预防前列腺癌的药剂的筛选方法、硝唑尼特在制药中的应用技术

本发明专利技术公开一种预防前列腺癌的药剂的筛选方法、硝唑尼特在制药中的应用，包括以下步骤：S10、将前列腺癌细胞进行3D细胞培养，得肿瘤球状体；S20、将待筛选药剂配制成浓度为10μM的溶液，用溶液对肿瘤球状体进行细胞侵袭实验，并计算肿瘤球状体的侵袭面积，筛选出侵袭面积小于50％的肿瘤球状体对应的药剂，其中，待筛选药剂选自FDA上市及药典收录化合物库；S30、将筛选出的药剂配制成0～10μM的多个不同浓度梯度的溶液，并分别加入肿瘤球状体中培养后，计算肿瘤球状体的侵袭面积，筛选出侵袭面积小于70％的7个药剂；S40、测定7个药剂的IC50，筛选出IC50值小于28μM的药剂，即为预防前列腺癌的药剂。硝唑尼特安全性好，预防效果明显。明显。明显。

【技术实现步骤摘要】
预防前列腺癌的药剂的筛选方法、硝唑尼特在制药中的应用


[0001]本专利技术涉及生物医药
，特别涉及一种预防前列腺癌的药剂的筛选方法、硝唑尼特在制药中的应用。

技术介绍

[0002]前列腺癌是男性泌尿系统最常见的恶性肿瘤，全球癌症病发率居第四位。据估计，在2020年就有1414259例患者病发于前列腺癌，有375304例癌症患者死于前列腺癌。相比欧美国家，虽然我国的前列腺癌发病率较低，但是随着近年来我国社会人口老龄化，经济水平提高及人们饮食习惯改变，我国前列腺癌发病率逐年升高的趋势，严重威胁着我国中老年男性的健康。根据2013年中国前列腺癌发病现状和流行趋势分析显示，1998年中国男性前列腺癌发病率仅为3.52/10万，但至2008年发病率达到11.00/10万，10年间的年均增长比例为12.07％。前列腺癌骨转移是前列腺癌常见的并发症之一，也是患者发病和死亡的主要原因。前列腺癌在初始阶段，生长在局部的肿瘤可通过外科手术或放射疗法成功治疗，但是大约20～30％的患者会复发。虽然复发的患者一开始会对雄激素剥夺疗法或雄激素受体拮抗剂敏感，但是最终都会不可避免地发展为去势抵抗性前列腺癌(castration
‑
resistant prostate cancer,CRPC)。这一阶段会同时或随后迅速出现继发性肿瘤，90％的转移性去势抵抗性前列腺癌(mCRPC)都会转移到骨骼部位。尽管对于患有骨转移的CRPC患者建议使用denosumab或zoledronic acid预防或延迟骨骼相关事件(skeletal related events,SRE)，但在癌症特异性和总体生存方面未见明显疗效。目前，多西紫杉醇和卡巴他赛是唯一对mCRPC患者具有生存益处的化疗药物，但实际上所有mCRPC最终都会产生耐药性，多西紫杉醇治疗的骨转移患者预后仍然较差。

技术实现思路

[0003]本专利技术的主要目的是提出一种预防前列腺癌的药剂的筛选方法、硝唑尼特在制药中的应用，旨在筛选新的能够预防前列腺疾病的药剂。
[0004]为实现上述目的，本专利技术提出一种预防前列腺癌的药剂的筛选方法，包括以下步骤：
[0005]S10、将前列腺癌细胞进行3D细胞培养，得肿瘤球状体；
[0006]S20、将待筛选药剂配制成浓度为10μM的溶液，用所述溶液对所述肿瘤球状体进行细胞侵袭实验，并计算所述肿瘤球状体的侵袭面积，筛选出侵袭面积小于50％的肿瘤球状体对应的药剂，其中，所述待筛选药剂选自FDA上市及药典收录化合物库；
[0007]S30、将筛选出的所述药剂配制成0～10μM的多个不同浓度梯度的溶液，并分别加入肿瘤球状体中培养后，计算所述肿瘤球状体的侵袭面积，筛选出侵袭面积小于70％的7个药剂；
[0008]S40、测定所述7个药剂中至少部分药剂的IC50，筛选出IC50值小于28μM的药剂，即为预防前列腺癌的药剂。
[0009]可选地，步骤S10包括：
[0010]S11、用前列腺癌细胞PC3和连接体K369Q，构建前列腺癌高转移PC3
‑
KQ细胞；
[0011]S12、将所述前列腺癌高转移PC3
‑
KQ细胞进行3D细胞培养，得肿瘤球状体。
[0012]可选地，所述预防前列腺癌的药剂包括呋喃菌素、硝呋太尔、硝唑尼特和瑞他帕林。
[0013]进一步地，本专利技术还提出一种硝唑尼特在制备预防前列腺疾病的药物中的应用。
[0014]进一步地，本专利技术还提出一种硝唑尼特在制备预防前列腺癌的药物中的应用。
[0015]此外，本专利技术还提出一种硝唑尼特在制备预防前列腺癌骨转移的药物中的应用。
[0016]本专利技术提供的技术方案中，提出一种预防前列腺癌的药剂的筛选方法，先用高浓度的药物进行细胞侵袭实验，以在FDA上市及药典收录化合物库中进行第一次筛选，之后，设置药剂的浓度梯度，筛选出在低浓度下便可抑制侵袭面积的7个药剂，最后根据药剂的IC50值，筛选出IC50值小于28μM的药剂，本专利技术提出的药剂的筛选方法为高通量筛选中的三维筛选，能够在保持高通量特性的同时更真实地模拟体内癌症的微环境，此外，筛选出的硝唑尼特是FDA批准的药物，其药物安全性已被验证；硝唑尼特可从植物和动物来源大量获得，获取成本低。
附图说明
[0017]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅为本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
[0018]图1为本专利技术实施例前列腺癌高转移PC3
‑
KQ细胞和低转移PC3
‑
KR细胞的细胞迁移实验结果；
[0019]图2为本专利技术实施例经3D培养的前列腺癌高转移PC3
‑
KQ肿瘤球状体及前列腺癌低转移PC3
‑
KR肿瘤球状体的图像；
[0020]图3为本专利技术实施例第一次筛选的结果图；
[0021]图4为本专利技术实施例第二次筛选的三维结果图；
[0022]图5为本专利技术实施例第二次筛选的统计结果图；
[0023]图6为本专利技术实施例不同浓度下7个化合物中5个的抑制细胞球侵袭面积图；
[0024]图7为本专利技术实施例的NTZ预防小鼠前列腺癌骨转移的模型设计图；
[0025]图8为活体成像检验PC3
‑
KQ
‑
LUC构建的成功性检验图；
[0026]图9为活体成像检测NTZ抗前列腺癌骨转移效果图；
[0027]图10为本专利技术实施例的生物发光分析图；
[0028]图11为本专利技术实施例的Micro
‑
CT检测NTZ抗前列腺癌骨转移效果图；
[0029]图12为本专利技术实施例的在给药期间NTZ对小鼠体重影响图；
[0030]图13为本专利技术实施例的HE染色分析NTZ对癌细胞转移骨组织影响图。
[0031]本专利技术目的的实现、功能特点及优点将结合实施例，参照附图做进一步说明。
具体实施方式
[0032]为使本专利技术实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
[0033]另外，全文中出现的“和/或”的含义，包括三个并列的方案，以“A和/或B”为例，包括A方案、或B方案、或A和B同时满足的方案。此外，各个实施例之间的技术方案可以相互结合，但是必须是以本领域普通技术人员能够实现为基础，当技术方案的结合出现相互矛盾或无法实现时应当认为这种技术方案的结合不存在，也不在本专利技术要求的保护范围之内。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种预防前列腺癌的药剂的筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：S10、将前列腺癌细胞进行3D细胞培养，得肿瘤球状体；S20、将待筛选药剂配制成浓度为10μM的溶液，用所述溶液对所述肿瘤球状体进行细胞侵袭实验，并计算所述肿瘤球状体的侵袭面积，筛选出侵袭面积小于50％的肿瘤球状体对应的药剂，其中，所述待筛选药剂选自FDA上市及药典收录化合物库；S30、将筛选出的所述药剂配制成0～10μM的多个不同浓度梯度的溶液，并分别加入肿瘤球状体中培养后，计算所述肿瘤球状体的侵袭面积，筛选出侵袭面积小于70％的7个药剂；S40、测定所述7个药剂中至少部分药剂的IC50，筛选出IC50值小于28μM的药剂，即为预...

【专利技术属性】
技术研发人员：董金堂，黄青青，
申请(专利权)人：南方科技大学，
类型：发明
国别省市：