNA MAPKAPK5
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AS1的全长序列，位于12q24.12
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q24.13。亚
细胞定位分析lncRNA MAPKAPK5
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AS1主要表达于FLS的细胞质中。
[0012]本专利技术研究表明体外过表达lncRNA MAPKAPK5
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AS1，显著抑制FLS的炎症反应、促进细胞的凋亡，体外干扰lncRNA MAPKAPK5
‑
AS1，显著促进FLS的炎症反应、抑制细胞的凋亡。测序结果分析与ceRNA预测结合Luciferase检测提示lncRNA MAPKAPK5
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AS1与miR
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3p相结合，调节与炎症反应和凋亡不足相关的靶基因SIRT1的表达。
[0013]本专利技术研究提示lncRNA MAPKAPK5
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AS1有可能通过调节与细胞炎症反应和凋亡不足有关的基因表达影响FLS的炎症和凋亡，有潜力成为抑制炎症反应和促进细胞凋亡的新靶点。
附图说明
[0014]图1为本专利技术所述的lncRNA MAPKAPK5
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AS1(图中MK5
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AS1代表lncRNA MAPKAPK5
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AS1，下同)的表达趋势及分布。图1A为RT
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qPCR检测30例RA患者和30例正常人PBMCs中lncRNA MAPKAPK5
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AS1的表达变化(以β
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actin内参)，与正常人相比，RA患者PBMCs中的lncRNA MAPKAPK5
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AS1表达降低(
***
p<0.001)，与测序结果一致。图1B为RT
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qPCR检测lncRNA MAPKAPK5
‑
AS1在RA
‑
FLS中的表达(以β
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actin内参)，用TNF
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ɑ
刺激后，lncRNA MAPKAPK5
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AS1表达降低(
***
p<0.001)，与在PBMCs中表达结果一致。图1C为FISH实验结果表明，lncRNA MAPKAPK5
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AS1位于RA
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FLS的细胞质中。
[0015]图2为本专利技术所述的干扰和过表达lncRNA MAPKAPK5
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AS1对RA
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FLS炎症和凋亡的影响。图2A为ELISA实验检测干扰和过表达lncRNA MAPKAPK5
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AS1对RA
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FLS炎症的影响，分别是炎症细胞因子IL
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8和IL
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10。图2B为Western Blotting实验检测干扰和过表达lncRNA MAPKAPK5
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AS1对RA
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FLS凋亡蛋白的影响，分别的凋亡蛋白Bax和Bcl
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2。图2C为Annexin V
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TITC/PI染色，流式细胞技术检测干扰lncRNA MAPKAPK5
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AS1对RA
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FLS细胞凋亡的影响，图2D柱状图为流式检测不同实验组RA
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FLS细胞凋亡率统计图本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种长链非编码RNA，为lncRNA MAPKAPK5
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AS1，其cDNA序列如SEQ ID No：1所示。2.如权利要求1所述的长链非编码RNA以及miR
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146a
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3p作为分子干预靶点在调控细胞炎症反应和凋亡不足中的应用，miR
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146a
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3p序列如SEQ ID No：2所示。3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述长链非编码RNA作为miRNA分子海绵特异性结合miR
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146a
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3p，从而抑制miRNA的功能。4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述m...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘健，文建庭，万磊，王馨，王杰，
申请(专利权)人：安徽中医药大学第一附属医院安徽省中医院，
类型：发明
国别省市：